Платформа за имунизацију животиња

Платформа за имунизацију животиња углавном имунизује животиње Цамелидае (Алпаца Лиама и Цамелс), постављајући основу за производњу нанотела.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Платформа за имунизацију животиња

Животињски извори Алпха Лифетецх-а су јасни, са дозволама за инспекцију и карантин, јасном генетском позадином, јасном учесталошћу имунизације и детаљним записима о интервалима имунизације, пружајући погодне услуге за производњу антитела. Углавном имунизује камелиде (Алпаца Лиама и Цамелс), постављајући основу за производњу нанотела. Поред тога, може имунизовати обичне животиње (као што су новозеландски бели зечеви, мишеви и друге животиње) у складу са потребном учесталошћу имунизације и захтевима за имуногеност купаца, екстраховати их и изоловати у ПБМЦ и користити их за накнадне експерименте (као што су моноклонска антитела, развој поликлонских антитела, итд.). Купци могу да обезбеде сопствене имуногене, а ми ћемо на њима спроводити строгу контролу квалитета. Ако купци обезбеде вирусне имуногене, они морају да буду инактивирани и ми ћемо спровести тестирање инактивације да бисмо обезбедили безбедност. Истовремено, можемо прилагодити и одговарајуће имуногене према потребама купаца.

Увод у имунизацију животиња

Када се производе антитела животињског порекла, као што су моноклонска антитела, поликлонска антитела и нанотела, први корак је имунизација животиња и добијање одговарајућих Б ћелија, антитела или ПБМЦ-а за припрему за даљу производњу антитела, промовисање основних научних истраживања, развој клиничких дијагностичких алата и олакшавање откривања и развоја нових лекова. Камиле, алпаке, Лиама и друге камиле у Цамелидае могу произвести библиотеке нанотела (антитела са једним доменом) кроз прикупљање имунолошке крви и екстракцију ПБМЦ. Зечеви и друге животиње се могу имунизирати и антитела се могу екстраховати из њихових тела. Након пречишћавања, могу се користити за производњу поликлонских антитела. Мишеви, пацови итд. могу се користити за производњу моноклонских антитела спајањем имуно екстрахованих Б ћелија са ћелијама мијелома. Пре имунизације треба обратити пажњу на 3Р принципе (замена, смањење, оплемењивање), који могу значајно смањити број животиња које се користе на неопходни минимум, побољшати експерименталне процедуре и минимизирати патњу животиња. Одговарајући дизајн експеримента, избор одговарајућих антитела и строге процедуре валидације такође се морају поштовати.

Класификација имуногена - производња нанотела

Врсте имуногена	Пример	Припрема имуногена	Напомене
Протеински имуногени	Ензими, протеини, бактеријски токсини и друге супстанце	Изаберите различите системе експресије протеина: Е. цоли, квасац, ћелије инсеката, ћелије сисара и систем без ћелија	Обратите пажњу на факторе као што су температура, време, пХ и инклузиона тела која утичу на експресију протеина
Имуногени нуклеинске киселине	ДНК, РНК	ДНК Имуноген: Конструишите плазмидну ДНК, клонирајте погодне векторе експресије за циљне гене, ћелије културе за амплификацију плазмидне ДНК и екстрахујте плазмидну ДНК високе чистоће РНК имуноген: потребно је додати структуру шешира и полиА реп да би се спречила деградација	Приликом припреме ДНК имуногена треба обратити пажњу на одговарајуће ћелије домаћина, а код припреме РНК имуногена треба обратити пажњу на спречавање деградације РНК.
Вирусни имуногени	Вакцина инактивирана целим вирусом, подјединична вакцина, вирусна векторска вакцина (аденовирус, лентивирус, итд.), мРАН вакцина.	Када се припрема вакцина инактивирана целим вирусом, вирус се прво инактивира да би се повећала безбедност. Тестирање токсичности се користи да би се утврдило да ли је инактивација потпуна. Подјединичне вакцине захтевају само површинске протеине вируса као антигене и треба да узму у обзир имунолошку ефикасност.	Потребно је додати адјувансе да би се обезбедили имунолошки ефекти, треба обратити пажњу на вирус који треба инактивирати, потребни су одговарајући титри вируса да би се обезбедили имунолошки ефекти, а безбедност процеса припреме треба строго контролисати.

