Технологија фагног дисплеја подразумева уметање страног циљног гена у специфичну позицију протеина капсида фага и експресију страног гена на површини фага без утицаја на нормалну функцију фага. Након неколико кругова скрининга, коначно је добијен циљни протеин са јаком специфичношћу и високом биолошком активношћу.

Библиотеке антитела великог капацитета могу се генерисати помоћу ове технологије. Циклус скрининга је кратак, оперативни процес је једноставан, а опсег примене је широк, што омогућава идентификацију оптималних секвенци за циљане пептиде или протеине. У применама везаним за вирусе, истраживачи могу открити антитела која се везују за критичне вирусне епитопе скринингом великих библиотека антитела. Овај процес може ометати механизме уласка, репликације или имунолошког избегавања вируса, чиме се поставља основа за лечење болести.

Технологија фагног приказа се шире користи од хибридомске технологије, која је ограничена на производњу мале количине антитела против специфичних имуногена. Насупрот томе, технологија фагног приказа може представити целу библиотеку антитела изведену из различитих имуних врста.

Технологија фагног дисплеја има широк спектар примене, укључујући скрининг рецептора патогених микроорганизама, проучавање интеракција протеина, праћење преноса сигнала између ћелија, дијагностиковање болести животиња и развој вакцина, између осталих области.

Технологија фагног приказа нуди бројне предности и може се применити у различитим областима. Међутим, главни изазов у ​​развоју рекомбинантних антитела коришћењем методе фагног приказа је сложеност и трошкови повезани са процесом. Овај приступ захтева интеграцију техника молекуларне биологије, укључујући мутацију, клонирање и експресију, заједно са имунолошким, биохемијским и биофизичким анализама како би се идентификовала и окарактерисала жељена антитела.

Презентација антигена је веома важна карика. Методе презентације антигена углавном укључују директно презентовање обложених антигена, индиректно презентовање обложених антигена, презентацију антигена путем скрининга целих ћелија, презентацију антигена путем липозома, нано-фосфолипидни дискови и VLP-ови.

Метода директног премазивања је релативно једноставна, али се конформација антигена лако мења, а индиректна операција премазивања је компликована, али може одржати конформацију антигена и побољшати ефикасност презентације. Ћелијски скрининг може симулирати стварну сцену in vivo, али постоји проблем неспецифичног везивања. Нано-фосфолипидни диск има малу величину, високу ефикасност испоруке и добру стабилност; VLP-ови су спојени са антигеном или обмотани антигеном, што има високу имуногеност и добру безбедност, и може покренути јак имуни одговор.

Ако је концентрација прениска, вероватноћа везивања са фагом ће се смањити, што ће резултирати смањеном ефикасношћу скрининга. Насупрот томе, претерано висока концентрација може повећати вероватноћу неспецифичног везивања, појачати позадински сигнал и отежати идентификацију позитивних клонова.

Може се усвојити благи метод фиксирања како би се избегла висока температура, јаке киселине и алкалије. Индиректни метод премазивања и биотин-стрептавидин систем коришћени су за смањење оштећења структуре антигена. Ако је антиген мембрански протеин, може се приказати на површини интактних ћелија или користити за симулацију мембранског окружења, као што је нано-диск, како би се одржала његова природна конформација мембранског протеина.

Поред рутинских експеримената као што су ELISA, Western blotting (WB) и имунофлуоресценција (IF), технике детекције површинске плазмонске резонанце (SPR) и био-слојне интерферометрије (BLI) могу се користити за праћење процеса везивања и дисоцијације антитела и антигена у реалном времену, што омогућава одређивање афинитета и кинетичких параметара.

Фагни дисплеј може се користити за генерисање моноклонских антитела високог афинитета за широк спектар врста које производе антитела, укључујући, али не ограничавајући се на људе, мишеве, пацове, зечеве, пилиће, камиле, алпаке, краве, псе, овце, мајмуне и ајкуле.

Технологија изградње библиотека мишјих антитела је добро успостављена, исплатива и има кратко експериментално трајање, што је чини погодном за прелиминарни скрининг антитела и основна истраживања. Зечја антитела показују јак афинитет и специфичност, са ширим опсегом препознавања епитопа у поређењу са мишјим антителима. Људска антитела се могу директно добити из библиотека људских антитела, чиме се избегавају потенцијалне имунолошке реакције које се могу јавити када се хетерологна антитела примењују у људско тело. Овај приступ има значајну вредност у истраживању и развоју лекова, посебно у стварању терапијских антитела.

