Служба за сазревање афинитета антитела

Алпха Лифетецх Инц.може понудити услугу сазревања афинитета антитела коришћењем технологија мутације и селекције. Обично користимо сцФв као формат антитела у процесима услуге сазревања афинитета и моновалентни дисплеј фагемид систем који је коришћен за смањење ефеката авидности током скрининга на везивање антигена. Наш професионални тим такође може да пружи услуге сазревања афинитета за антитела са једним доменом.

Алпха Лифетецх Инц.је поносан што нуди свеобухватне услуге како би задовољио различите потребе глобалних клијената. Наш циљ је да разумемо и одговоримо на захтеве различитих купаца и да помогнемо у решавању било каквих надолазећих и новонасталих проблема у истраживачком раду.

Шта је сазревање афинитета?

Сазревање афинитета је процес којим се антитела подвргавају поновљеним мутацијама и селекцији да би се побољшао њихов афинитет за специфичне антигене. Углавном се јављају у герминативном центру секундарних лимфоидних органа, Б ћелије пролазе кроз соматску хипермутацију и селекцију под утицајем Т ћелија и фоликуларних дендритичних ћелија.
Током процеса сазревања афинитета, Б ћелије са површинским имуноглобулинским рецепторима ниског афинитета се активирају сусретом са антигенима и пролазе кроз пролиферацију и диференцијацију. Кроз сазревање афинитета соматске хипермутације, случајне супституције нуклеотида се јављају у варијабилном региону имуноглобулинских гена, што доводи до производње различитих варијанти антитела. Након соматске хипермутације, селекција вођена антигеном се врши на Б ћелијама са мутираним имуноглобулинским рецепторима. Б ћелије које производе антитела са повећаним антигенским афинитетом се првенствено задржавају и дозвољавају да се размножавају, док Б ћелије са смањеним или непромењеним афинитетом пролазе кроз апоптозу. Овај итеративни процес мутације и селекције доводи до производње клонова Б ћелија, производећи антитела са постепено већим афинитетом за антиген.

Служба за сазревање афинитета антитела

Главне предности метода заснованих на ПЦР-у су да су мутације прецизно циљане на амплификовани фрагмент; стопу грешке је лако контролисати, а метода се брзо и лако подешава и не користи опасне хемикалије. Добро је познато да Так ДНК полимераза дуплира ДНК са малом верношћу, углавном због одсуства 3' до 5' лекторске активности.Алпха Лифетецх'сПлатформа за инжењеринг антитела примењује ПЦР приступ склон грешкама да мутира углавном ЦДР регионе током изградње подбиблиотеке. И често стварамо мутације на потпуно случајним позицијама на читавим ВХ и ВЛ фрагментима, како бисмо повећали генетску разноликост подбиблиотеке. Након конструисања библиотеке гена мутираног антитела помоћу ПЦР-а подложног грешкама, селекција варијанти високог афинитета (афинитет сцФв антитела може да достигне 10^8 - 10^10 М) се изводи или паковањем у раствору или на имобилизованом антигену са условима испирања оптимизованим за селекцију која зависи од брзине.
  
Научници уАлпха Лифетецх Инц.користе сојеве мутатора Есцхерицхиа цоли мутАД5ТМ као једну од неколико стратегија мутације за увођење насумичних мутација, и на тај начин модификујући афинитет и експресију фрагмената рекомбинантних антитела. Услови селекције се могу модификовати за фрагменте антитела са повећаним нивоима производње. Услови раста у ћелијама мутатора Есцхерицхиа цоли могу се подесити тако да се уведе једна насумична тачка мутације по килобази ДНК, што је скоро еквивалентно једној промени кодона по фрагменту сцФв. После неколико циклуса мутације, приказа и селекције, можемо побољшати константу афинитета од 10^5 - 10^6 М на 10^8 - 10^10 М.

Побољшајте стратегије сазревања афинитета

Одређени положаји антитела могу бити рандомизовани у дефинисаном диверзитету (као што је пуна рандомизација са свих 20 амино киселина или пристрасна рандомизација са одабраним амино киселинама у фиксним процентима) да би се побољшао афинитет. Имамо две стратегије за побољшање афинитета антитела: прво, мутације се уводе на ограниченим позицијама у регионима који одређују комплементарност (ЦДР) мутагенезом усмереном на место; друго, мутације се уносе у цео В-кодирајући регион насумичном мутагенезом. Коришћењем ове две методе, очуване секвенце амино-киселина или цео оквирни регион антитела биће замењен другим аминокиселинама, што би у комбинацији са нашим технологијама скенирања библиотеке пептида могло изузетно повећати афинитет антитела од интереса на веома висок ниво.

Фаг дисплеј-Афинитет антитела

Када се сцФв мутантна библиотека конструише, доступне су две стратегије скрининга: биопанинг и сортирање чврстог антигена. У првом случају, субтрактивна концентрација супстрата се користи за изоловање антитела високог афинитета, пошто би мутанти ниског афинитета били испрани, остављајући честице фага високе авидности. Друга стратегија користи обележени антиген у раствору, селекцију засновану на константи равнотеже (Кд) и селекцију засновану на кинетици везивања, овај приступ селекције издваја варијанте антитела са побољшаним Кд.

Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте у било које време.