Процес имунизације животиња или временска линија

Селекција животиња и припрема антигена

Селекција животиња: Од здравих група изаберите алпаке одговарајућег узраста и здраве грађе и извршите преглед крви и скрининг болести како бисте били сигурни да нема заразних болести или других здравствених проблема.

Припрема имуногена: Имуногени су кључ за изазивање имунолошких одговора и захтевају избор одговарајућих протеина, пептида или других погодних супстанци на основу захтева циљног антитела.

Алпака може бити имунизована са 1-3 антигена истовремено, са укупном количином антигена од 1-2 мг по имунизацији и запремином мањом од 2 мЛ. Пре имунизације, антиген и адјуванс се емулгују у односу 1:1 да би се формирала једнолична смеша, која се чува на 4 ℃.

Имунолошка алпака

Забележите број празног уха алпаке и започните експеримент имунизације. Убризгајте у лимфне чворове близу врата алпаке са обе стране, са 2 тачке на свакој страни и приближно 0,4 мЛ емулгованог антигена убризганог на свакој тачки. Након имунизације, посматрајте пола сата да бисте потврдили да алпака нема симптоме нелагодности. Имунизација треба да се спроводи сваке 2 недеље, са најмање 4 имунизације.

Сакупљање крви

Након 4 имунизације током 5-7 дана, сакупите 50 мл крви из вратне вене алпаке.

Одвајање серума

Узорци крви се сакупљају за процену имунитета пре сваке имунизације антигеном, са 5 мЛ крви сваки пут; Истог дана, крв је центрифугирана на 400 кг током 30 минута користећи претходно охлађену центрифугу на 25 ℃. Горњи слој серума је одвојен и ускладиштен за накнадно тестирање титра антитела.

Одвојите лимфоците

Прво додајте 15 мЛ раствора за одвајање ћелија, а затим полако додајте 15 мЛ крви у епрувету за центрифугу од 50 мЛ. Будите пажљиви и спори када додајете крв како бисте спречили мешање крви и раствора за одвајање. Претходно охлађени центрифугирајте на 25 ℃, центрифугирајте на 400 кг 30 минута и чувајте горњи серум у новој епрувети за центрифугирање на -80 ℃; Користите пипету да аспирирате средње имуне ћелије горњег слоја у облику памука у нову епрувету за центрифугу од 50 мл. Додајте 10 мЛ ПБС пуфера на собној температури у сваку епрувету, центрифугирајте на 25 ℃ и 400 кг 20 минута. Уклоните супернатант, додајте 5 мЛ ПБС пуфера на собној температури у сваку епрувету, нежно добро промешајте, израчунајте број ћелија помоћу хемоцитометра, а затим центрифугирајте на 25 ℃ и 400 кг током 20 минута. Уклоните супернатант и растворите лимфоците добијене помоћу РНАисо Плус на основу броја ћелија да бисте добили 10 ^ 7/мЛ ћелијског лизата, који се чува на -80 ℃.

Слика 1: Шематски приказ различитих стратегија откривања антитела и експерименталних фаза које су укључене. (Извор слике:Лаустсен, Андреас Х. ет ал.)

Купци обезбеђују имуногене - строгу контролу квалитета

Врсте имуногена	Рекуиремент	Метода контроле квалитета
Пептид / Узорци малих молекула	Услови растварања (углавном у зависности од тога да ли ће деактивирати фаге), молекуларна структура/пептидна секвенца, извештај о синтези (ХПЛЦ/МС/ХНМР)	ХПЛЦ/МС детекција
Узорци протеина	СДС-ПАГЕ/ВБ, услови реконституције, пуфер, информације на етикети, укупна количина (20-50 уг), концентрација, чистоћа, итд	СДС-ПАГЕ/ВБ
Целл Самплес	Тип ћелије (примарне ћелије/ћелије уређене геном), ћелијски облик (свеже/смрзнуто одмрзнуто), тип раста (адхерентан/суспендован), захтеви за медијумом за културу, број обезбеђених ћелија, број обезбеђених ћелија, ћелије уређене геном да би се обезбедила стабилна експресија циљева скрининга (корисно одговарајуће примарно антитело), замрзнуте одмрзнуте ћелије за одређивање стопе опоравка	Углавном циљање на ћелије уређене геном, коришћењем примарних антитела које испоручује купац за ЕЛИСА идентификацију циљне експресије (наша компанија обезбеђује ХРП секундарна антитела), детекцију проточном цитометријом (наша компанија може да обезбеди флуоресцентна секундарна антитела).

