Платформа за развој хуманизације антитела

Хуманизована антитела изазивају минималан или никакав одговор људског имуног система. Према Cognitive Market Research, глобално тржиште хуманизације антитела вреде 92,5 милиона америчких долара у 2024. години и шириће се по просечној годишњој стопи раста (CAGR) од 13,00% од 2024. до 2031. године. Alpha Lifetech има зрелу платформу за хуманизацију антитела, са стопом успеха од преко 98% за хуманизована антитела. Имамо више стратегија хуманизације, укључујући CDR калемљење, SDR калемљење, мешање ланаца, фагни дисплеј итд., које се могу одабрати у складу са вашим експерименталним потребама. Не можемо само да пружимо хуманизацију антитела из више врста, као што су мишеви, зечеви, алпаке, камиле итд., већ и хуманизацију антитела у различитим облицима, као што су scFv, Fab и нанотела. Имамо професионално техничко особље за пружање услуга производње, пречишћавања и валидације антитела, укључујући производњу моноклонских антитела миша, производњу химерних антитела, експресију и пречишћавање хуманизованих антитела и карактеризацију и анализу хуманизованих антитела. Са високом стопом успеха, високом чистоћом и ниском имуногеношћу, гарантујемо производњу хуманизованих антитела.

Увод у хуманизацију антитела

Терапија моноклонским антителима може се користити за лечење аутоимуних болести, рака и других болести. Моноклонска антитела се производе имунизацијом мишева или других животиња. Када се користе за лечење болести у каснијој фази производње моноклонских антитела, имуногеност нељудских антитела се не може игнорисати. Главни принцип хуманизације је интеграција нељудских остатака оквира, као што су хиперваријабилни региони који одређују комплементарност (CDR), у људски оквир, производећи секвенце које задржавају оригиналне карактеристике антитела, а истовремено спречавају имуногеност. Имунизација мишева и накнадна хуманизација секвенци мишева остају два главна пута за откривање терапијских антитела, која углавном пролазе кроз неколико фаза: производња мишјих антитела, химеризација моноклонских антитела, химерно мишје људско моноклонско антитело и процес развоја потпуно хуманизованог моноклонског антитела. Тренутно, истраживања углавном укључују трансгене мишеве (пренос гена људских Б ћелија у мишеве), високопропусни скрининг коришћењем технологије приказа квасца или фага, CDR калемљење (уметање родитељских CDR у људске секвенце), остатке за одређивање специфичних за трансплантацију (SDR), мешање оквира и друге методе.

Слика 1: Шематски приказ хуманизације антитела од мишјих антитела (зелени домени) до потпуно људских антитела.

Стратегија хуманизације антитела

Калемљење CDR-а

Калемљење CDR-а се постиже путем система експресије код сисара заснованог на технологији рекомбинантне ДНК, а његови главни кораци су:

(1) Развити одговарајућа антитела код мишева (или нељудских извора), изоловати ДНК која кодира антитела и клонирати их у векторе за секвенцирање (или директно извршити секвенцирање појединачних ћелија).

(2) Да се одреди ДНК секвенца која одговара CDR антителу и да се одреди специфичност везивања за циљ;

(3) Изаберите људски оквирни регион (FR) за трансплантацију нељудских CDR-ова и конструишите нови ген антитела.

(4) Извршити тродимензионалну анализу сукоба између нељудских CDR и људских FR како би се генерисале мутације за опоравак, стабилизовале петљу и спречио губитак афинитета или структурног интегритета коначног хуманизованог антитела.

Слика 2: Шематски приказ калемљења региона који одређује комплементарност (CDR).

Премештање оквира

Премештање оквира ослања се на технологију приказивања фага и технологију скрининга библиотеке фага како би се добила антитела високог афинитета. Олигонуклеотиди који кодирају оквире тешких ланаца људских антитела користе се као шаблони, CDR региони се кодирају као прајмери, а PCR амплификација се врши да би се денатурисао PCR производ и добила једноланчана ДНК. Једноланчана ДНК VL и VH гена пречишћена стрептавидином се реконструише на векторе коришћењем Т4 ДНК лигазе и рестрикционих ензима, инкубира се са бактериофагима и амплификује се бактериофагима, након чега се конструише библиотека за приказивање фага. Спроводе се три круга скрининга са одговарајућим антигенима, а позитивни клонови се коначно верификују коришћењем ELISA и других метода.

Слика 3: Шематски приказ стратегија хуманизације калемљења региона који одређује комплементарност (CDR) и премештања оквира (FR). (А) Главни поступак калемљења CDR. (Б) Главни процес премештања FR. (Извор референце: Ванг Јонгмеи и др., Поређење „премештања оквира“ и „калемљења CDR“ у хуманизацији мишјег антитела PD-1.)

Фагни дисплеј

Производња хуманизованих антитела заснива се на методи приказивања специфичних антитела на површини бактериофага, углавном конструисаних помоћу библиотека фага људских антитела. Извор библиотеке су ПБМЦ изоловане из људске периферне крви за конструисање библиотека фага, из којих се скринира одговарајуће секвенце. Ова секвенца има комплетну људску секвенцу, али произведена антитела су фрагменти антитела, као што су scFv, Fab и нанотело.

Радни ток службе за хуманизацију антитела

Кораци услуге	Стандард контроле квалитета	Временска линија
Изолација антитела	Чистоћа >95%	1-2 недеље
Анализа секвенце	Прецизна идентификација нељудских секвенци	1 недеља
Калемљење CDR-а и калемљење оквира	Успешна интеграција и изражавање	2-3 недеље
Изражавање и прочишћавање	Висок принос и чистоћа	2-3 недеље
Функционална валидација	Процена афинитета и специфичности	1 недеља