Платформа за развој хуманизације антитела

Хуманизована антитела изазивају минималан или никакав одговор људског имуног система. Према Цогнитиве Маркет Ресеарцх, величина глобалног тржишта хуманизације антитела износи 92,5 милиона долара у 2024. години и прошириће се са комбинованом годишњом стопом раста (ЦАГР) од 13,00% од 2024. до 2031. Алпха Лифетецх има зрелу платформу за хуманизацију антитела, са стопом успеха од преко 98% за хуманизована антитела. Имамо више стратегија хуманизације, укључујући ЦДР калемљење, СДР калемљење, мешање ланаца, приказ фага, итд., које се могу изабрати у складу са вашим експерименталним потребама. Не можемо само да обезбедимо хуманизацију антитела из више врста, као што су мишеви, зечеви, алпаке, камиле, итд., већ и хуманизацију антитела у различитим облицима, као што су сцФв, Фаб и нанотела. Имамо професионално техничко особље за пружање услуга производње, пречишћавања и валидације антитела, укључујући производњу мишјих моноклонских антитела, производњу химерних антитела, експресију и пречишћавање хуманизованих антитела и карактеризацију и анализу хуманизованих антитела. Уз високу стопу успеха, високу чистоћу и ниску имуногеност, гарантујемо производњу хуманизованих антитела.

Увод у хуманизацију антитела

Терапија моноклонским антителима може се користити за лечење аутоимуних болести, рака и других болести. Моноклонска антитела се производе имунизацијом мишева или других животиња. Када се користи за лечење болести у каснијој фази производње моноклонских антитела, имуногеност не-хуманих антитела се не може занемарити. Главни принцип хуманизације је да се интегришу остаци не-хуманог оквира, као што су хиперваријабилни региони који одређују комплементарност (ЦДР), у људски оквир, производећи секвенце које задржавају оригиналне карактеристике антитела док спречавају имуногеност. Имунизација миша и накнадна хуманизација мишје секвенце остају два главна пута за откривање терапеутских антитела, која углавном пролазе кроз неколико фаза: производња мишјих антитела, химеризација моноклонских антитела, химерично мишје људско моноклонско антитело и процес развоја потпуно хуманизованог моноклонског антитела. Тренутно, истраживања углавном укључују трансгене мишеве (преношење гена људских Б ћелија у мишеве), високо пропусни скрининг коришћењем технологије приказа квасца или фага, ЦДР калемљење (уметање родитељских ЦДР-ова у људске секвенце), остатке за одређивање специфичних за трансплантацију (СДР), мешање оквира и друге методе.

Слика 1: Шематски преглед хуманизације антитела од мишјих антитела (зелени домени) до потпуно хуманих антитела.

Стратегија хуманизације антитела

ЦДР Графтинг

ЦДР калемљење се постиже путем система експресије сисара заснованог на технологији рекомбинантне ДНК, а његови главни кораци су:

(1) Развити одговарајућа антитела код мишева (или нељудских извора), изоловати антитела која кодирају ДНК и клонирати их у векторе за секвенцирање (или директно извршити једноћелијско секвенцирање).

(2) да се одреди ДНК секвенца која одговара ЦДР антитела и да се одреди специфичност везивања циља;

(3) Изаберите људски оквирни регион (ФР) за трансплантацију нехуманих ЦДР-а и конструисање новог гена за антитело.

(4) Извршите тродимензионалну анализу сукоба између нељудских ЦДР-а и људских ФР-а да бисте генерисали мутације за опоравак како би се стабилизовала петља и спречио губитак афинитета или структурног интегритета коначног хуманизованог антитела.

Слика 2: Шематски преглед калемљења региона који одређује комплементарност (ЦДР).

Мешање оквира

Померање оквира се ослања на технологију приказа фага и технологију скрининга библиотеке фага да би се добила антитела високог афинитета. Олигонуклеотиди који кодирају оквире тешког ланца хуманих антитела се користе као шаблони, ЦДР региони су кодирани као прајмери, а ПЦР амплификација се изводи да би се денатурисао ПЦР производ да би се добила једноланчана ДНК. Једноланчана ДНК ВЛ и ВХ гена пречишћена стрептавидином је реконструисана на векторима коришћењем Т4 ДНК лигазе и рестрикционих ензима, инкубирана са бактериофагима и амплификована помоћу бактериофага, и конструисана је библиотека за приказ фага. Изведена су три круга скрининга са одговарајућим антигенима, а позитивни клонови су коначно верификовани помоћу ЕЛИСА и других метода.

Слика 3: Шематски илустрација стратегија калемљења региона који одређује комплементарност (ЦДР) и стратегија хуманизације мешања оквира (ФР). (А) Главни поступак ЦДР калемљења. (Б) Главни процес ФР мешања. (Референтни извор:Ванг Ионгмеи, ет ал., Поређење „промена оквира“ и „ЦДР калемљења“ у хуманизацији ПД-1 мишјег антитела.)

Пхаге Дисплаи

Производња хуманизованих антитела заснива се на методи приказивања специфичних антитела на површини бактериофага, углавном конструисаних кроз библиотеке фага хуманих антитела. Извор библиотеке су ПБМЦ изоловани из људске периферне крви да би се конструисале библиотеке фага, из којих се скринирају одговарајуће секвенце. Ова секвенца има комплетну хуману секвенцу, али произведена антитела су фрагменти антитела, као што су сцФв, Фаб и нанотело.

Ток рада услуге хуманизације антитела

Кораци услуге	КЦ Стандард	Временска линија
Изолација антитела	чистоћа >95%	1-2 недеље
Секуенце Аналисис	Тачна идентификација нељудских секвенци	1 недеља
ЦДР калемљење и калемљење оквира	Успешна интеграција и изражавање	2-3 недеље
Изражавање и прочишћавање	Висок принос и чистоћа	2-3 недеље
Функционална валидација	Процена афинитета и специфичности	1 недеља