Платформа за имунизацију животиња

Платформа за имунизацију животиња углавном имунизује животиње породице Camelidae (алпака лиама и камиле), постављајући темеље за производњу нанотела.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Платформа за имунизацију животиња

Алфа Лајфтек-ови животињски извори су јасни, са дозволама за инспекцију и карантин, јасном генетском позадином, јасном учесталошћу имунизације и детаљним евиденцијама интервала имунизације, пружајући погодне услуге за производњу антитела. Углавном имунизује животиње породице Camelidae (алпака лиама и камиле), постављајући темеље за производњу нанотела. Поред тога, може имунизовати и обичне животиње (као што су новозеландски бели зечеви, мишеви и друге животиње) према потребним захтевима купаца за учесталошћу имунизације и имуногеношћу, екстраховати их и изоловати у PBMC, и користити их за накнадне експерименте (као што су развој моноклонских антитела, поликлонских антитела итд.). Купци могу сами да обезбеде своје имуногене, а ми ћемо спроводити строгу контролу квалитета на њима. Ако купци обезбеде вирусне имуногене, они морају бити инактивирани и ми ћемо спровести тестирање инактивације како бисмо осигурали безбедност. Истовремено, можемо прилагодити одговарајуће имуногене према потребама купаца.

Увод у имунизацију животиња

Приликом производње антитела животињског порекла, као што су моноклонска антитела, поликлонска антитела и нанотела, први корак је имунизација животиња и добијање одговарајућих Б ћелија, антитела или PBMC како би се припремила за даљу производњу антитела, промовисала основна научна истраживања, развили клинички дијагностички алати и олакшало откривање и развој нових лекова. Камиле, алпаке, лијаме и друге камиле из породице Camelidae могу да производе библиотеке нанотела (антитела са једним доменом) путем имунолошког сакупљања крви и екстракције PBMC. Зечеви и друге животиње могу бити имунизовани, а антитела се могу екстраховати из њихових тела. Након пречишћавања, могу се користити за производњу поликлонских антитела. Мишеви, пацови итд. могу се користити за производњу моноклонских антитела спајањем имунолошки екстрахованих Б ћелија са ћелијама мијелома. Пре имунизације, треба обратити пажњу на 3R принципе (замена, смањење, префињење), који могу значајно смањити број коришћених животиња на неопходни минимум, побољшати експерименталне поступке и минимизирати патњу животиња. Такође се морају поштовати правилан експериментални дизајн, избор одговарајућих антитела и строге процедуре валидације.

Класификација имуногена - производња нанотела

Врсте имуногена	Пример	Припрема имуногена	Белешке
Протеински имуногени	Ензими, протеини, бактеријски токсини и друге супстанце	Изаберите различите системе експресије протеина: E. coli, квасац, ћелије инсеката, ћелије сисара и систем без ћелија	Обратите пажњу на факторе као што су температура, време, pH вредност и инклузивна тела која утичу на експресију протеина
Нуклеински киселински имуногени	ДНК, РНК	ДНК имуноген: Конструишите плазмидну ДНК, клонирајте одговарајуће експресионе векторе за циљне гене, култивишите ћелије за амплификацију плазмидне ДНК и екстрахујте плазмидну ДНК високе чистоће РНК имуноген: Потребно је додати структуру шешира и полиА реп да би се спречила деградација	Приликом припреме ДНК имуногена, треба обратити пажњу на одговарајуће ћелије домаћина, а приликом припреме РНК имуногена треба обратити пажњу на спречавање деградације РНК.
Вирусни имуногени	Инактивирана вакцина са целим вирусом, подјединична вакцина, векторска вакцина са вирусом (аденовирус, лентивирус, итд.), mRAN вакцина.	Приликом припреме вакцине са инактивираним целим вирусом, вирус се прво инактивира ради повећања безбедности. Тестирање токсичности се користи да би се утврдило да ли је инактивација потпуна. Подјединичне вакцине захтевају само површинске протеине вируса као антигене и потребно је узети у обзир имунолошку ефикасност.	Адјувансе је потребно додати да би се обезбедили имуни ефекти, пажњу треба обратити на вирус који треба инактивирати, потребни су одговарајући титри вируса да би се осигурали имуни ефекти, а безбедност процеса припреме треба строго контролисати.

