Године 1960, предложен је концепт биспецифичних антитела. Биспецифична антитела, такође позната као биспецифична моноклонска антитела, су вештачки синтетисана антитела коришћењем технологије генетског инжењеринга. Као инжењерисана вештачка антитела, биспецифична антитела обично припадају IgG подкласи и садрже фрагмент који везује антиген и циља CD3 подјединицу. Биспецифична антитела имају два специфична места везивања антигена која могу истовремено да се вежу и препознају два различита антигена или два различита епитопа антигена. У поређењу са моноклонским антителима, биспецифична антитела имају додатно специфично место везивања антигена, па поседују јачу специфичност и способност циљања, што може прецизније циљати туморске ћелије и смањити токсичност ван циља. Биспецифична антитела могу истовремено обављати више биолошких функција, као што су регрутовање имуних ћелија, блокирање сигналних путева и директно убијање туморских ћелија. Рана биспецифична антитела су углавном припремљена хемијском коњугацијом или ћелијском фузијом, али је овај метод можда споро напредовао због случајне комбинације и тешкоће у изоловању циљне комбинације. Са континуираним развојем технологије генетског инжењеринга, развијене су многе нове технолошке платформе, као што су чворови у рупама (KIH), CrossMab, DVD Ig итд. Ове платформе ефикасно решавају проблеме као што су неусклађености тешких и лаких ланаца и побољшавају униформност и принос биспецифичних антитела.

Главне методе за производњу биспецифичних антитела укључују хемијско спајање, хибридом са четири извора и припрему антитела генетским инжењерингом. Међу њима, метод хемијског спајања спаја два интактна IgG или два F(ab')2 фрагмента антитела у биспецифична антитела коришћењем хемијских средстава за спајање као што су фталимид и дитиоацилбензоева киселина. Ова метода је једноставна и лака за извођење, али може оштетити место везивања антигена, смањити активност антитела, а и само средство за спајање има одређени степен канцерогености. Метода хибридома са четири извора заснива се на фузији соматских ћелија из две различите ћелијске линије хибридома да би се експресовао одговарајући мишји IgG. Користећи технологију генетског инжењеринга, антитела се могу генетски модификовати да би се формирала биспецифична антитела. Конструисана су два различита моноклонска антитела, а Fab фрагменти или варијабилни региони тешког и лаког ланца два антитела су одвојено цепани. Реакцијом умрежавања или технологијом ланчане рекомбинације, два фрагмента су комбинована да би се формирало биспецифично антитело. Иако је сложеност технологије генетског инжењеринга релативно висока, тренутно је то најчешће коришћена метода за производњу биспецифичних антитела за подешавање структуре и функције антитела. Приликом спровођења дизајна биспецифичних антитела, може се користити принцип унакрсне реактивности антитела, али унакрсна реактивност антитела може изазвати неспецифичне реакције, тако да ће се пажљиво размотрити у практичној примени дизајна биспецифичних антитела, као што је терапија биспецифичним антителима.

Пречишћавање биспецифичних антитела је процес изоловања и пречишћавања циљних антитела високе чистоће. Две методе, центрифугирање и дубока филтрација, користе се за уклањање неких растворљивих нечистоћа. Циљно биспецифично антитело се првобитно хвата афинитетном хроматографијом. За биспецифична антитела слична IgG користи се афинитетна хроматографија протеина А, док се за биспецифична антитела која нису слична IgG може користити афинитетна хроматографија заснована на лаком ланцу. Након тога, антитело се инкубира под условима ниског pH током одређеног временског периода, што доводи до нарушавања структуре протеина на површини вирусне овојнице, чиме се губи способност инфицирања ћелија. Међудубока филтрација се врши како би се додатно уклониле нечистоће као што су протеини ћелија домаћина (HCP). Чистоћа антитела се побољшава методама као што је јоноизмењивачка хроматографија, а сви преостали вируси се уклањају техникама нанофилтрације или ултрафилтрације. Коначно, узорак се концентрише и замењује одговарајућим пуфером за формулацију.