Услуга сазревања афинитета антитела

Алфа Лајфтек Инк.Можемо да понудимо услугу сазревања афинитета антитела коришћењем технологија мутације и селекције. Обично користимо scFv као формат антитела у процесима услуге сазревања афинитета и моновалентни фагемидни систем који се користи за смањење ефеката авидности током скрининга везивања антигена. Наш стручни тим може да пружи услуге сазревања афинитета и за једнодоменска антитела.

Алфа Лајфтек Инк.је поносан што нуди свеобухватне услуге како би задовољио различите потребе глобалних клијената. Наш циљ је да разумемо и задовољимо захтеве различитих клијената и да помогнемо у вези са свим предстојећим и новонасталим проблемима у истраживачком раду.

Шта је сазревање афинитета?

Афинитетно сазревање је процес којим антитела подлежу поновљеним мутацијама и селекцији како би се побољшао њихов афинитет за специфичне антигене. Углавном се јављају у герминативном центру секундарних лимфоидних органа, Б ћелије подлежу соматској хипермутацији и селекцији под утицајем Т ћелија и фоликуларних дендритичних ћелија.
Током процеса сазревања афинитета, Б ћелије са површинским имуноглобулинским рецепторима ниског афинитета се активирају сусретима са антигеном и подлежу пролиферацији и диференцијацији. Кроз сазревање афинитета соматске хипермутације, долази до случајних нуклеотидних супституција у варијабилном региону имуноглобулинских гена, што доводи до производње различитих варијанти антитела. Након соматске хипермутације, селекција вођена антигеном се врши на Б ћелијама са мутираним имуноглобулинским рецепторима. Б ћелије које производе антитела са повећаним антигенским афинитетом се преференцијално задржавају и дозвољава им се пролиферација, док Б ћелије са смањеним или непромењеним афинитетом подлежу апоптози. Овај итеративни процес мутације и селекције доводи до производње клонова Б ћелија, производећи антитела са постепено већим афинитетом за антиген.

Услуга сазревања афинитета антитела

Главне предности метода заснованих на ПЦР-у су то што су мутације прецизно усмерене на амплификовани фрагмент; стопа грешака се лако контролише, а метода се брзо и лако подешава и не користи опасне хемикалије. Добро је познато да Taq ДНК полимераза дуплира ДНК са ниском прецизношћу, углавном због одсуства активности коректуре од 3' до 5'.Алфа ЛајфтекПлатформа за инжењеринг антитела примењује PCR приступ склонан грешкама како би мутирала углавном CDR регионе током изградње подбиблиотеке. Често стварамо мутације на потпуно насумичним позицијама дуж целих VH и VL фрагмената, како бисмо повећали генетску разноликост подбиблиотеке. Након изградње библиотеке мутираних гена антитела помоћу PCR-а склоног грешкама, селекција варијанти високог афинитета (афинитет scFv антитела може достићи 10^8 - 10^10 M) се врши или панингом у раствору или на имобилизованом антигену са условима прања оптимизованим за селекцију зависну од брзине одвајања.
  
Научници уАлфа Лајфтек Инк.Користити мутаторске сојеве Escherichia coli mutAD5TM као једну од неколико стратегија мутације за увођење случајних мутација, и тиме модификовати афинитет и експресију рекомбинантних фрагмената антитела. Услови селекције могу се модификовати за фрагменте антитела са повећаним нивоима производње. Услови раста у ћелијама мутатора Escherichia coli могу се подесити да би се увела једна случајна тачкаста мутација по килобази ДНК, што је скоро еквивалентно једној промени кодона по scFv фрагменту. Након неколико циклуса мутације, приказивања и селекције, можемо побољшати константу афинитета са 10^5 - 10^6 M на 10^8 - 10^10 M.

Побољшајте стратегије сазревања афинитета

Одређене позиције антитела могу бити рандомизоване при дефинисаној разноликости (као што је потпуна рандомизација са свих 20 аминокиселина или пристрасна рандомизација са одабраним аминокиселинама у фиксним процентима) како би се побољшао афинитет. Имамо две стратегије за побољшање афинитета антитела: прво, мутације се уводе на ограниченим позицијама у регионима који одређују комплементарност (CDR) путем усмерене мутагенезе; друго, мутације се уводе у целе V-кодирајуће регионе случајном мутагенезом. Коришћењем ове две методе, конзервиране аминокиселинске секвенце или цео оквирни регион антитела биће замењени другим аминокиселинама, што у комбинацији са нашим технологијама скенирања пептидних библиотека може изузетно повећати афинитет антитела од интереса на веома висок ниво.

Афинитет према фагном дисплеју и антителу

Када се конструише библиотека scFv мутаната, доступне су две стратегије скрининга: биопанинг и сортирање чврстих антигена. У првој, субтрактивна концентрација супстрата се користи за изоловање антитела високог афинитета, јер би мутанти ниског афинитета били испрани, остављајући честице фага високог афинитета. Друга стратегија користи обележени антиген у раствору, селекцију засновану на константи равнотеже (Kd) и селекцију засновану на кинетици везивања, овај приступ селекцији издваја варијанте антитела са побољшаним Kd.

Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте у било ком тренутку.