Процес или временска линија имунизације животиња

Избор животиња и припрема антигена

Избор животиња: Изаберите алпаке одговарајуће старости и здраве физичке грађе из здравих група и спроведите преглед крви и скрининг на болести како бисте били сигурни да нема заразних болести или других здравствених проблема.

Припрема имуногена: Имуногени су кључни за индуковање имуних одговора и захтевају избор одговарајућих протеина, пептида или других погодних супстанци на основу захтева циљног антитела.

Алпака се може имунизовати са 1-3 антигена истовремено, са укупном количином антигена од 1-2 мг по имунизацији и запремином мањом од 2 мл. Пре имунизације, антиген и адјуванс се емулгирају у односу 1:1 да би се формирала уједначена смеша, која се чува на 4 ℃.

Имунолошка алпака

Забележите празан број уха алпаке и започните експеримент имунизације. Убризгајте у лимфне чворове близу врата алпаке са обе стране, са по 2 тачке са сваке стране и приближно 0,4 мл емулгованог антигена убризганог у сваку тачку. Након имунизације, посматрајте пола сата да бисте потврдили да алпака нема симптоме нелагодности. Имунизацију треба примењивати сваке 2 недеље, са најмање 4 имунизације.

Прикупљање крви

Након 4 имунизације током 5-7 дана, сакупите 50 мл крви из вратне вене алпаке.

Одвајање серума

Узорци крви се прикупљају за имунолошку процену пре сваке имунизације антигеном, при чему се сваки пут узима 5 мл крви; Истог дана, крв је центрифугирана на 400 x g током 30 минута користећи претходно охлађену центрифугу на 25 ℃. Горњи слој серума је одвојен и сачуван за накнадно тестирање титра антитела.

Одвојени лимфоцити

Прво додајте 15 мл раствора за сепарацију ћелија, затим полако додајте 15 мл крви у епрувету за центрифугу од 50 мл. Будите пажљиви и спори при додавању крви како бисте спречили мешање крви и раствора за сепарацију. Претходно охлађену центрифугујте на 25 ℃, центрифугирајте на 400 x g током 30 минута и чувајте горњи серум у новој епрувети за центрифугу на -80 ℃; Користите пипету да аспирирате средњи памучни облик горњег слоја имуних ћелија у нову епрувету за центрифугу од 50 мл. Додајте 10 мл PBS пуфера на собној температури у сваку епрувету, центрифугирајте на 25 ℃ и 400 x g током 20 минута. Уклоните супернатант, додајте 5 мл PBS пуфера на собној температури у сваку епрувету, нежно добро промешајте, израчунајте број ћелија помоћу хемоцитометра, а затим центрифугирајте на 25 ℃ и 400 x g током 20 минута. Уклоните супернатант и растворите лимфоците добијене помоћу RNAiso Plus методе на основу броја ћелија да бисте добили 10^7/мл ћелијског лизата, који се чува на -80 ℃.

Слика 1: Шематски приказ различитих стратегија откривања антитела и експерименталних фаза које су укључене. (Извор слике: Лаустсен, Андреас Х. и др.)

Купци обезбеђују имуногене - строга контрола квалитета

Врсте имуногена	Захтев	Метода контроле квалитета
Узорци пептида / малих молекула	Услови растварања (углавном у зависности од тога да ли ће инактивирати фаге), молекуларна структура/пептидна секвенца, извештај о синтези (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS детекција
Узорци протеина	SDS-PAGE/WB, услови реконституције, пуфер, информације о етикети, укупна количина (20-50µg), концентрација, чистоћа итд.	SDS-PAGE/WB
Узорци ћелија	Тип ћелије (примарне ћелије/генски модификоване ћелије), облик ћелије (свеже/замрзнуто-одмрзнуто), тип раста (адхерентно/суспендовано), захтеви за медијум за култивацију, број обезбеђених ћелија, број обезбеђених ћелија, генски модификоване ћелије ради обезбеђивања стабилне експресије циљева скрининга (примарно антитело које одговара купцу), замрзнуто-одмрзнуте ћелије ради одређивања стопе опоравка	Углавном циљајући ћелије генски модификоване, користећи примарна антитела која је обезбедио купац за ELISA идентификацију циљне експресије (наша компанија обезбеђује HRP секундарна антитела), детекцију проточном цитометријом (наша компанија може да обезбеди флуоресцентна секундарна антитела).