Које су примене имунитета животиња?

+

Поликлонална антитела се могу произвести имунизацијом животиња, моноклонска антитела се могу произвести спајањем Б ћелија са ћелијама мијелома, а ПБМЦ се могу екстраховати из извора камила (алпака, камила, алпака, итд.) да би се произвели различити облици фрагмената антитела као што су нанотела, Фаб фрагменти, фрагменти сцФв, итд.
Које су мере предострожности за имунитет животиња?

+

За производњу наноантитела за животиње добијене од камила, потребно је 5-6 имунизација. Узорке крви треба узети као контролу пре имунизације, са интервалом од 2 недеље између сваке имунизације. Након четврте имунизације, позитивна крв и неимунизована негативна крв треба да се сакупе за ЕЛИСА да би се одредио титар. Ако је титар испод 10 ^ 6, број имунизација треба повећати све док титар не достигне одговарајући ниво. За друге имунизације животиња као што је имунизација зечева (оптимални или уобичајени ниво протеинског антигена за имунизацију зечева је 50-1000уг), имунизација мишева (оптимални или уобичајени ниво протеинског антигена за имунизацију мишева је 5-50уг, што захтева 10 ^ 6 ћелија ако је ћелија, и гоат-нуцле ацид 10 имунизација (оптимални или уобичајени ниво протеинског антигена за имунизацију коза је 250-5000уг), итд., треба обратити пажњу на дозу, безбедност и ефикасност имуногена.
Како одабрати имуне животиње?

+

У зависности од врсте антитела које захтева купац, ако треба да произведете нанотела или друге фрагменте антитела, можете одабрати животиње добијене од камила (камиле, алпаке, алпаке) за имунизацију. Ако треба да произведете моноклонска или поликлонска антитела, потребно је да изаберете одговарајућу врсту на основу количине серума, антигена и извора антигена. Максимална количина серума за зечеве је 500 мл, што захтева малу количину антигена и примарни је избор за производњу поликлонских антитела. Максимална количина серума за мишеве је 2 мл, а максимална количина серума за пацове је 20 мл, што је обично оптималан избор за моноклонска антитела. Антитела произведена од коза имају висок афинитет, а Алпха Лифетецх може да прилагоди ексклузивни план имунизације за вас према вашим захтевима.
Да ли антигене треба користити заједно са адјувансима? Како одабрати?

+

Постоје две врсте помоћних средстава: на бази уља и на бази воде. Разумна употреба адјуванса је кључна за изазивање снажних одговора антитела на растворљиве антигене. Уздржано ослобађање адјуванса значи да се може користити мање доза антигена, а одговори антитела су дуготрајнији. Прву ињекцију треба користити у комбинацији са адјувансом. Генерално се препоручује употреба Фреундовог адјуванса када је количина имуногена мала.
Мере предострожности за имунизацију алпаке?

+

(1) Селекција алпаке и антигена имунитета су кључ успешне имунизације. Није препоручљиво одабрати камилу добро пропорционалне величине. Чистоћа и исправна конформација имуних антигена су од кључне важности за скрининг одговарајућих антитела за накнадну примену након имунизације алпакама. Чистоћа протеинских антигена генерално није мања од 90%.

(2) Одвајање лимфоцита: Правовремено одвајање ћелија може ефикасно спречити хемолизу након прикупљања крви како би се постигао најбољи ефекат раздвајања.

(3) Имуни циклус може утицати на имуни одговор: имуни интервал од 1-2 недеље омогућава алпакама да имају добар имуни одговор на већину антигена.

независно развијен адјуванс

Наш јединствени адјуванс формуле је оптимизован за имуни систем алпаке, пружајући већу потенцију и специфичност од традиционалних адјуванса.

Испорука имунизације
стандардне

Обећавамо да ћемо завршити имунизацију у наведеном року, обезбедити висок титар серума и забележити сваки корак кроз детаљне извештаје.

Контрола квалитета пројекта

Сваки пројекат пролази кроз строге процесе контроле квалитета како би се осигурала испорука антитела која задовољавају високе стандарде купцима.

јасноАлпацаПозадина

Имамо здраву популацију алпаке која пружа подршку за различите програме имунизације.

Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте у било које време.

Leave Your Message

Феатуред Сервице

0102