Животињски имуногени се генерално деле на протеински антиген, полипептидни антиген, антиген нуклеинске киселине и антиген повезан са патогеном, међу којима антиген повезан са патогеном укључује вирусни антиген (комплетна вирусна честица, вирусни протеин, неструктурни вирусни протеин итд.), бактеријски антиген (комплетан бактеријски екстракт, компонента ћелијског зида, секретовани протеин, токсин итд.) и паразитски антиген.

Прилагодите имуногене заменом имуних антигена рекомбинантним протеинима и заменом вирусних честица за гашење пожара структурним протеинима вируса. Прилагодите експериментални дизајн и модификујте имунолошку дозу.

Имуногеност се може побољшати спајањем антигена са протеинима носачима, као што је говеђи серумски албумин. Поред тога, имуни адјуванси, укључујући Фројндов адјуванс и алуминијумски адјуванс, могу се користити за продужење времена задржавања in vivo и стимулисање активације и пролиферације имуних ћелија, чиме се побољшава имуногеност.

Библиотека фагних антитела је колекција различитих фагних антитела створених састављањем комплетног скупа гена варијабилног региона из антитела у фагне векторе и њиховом експресијом на површинама фага. Овај процес резултира формирањем библиотеке фагних антитела.

Општи процес фагног приказа обухвата неколико кључних корака: екстракцију периферних мононуклеарних ћелија крви (PBMC) из имунизованих животиња, изоловање укупне РНК и њену транскрипцију у комплементарну ДНК (cDNA), амплификацију циљног гена коришћењем технологије полимеразне ланчане реакције (PCR), клонирање циљног гена у фагни вектор и трансформацију вектора у ћелију домаћина ради експресије. Овај процес резултира изградњом библиотеке фагног приказа, која може брзо да идентификује антитела високог афинитета. Након тога, ова библиотека може послужити као вредан ресурс за развој вакцина, терапијских лекова и дијагностичких реагенса.

Према извору библиотеке антитела, библиотеке фагних антитела могу се категорисати у библиотеке имуних фагних антитела и библиотеке нативних фагних антитела. Основна разлика између ова два типа лежи у томе да ли су животиње вакцинисане. Поред тога, нативне библиотеке антитела могу се генерисати путем полусинтезе или синтезе.

Постоје два основна индекса за процену квалитета библиотеке антитела: капацитет складиштења и разноликост. Велики капацитет складиштења, у комбинацији са великом разноликошћу, обезбеђује ефикасан скрининг антитела са високим афинитетом и специфичношћу.

У процесу биолошке елурације, библиотека за приказивање се инкубира са фиксираним метама, а затим се темељно испира како би се уклонили нереактивни фаги. Коњугати се обично елуирају коришћењем киселог или раствора са високим садржајем соли, а затим се амплификују у одговарајућим ћелијама домаћинима ради обогаћивања. Након 3 до 5 рунди скрининга, добијају се антитела са високим афинитетом.

Методе скрининга фага првенствено укључују испитивање у чврстој фази, скрининг у течној фази и скрининг на бази ћелија. Избор одговарајуће методе скрининга треба да узме у обзир карактеристике циљних молекула, циљеве процеса скрининга и лабораторијско окружење.

Позитиван скрининг је најосновнија метода за скрининг фагних антитела која се везују за циљне протеине. Негативни скрининг служи за елиминисање неспецифичних антитела. Током процеса скрининга фагних антитела, неспецифична антитела могу бити идентификована због интерференције од ознаке циљног антигена, материјала или других антигена са структурним сличностима са циљним антигеном. У таквим случајевима, негативни скрининг може побољшати ефикасност процеса скрининга.

Методе за верификацију антитела обично укључују ELISA, Western blotting (WB), проточну цитометрију, имунопреципитацију (IP), имунофлуоресценцију (IF), имунохистохемију и разне друге експерименталне технике. Alpha Lifetech поседује богато искуство у детекцији антитела и има професионални експериментални тим, што осигурава ефикасност антитела у наредним експериментима.