Служба за развој моноклонских антитела

Алпха Лифетецх може да обезбеди предвиђање епитопа, синтезу пептида, експресију протеина, производњу поликлоналних или моноклоналних антитела, као и пречишћавање антитела из ћелијске културе, асцитне течности или целог серума.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Служба за развој моноклонских антитела

Алпха Лифетецх Инц.може да обезбеди предвиђање епитопа, синтезу пептида, експресију протеина, производњу поликлонских или моноклоналних антитела, као и пречишћавање антитела из ћелијске културе, асцитесне течности или целог серума.

Алпха Лифетецх Инц.има искуство у пружању услуга корисницима различитих стабилних ћелијских линија, укључујући ћелије хибридома, ћелијске линије за уређивање генома, ћелијске линије за уништавање и ћелијске линије прекомерне експресије. Трудимо се да сваком клијенту понудимо напредне прилагођене услуге мобилне телефоније и наше услуге су доказане и којима се верује.

Стратегија развоја антитела

1. Дизајн и припрема антигена
Ови антигени могу бити протеини, пептиди или други молекули. Дизајнирање имуногена захтева свеобухватан приступ који интегрише знање о структури антигена, имунологији и системима испоруке. Алпха Лифетецх има технологију дизајна антигена која може дизајнирати имуногене за клијенте којима је потребна.
Алпха Лифетецх нуди рекомбинантне протеинске производе међу којима купци могу да бирају. Имамо различите системе експресије протеина, као што су систем експресије Е. цоли, систем експресије квасца, експресиони систем бакуловирус-инсеката, систем експресије сисара, итд., за производњу рекомбинантних протеина који су вам потребни за истраживање.

2. Имунизација животиња
Алпха Лифетецх може да обезбеди имуногене купцима, а имуне животиње као што су мишеви, зечеви, овце, алпаке, заморци, хрчци итд. су вам на располагању за избор.

3. Методе производње моноклонских антитела

●Мабс Продуцтион би Хибридома тецхнологи
Хибридома је хибридна ћелија произведена фузијом две врсте ћелија, наиме ћелијске линије мијелома миша и плазма ћелија (лимфоцит Б), у којима хетерозиготна ћелија може да производи континуирана антитела против антигена од интереса ин витро. Производња ћелијске линије хибридома састоји се од три дела: дизајна антигена (хаптени, мали молекули и пептиди), имунизације животиња, фузије ћелија и скрининга позитивног клона. Користећи јединствене методологије имунизације, добијамо изузетно високу ефикасност фузије ћелија (1-10 хибридома на хиљаду Б ћелија) и високе титре антитела, максимизирајући нашу стопу успеха у наредним аналитичким тестовима који укључују биохемијски скрининг, ин-витро тестове засноване на ћелијама и студије на животињама.

●Мабс Производња помоћу технологије дисплеја фага
Фаг дисплеј нуди још један метод за генерисање моноклонских антитела. Б-лимфоцити се изолују из животињске крви и њихова иРНК се екстрахује. Кроз ПЦР, ова мРНА се претвара у цДНК, која умножава све ВХ и ВЛ сегменте. Ови сегменти се затим клонирају у вектор, типично као једноланчани варијабилни фрагменти (сцФв), заједно са ПИИИ протеином бактериофага. Након тога, овај конструкт се користи за инфицирање Е. цоли, што резултира стварањем библиотеке која садржи приближно 10^10 ћелија путем инокулације са помоћним фагом. Е. цоли је тада у стању да лучи бактериофаг који садржи ВХ и ВЛ сегменте као део свог омотача. Након тога, специфични ВХ и ВЛ сегменти који циљају антиген од интереса могу бити одабрани и коришћени за реинокулацију Е. цоли са бактериофагом. Ћелије које садрже плазмид се затим изолују и секвенцирају.

4.Фусион сцреенинг

●Фузија и селекција ћелија
Сакупљене Б ћелије се затим спајају са ћелијама мијелома, које су ћелије рака које се могу неограничено размножавати у култури. Фузија се обично постиже употребом технике као што је полиетилен гликол (ПЕГ) фузија.
Након фузије, ћелије хибридома се култивишу у селективном медијуму који омогућава да преживе само хибридоми. Медијум обично садржи аминоптерин, који спречава раст несраслих ћелија мијелома.

