Leave Your Message
слајд1

Аптамер Ресеарцх Сервице

У складу са различитим потребама купаца за анализом, Алпха Лифетецх има различите стратегије анализе аптамера које купци могу изабрати.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС
01

Аптамер Ресеарцх Сервице

Увод у Аптамер

Аптамери су једноланчани молекули нуклеинске киселине (као што су ДНК или РНК) који се ин витро прегледају из библиотеке синтетичких олигонуклеотида са насумично додељеним секвенцама поступком који се зове СЕЛЕКС скрининг, који укључује више кругова итеративне селекције. Главне компоненте услуга развоја аптамера у власништву Алпха Лифетецх-а укључују изградњу библиотеке аптамера, скрининг аптамера СЕЛЕКС, секвенцирање аптамера СЕЛЕКС, анализу секвенце аптамера и друге анализе аптамера.

СЕЛЕКС секвенцирање комбинује аптамер СЕЛЕКС скрининг и секвенционирање високе пропусности. Кроз секвенцирање аптамера СЕЛЕКС, специфична секвенца аптамера везаног за циљ може се ефикасно одредити, обезбеђујући основне податке за каснију анализу и примену секвенце аптамера.

Аптамери се широко користе у научним истраживањима, лечењу болести, изградњи биосензора, откривању лекова и праћењу животне средине. Међутим, олигонуклеотидни аптамери прегледани ин витро лако су се разградили ин виво и чак су показали токсичност. Стога, након оптимизације прегледаних аптамера, потребна је ин витро анализа да би се проценио успех развоја аптамера. У складу са различитим потребама купаца за анализом, Алпха Лифетецх има различите стратегије анализе аптамера које купци могу изабрати.
анализа аптамера
Сл.1 Дијаграм анализе аптамера. Извор референце:Тхевендран Р, Цитартан М. 2022. Тестови за процену афинитета везивања аптамера.

Увод у Аптамер Ресеарцх Сервице

Анализа стабилности аптамера

Експеримент деградације нуклеазе
Инкубацијом аптамера са различитим типовима нуклеаза (као што су ДНаза, РНКаза, итд.) под одређеним условима, примећује се деградација аптамера, како би се проценила његова способност против деградације. Ово је корисно за одређивање стабилности и издржљивости аптамера у практичним применама.
Метода флуоресцентног обележавања
Стабилност аптамера се процењује индиректно обележавањем флуорофора на аптамеру и посматрањем промена флуоресцентног сигнала пре и после везивања са метом. На пример, када се аптамер веже за мету, његова конформација може да се промени, што резултира појачаним или смањеним сигналом флуоресценције.
Анализа термичке стабилности
Термичка стабилност аптамера се оцењује мерењем промене његове температуре топљења (Тм вредност) на различитим температурама. Што је већа температура топљења аптамера, то је боља његова термичка стабилност.
Анализа динамичке стабилности
Површинска плазмонска резонанца (СПР) и друге технологије су коришћене за праћење процеса везивања и раздвајања између аптамера и мете у реалном времену, добијање динамичких параметара (као што су константа брзине везивања, константа брзине дисоцијације, итд.), даље разумевање механизма интеракције између аптамера и мете и процена његове динамичке стабилности.
Анализа стабилности конструкције
Рендгенска кристалографија, нуклеарна магнетна резонанца (НМР) и друге технике структурне биологије коришћене су за анализу тродимензионалне структуре аптамера и његове структурне стабилности.

Специфична анализа за аптамер

Тест везивања аптамера
Афинитет се процењује извођењем теста везивања аптамера ради мерења константе везивања између аптамера и циљног молекула, као што је константа дисоцијације Кд. Нижа вредност Кд указује на већи афинитет. Тест везивања аптамера може да издвоји кандидате за лекове са високом способношћу везивања, а затим спроведе накнадне фармакодинамичке и фармакокинетичке студије.
Експеримент обрнутим скринингом
Реверзни скрининг тест је метода скрининга за брзо искључивање нециљних молекула из великог броја молекула кандидата. Реверзни скрининг је дизајниран да искључи молекуле који не поседују ову особину или функцију. Кључ за обрнути скрининг је одабир одговарајућих маркера обрнутих скрининга или услова који омогућавају да се нециљани молекули идентификују и уклоне током процеса скрининга. У овом експерименту, одабир нециљаних молекула је веома важан. Треба осигурати да одабрани нециљани молекули буду репрезентативни за супстанце које могу ометати скрининг аптамера и да су могући фактори ометања обухваћени што је потпуније могуће.
Експеримент конкурентске инхибиције
Додавањем прекомерних конкурената (као што су молекули сличне структуре као циљни молекул) систему везивања аптамера и циљног молекула, примећује се промена способности везивања аптамера и циљног молекула. Ако је способност аптамера да веже циљни молекул значајно смањена, то указује да аптамер има високу специфичност.
У неким случајевима, експерименти компетитивне инхибиције могу се користити као део или као додатак експериментима обрнутог скрининга. На пример, у процесу скрининга лекова, способност молекула лека да се веже за циљни протеин може се проценити експериментима компетитивне инхибиције, а затим се експерименти обрнутих скрининга могу користити за уклањање оних једињења која су превише снажно везана за нормалне ћелије или ткива.