Које су примене имунитета животиња?

+

Поликлонална антитела могу се произвести имунизацијом животиња, моноклонална антитела могу се произвести спајањем Б ћелија са ћелијама мијелома, а ПБМЦ се могу екстраховати из извора камила (алпака, камила, алпака, итд.) да би се произвели различити облици фрагмената антитела као што су нанотела, Fab фрагменти, scFv фрагменти антитела, итд.
Које су мере предострожности за имунитет животиња?

+

Да би се произвела наноантитела за животиње пореклом из камила, потребно је 5-6 имунизација. Узорке крви треба прикупити као контролу пре имунизације, са интервалом од 2 недеље између сваке имунизације. Након четврте имунизације, треба прикупити позитивну крв и неимунизовану негативну крв за ELISA тест како би се одредио титар. Ако је титар испод 10^6, број имунизација треба повећавати док титар не достигне одговарајући ниво. За друге имунизације животиња, као што су имунизација зечева (оптимални или уобичајени ниво протеинског антигена за имунизацију зечева је 50-1000µg), имунизација мишева (оптимални или уобичајени ниво протеинског антигена за имунизацију мишева је 5-50µg, што захтева 10^6 ћелија ако је у питању ћелија, и 10-50µg за нуклеинску киселину или угљене хидрате), имунизација коза (оптимални или уобичајени ниво протеинског антигена за имунизацију коза је 250-5000µg) итд., треба обратити пажњу на дозу, безбедност и ефикасност имуногена.
Како одабрати имуне животиње?

+

У зависности од врсте антитела које захтева купац, ако треба да произведете нанотела или друге фрагменте антитела, можете одабрати животиње изведене из камила (камиле, алпаке, алпаке) за имунизацију. Ако треба да произведете моноклонална или поликлонална антитела, потребно је да одаберете одговарајућу врсту на основу количине серума, антигена и извора антигена. Максимална количина серума за зечеве је 500 мл, што захтева малу количину антигена и примарни је избор за производњу поликлоналних антитела. Максимална количина серума за мишеве је 2 мл, а максимална количина серума за пацове је 20 мл, што је обично оптималан избор за моноклонална антитела. Антитела произведена од коза имају висок афинитет, а Алфа Лајфтех може прилагодити ексклузивни план имунизације за вас према вашим захтевима.
Да ли је потребно користити антигене заједно са адјувансима? Како одабрати?

+

Постоје две врсте адјуванса: на бази уља и на бази воде. Разумна употреба адјуванса је кључна за индуковање јаких антитела на растворљиве антигене. Продужено ослобађање адјуванса значи да се може користити мање доза антигена, а антитела су дуготрајнија. Прва ињекција треба да се користи у комбинацији са адјувансом. Генерално се препоручује употреба Фројндовог адјуванса када је количина имуногена мала.
Мере предострожности за имунизацију алпаке?

+

(1) Избор алпаке и антигена имунитета су кључ успешне имунизације. Избор добро пропорционалне камиле се не препоручује. Чистоћа и исправна конформација имуних антигена су кључне за скрининг одговарајућих антитела за накнадне примене након имунизације алпакама. Чистоћа протеинских антигена генерално није мања од 90%.

(2) Раздвајање лимфоцита: Благовремено раздвајање ћелија може ефикасно спречити хемолизу након узимања крви како би се постигао најбољи ефекат раздвајања.

(3) Имуни циклус може утицати на имуни одговор: имуни интервал од 1-2 недеље омогућава алпакама да имају добар имуни одговор на већину антигена.

независно развијени адјуванс

Наша јединствена формула адјуванса је оптимизована за имуни систем алпаке, пружајући већу потенцију и специфичност од традиционалних адјуваната.

Испорука имунизације
стандард

Обећавамо да ћемо завршити имунизацију у наведеном року, обезбедити серум високог титра и забележити сваки корак кроз детаљне извештаје.

Контрола квалитета пројекта

Сваки пројекат пролази кроз строге процесе контроле квалитета како би се осигурала испорука антитела која задовољавају високе стандарде купцима.

јасноАлпакаПозадина

Имамо здраву популацију алпака која пружа подршку разним програмима имунизације.

Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте у било ком тренутку.

Leave Your Message

Истакнута услуга

0102