●Сцреенинг анд Цлонгинг
Добијене ћелије хибридома се тестирају на производњу антитела специфичних за циљни антиген. Ово се обично ради коришћењем техника као што су ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА), Вестерн блот, имунопреципитација и проточна цитометрија.

Када се идентификују ћелије хибридома које производе антитело, оне се клонирају да би се створила популација идентичних ћелија. Ово осигурава да је антитело које производи свака ћелија хибридома идентично.

5. Функционална верификација антитела
Алпха Лифетецх обезбеђује функционалну валидацију антитела, као што је Вестерн блот, имунохистохемија или функционални тестови, да би се карактерисала моноклонска антитела и потврдила специфичност, афинитет и функционалност антитела.

6.Оптимизација антитела
Пречишћавање антитела из супернатанта културе коришћењем техника као што су афинитетна хроматографија за протеин А или протеин Г, а Алпха Лифетецх такође може да обезбеди методе модификације антитела за побољшање афинитета антитела.

7. Производња антитела
Алпха Лифетецх може да процени кандидатска антитела за апликације за скрининг високе пропусности и производњу великих размера.

факфак

Најчешћа питања о развоју моноклонских антитела

1

Како одабрати прави фузиони хибридом?

Током процеса фузије, 10-15 микротитарских плоча са 96 јажица је засејано мешавином фузионог хибрида. Свака плоча се храни ХАТ-ИМДМ селекцијским медијумом и одржава у инкубатору за угљен-диоксид на 37 степени Целзијуса. 9 - 14 дана након фузије, хибридни супернатанти се тестирају на присуство специфичног антитела од интереса.
2

Како побољшати ефикасност селекције?

Фузија плазма ћелија са њиховим колегама из мијелома није 100% ефикасна. Чак и под оптималним условима и најефикаснијом стимулацијом, фузија ћелија и даље производи мешавину неконфлуентних и конфлуентних ћелија које треба раздвојити. Да би се побољшала ефикасност процеса селекције, ћелијама мијелома које се користе за фузију недостаје ХГПРТ, кључни ензим у путу спасавања нуклеотида. Смеша је затим култивисана у ХАТ медијуму, где су биле одрживе само ћелије са ХГПРТ ензимом, хибридоми који су наследили ХГПРТ од плазма ћелија.
3

Како прегледати ћелијске линије хибридома на активност антитела?

Процена хибридних сорти је кључни корак. Обично се скрининг хибридома, клона и субклона супернатанта обезбеђује путем ензимског имуносорбентног теста (ЕЛИСА), Вестерн блот теста и флуоресцентно активираног сортирања ћелија (ФАЦС). Одлучићемо да спроведемо све прегледе супернатанта у сопственој лабораторији.
4

Дајте детаљна упутства о томе како се спроводи скрининг активности антитела?

Супернати хибридома који се тестирају могу се кретати од 500 до 1.440 узорака и биће спремни за тестирање од 9. до 14. дана. Можемо настати током периода од три до пет дана или сви могу бити спремни истог дана, тако да је важно да лабораторија клијента буде припремљена недељама унапред са радним специфичним секундарним тестовима по избору.
5

Зашто је потребно субклонирање позитивних хибридома?

Након што су позитивни бунари идентификовани током иницијалне ЕЛИСА процедуре скрининга, хибридоми су пребачени у већу запремину, тј. плоче са 24 бунара, у припреми за процедуру субклонирања. Субклонирање хибридома се обично изводи методом ограниченог разблаживања да би се обезбедила изолација стабилних моноклона. Техника укључује разблаживање хибридомских култура и њихово дисперговање у плоче са 96 бунарчића да би се постигла моноклоналност (једна ћелија по бунарчићу). Требало би извршити најмање два ограничена разблажења да би се смањио ризик од развоја мешовитих популација хибридома.
6

Које су предности коришћења хибридомске технологије за откривање антитела?

Хибридне ћелијске линије су хваљене због своје способности да производе антитела високог афинитета, стабилности и специфичности на најисплативији начин.