Анализа цитотоксичности аптамера

Постоје разне експерименталне методе за анализу цитотоксичности аптамера, које су дизајниране да процене ефекте аптамера на преживљавање, пролиферацију или функцију ћелија.
Методе Детаљан увод Предност Недостатак
МТТ метода детекције МТТ тест је метода заснована на активности ензима у митохондријима живих ћелија. Сукцинат дехидрогеназа у митохондријима живих ћелија може да редукује егзогени МТТ у води нерастворљив плаво-љубичасти кристал Формазан и депонује га у ћелији, док мртве ћелије немају такву функцију. Растварање ових кристала диметил сулфоксидом (ДМСО) и детекција апсорпције на специфичним таласним дужинама (као што је 490 нм или 570 нм) на ензимолетеру може индиректно да одрази број живих ћелија и тако процени цитотоксичност аптамера. Висока осетљивост, економичност и практичност Велико оптерећење, органски растварачи могу изазвати оштећење ћелија; Могу се добити само коначни експериментални резултати, а не може се сагледати комплетан процес цитотоксичности
ЦЦК-8 Метод детекције Комплет за бројање ћелија-8 (ЦЦК-8) је високоосетљива, нерадиоактивна колориметријска метода детекције. ЦЦК-8 садржи ВСТ-8, који се редукује дехидрогеназом у митохондријима живих ћелија да би се произвело високо у води растворљиво наранџасто метил зан гориво. Количина произведене мезан боје је линеарно повезана са бројем живих ћелија, а број живих ћелија се може индиректно одразити мерењем вредности апсорпције светлости Мезан боје на таласној дужини од 450нм, како би се проценила цитотоксичност аптамера. Једноставан рад, нема потребе за прањем ћелија, брза детекција, широк опсег линеарне детекције, висока осетљивост, добра поновљивост, мала цитотоксичност Висока цена реагенса; Понекад је тешко рећи да ли је смањена апсорпција последица смањења броја живих ћелија или смањења активности саме ћелијске дехидрогеназе
Метода детекције ЛДХ ЛДХ (лактат дехидрогеназа) је ензим који је стабилан у цитоплазми ћелија, а када је ћелијска мембрана оштећена, ЛДХ се ослобађа ван ћелије. ЛДХ може да катализује млечну киселину да формира пируват и да реагује са ИНТ (тетразолијум соли) да би се формирала љубичаста кристална супстанца. Мерењем његове апсорпције на одређеној таласној дужини (као што је 490 нм), може се одразити степен оштећења ћелије, а затим се може проценити цитотоксичност аптамера. Директно одражава стопу смрти ћелија и има мање оштећења ћелија и нема контаминације радиоактивним изотопима Потреба за честим вађењем ћелија из инкубатора, операција је компликованија; Могу се добити само коначни експериментални резултати, а не може се сагледати комплетан процес цитотоксичности
Анализа слике живих ћелија у реалном времену Користећи анализатор слике живих ћелија у реалном времену, инструмент је постављен у инкубатор да посматра и бележи цео процес циклуса раста ћелија у реалном времену. Цитотоксичност аптамера може се проценити анализом морфолошких промена и кривуља раста ћелија. Ова метода може да обезбеди видео и квантификоване резултате цитотоксичних процеса док одржава окружење за раст ћелија стабилним. Може пратити цитотоксични процес у реалном времену, недеструктивно снимање, смањити сметње и оштећења ћелија; И видео и квантификовани резултати су доступни за дубинску анализу. Трошкови опреме су високи и захтевају професионалне оперативне вештине и способност анализе података

КАЦХИ

Предност Аптамер Ресеарцх Сервице-а

ицон05-1

Потпуна контрола квалитета

ицон07

Оптимизовани аптамери са већом стабилношћу

ицон08

Економичан и ефикасан. Конкурентнија цена, боља услуга

икона10

Свеобухватна истраживачка места и вишеструке истраживачке методе

ицон09

Професионалне консултације пре продаје и услуге подршке након продаје

ицон07

Богато искуство у анализи аптамера

ицон05-1

Тим за истраживање и развој високог нивоа

икона10

Прилагођене услуге везане за аптамер

Повратак на страницу развојне платформе Аптамер

Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте у било које време.

Leave Your Message

Феатуред Сервице