Служба за анализу карактеристика Аптамера

Алпха Лифетецх већ дуги низ година пружа услуге везане за адаптере, нудећи свеобухватне услуге развоја и анализе адаптера

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Служба за анализу карактеристика Аптамера

Алпха Лифетецх већ дуги низ година пружа услуге везане за аптамер, а тренутно може да обезбеди свеобухватне шеме развоја аптамера као што су синтеза аптамера, СЕЛЕКС скрининг, секвенцирање високе пропусности и оптимизација и карактеризација аптамера. На основу предности СЕЛЕКС методе за скрининг аптамера, Алпха Лифетецх је проширио више метода за скрининг аптамера.

Увод у анализу карактеристика аптамера

Верификација афинитета

Оптимизовани афинитет аптамера је верификован релевантним техникама теста везивања аптамера. Примери укључују изотермну титрациону калориметрију (ИТЦ), проточну цитометрију (ФЦМ) и површинску плазмонску резонанцу (СПР), микрофлуидику, итд. Афинитет аптамера се обично изражава константом дисоцијације (КД), физичком количином која се користи за квантификацију степена молекуларне дисоцијације у реакционој реакцији. Што је мања вредност КД, то је комплекс стабилнији, односно јачи афинитет; Обрнуто, што је већа КД вредност, комплекс је нестабилнији и афинитет је слабији. Овај корак је кључ за идентификацију перформанси аптамера, обезбеђујући сазревање афинитета аптамера и може се везати за циљни молекул са високим афинитетом и селективношћу у практичним применама.

Сл.1 Процес сазревања афинитета аптамера. Извор референце:Кингхорн АБ, Фрејзер ЛА, 2017.

Верификација функције

Поред верификације афинитета, потребно је проверити и функцију аптамера. Ово укључује проверу стабилности, специфичности и интеракције аптамера са другим молекулима у одређеном окружењу. Резултати функционалне верификације ће директно утицати на вредност аптамера у научним истраживањима и индустријској примени.

Специфична верификација

Конкурентски експеримент: Способност аптамера да се веже за одређену мету процењује се у присуству других сличних мета. Ако се аптамер може специфично везати за циљни молекул без сметњи других молекула, то указује да има високу специфичност.

Експеримент унакрсне реакције: аптамер је везан за низ сродних или неповезаних циљева да би видео да ли се везује само за одређену мету, како би се потврдила његова специфичност.

Провера стабилности

Експеримент деградације нуклеазе: аптамери су изложени различитим концентрацијама нуклеаза и примећена је њихова деградација. Упоређивањем степена деградације у различитим временским тачкама, може се проценити способност аптамера за деградацију против нуклеазе.

Експеримент температурне и временске стабилности: аптамер је стављен под различите температурне и временске услове да би се посматрала његова структурна и функционална стабилност. Ово помаже у одређивању оптималних услова складиштења и употребе за аптамере.

Идентификација биолошке активности

Одговарајући метод се обично бира у складу са специфичним циљем примене аптамера нуклеинске киселине.

(1) Тестирање на молекуларном нивоу: Коришћење техника молекуларне биологије, као што су гел електрофореза, Вестерн блот, итд., да би се открили комплекси формирани након што се аптамер комбинује са циљним молекулом, или открили промене у нивоу експресије циљног молекула изазване аптамером.

(2) Тестирање на ћелијском нивоу: Коришћењем технологије ћелијске културе, аптамери се инкубирају са циљним ћелијама да би се посматрале биолошке промене као што су морфологија ћелије, пролиферација и апоптоза, и проценила биолошка активност аптамера.

(3) Тестирање на животињским моделима: У одговарајућим животињским моделима, аптамери нуклеинске киселине се дају ињекцијом или применом лека, а физиолошки индикатори и патолошке промене животиња се посматрају да би се проценила биолошка активност и безбедност аптамера ин виво.