Услуге изградње библиотеке Пхаге Дисплаи

Алпха Лифетецх има свеобухватну платформу за приказ фага М13/Т7 која обезбеђује изградњу и производњу библиотека антитела. Такође можемо да пружимо прилагођене услуге, као што је производња антитела сцФв, како бисмо задовољили ваше потребе.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Услуге изградње библиотеке Пхаге Дисплаи

Алпха Лифетецх је већ дуги низ година дубоко ангажован у технологији дисплеја Пхаге. Изградио је савршену стабилну технолошку платформу Пхаге дисплеја која штеди време за научно истраживање или истраживање пројекта и олакшава накнадну производњу. Алпха Лифетецх такође може да пружи клијентима услуге као што су производња вхх антитела, производња сцФв антитела, производња Фаб антитела.

Алпха Лифетецх има свеобухватну платформу за приказ фага М13/Т7 која обезбеђује изградњу и производњу библиотека антитела. Такође можемо да пружимо прилагођене услуге, као што су производња антитела сцФв и високопропусни скрининг антитела, како бисмо задовољили ваше потребе.

Увод у фаг дисплеј

Технологија приказа фага је техника која користи фаге (вирус који инфицира бактерије) за тражење функционалних везујућих молекула специфичних протеина или пептида. Технике изградње библиотеке фаг антитела укључују изградњу Фаб библиотеке антитела, изградњу библиотеке сцФв антитела, изградњу библиотеке нанотела, итд. Према типовима бактериофага, могу се поделити на М13, Т7, Т4, λ и друге системе. Према типу библиотеке, може се поделити на библиотеку насумичних пептида, библиотеку цДНК, библиотеку антитела и библиотеку протеина. Технологија фаг дисплеја је једноставна за руковање и јефтина за употребу. Међутим, ова техника ограничава разноликост молекуларне генетике у библиотеци која не може да изрази предуге секвенце,

Тренутно се широко користи технологија дисплеја фага. Међу њима су значајна достигнућа у истраживању и развоју нових вакцина (јефтиних и ефикасних синтетичких вакцина), развоју лекова за антитела (скрининг инхибитори ензима), трансдукцији ћелијског сигнала (скрининг симулираних епитопа), и истраживању епитопа антигена (припрема моноклонских антитела).

Увод у Т7 бактериофаг

Т7 бактериофаг је дволанчана ДНК, дужина ДНК је 40кб и умотана је у капсид пречника 60нм. Конектор између главе и репа је прстенаста структура састављена од више копија гп8. Глава и језгро т7 бактериофага формирају цилиндричну структуру која се везује за гп8 и може повезати главу и реп.

Слика 1 Шематски приказ бактериофага Т7.(Референца:Напредак у Т7 фаг дисплеју (преглед))

Увод у М13 бактериофаг

Бактериофаг М13 припада групи филаментозних фага који се заједнички називају Фф фаги. Има дужину од 900 нм и ширину од 6,5 нм. Садржи геном једноланчане ДНК (ссДНК) дужине 6407 бп који се састоји од девет гена који кодирају 11 различитих протеина. Међу њима, пет протеина су протеини омотача, а шест протеина је укључено у репликацију и састављање фага. Највећа концентрација протеина омотача је капсидни протеин Г8П, који се састоји од око 2.700 протеинских јединица и формира омотач око хромозома.

Слика 2 Шематски приказ бактериофага М13.(Референца:Основе технологије приказа антитела фага)

Увод у библиотеку антитела дисплеја фага

Откривање антитела постаје све важније у савременој медицини. Постоје различити приступи откривању антитела, али библиотека антитела са приказом фага се више користи у медицинској науци.

Од 1990. године, различити формати антитела су коришћени за прављење библиотека фага, укључујући ВХ, ВХХ, сцФв, дијатела и Фаб антитела. СцФв састављен од ВХ и ВЛ структурних домена су једноланчана антитела која се користе за конструисање сцФв библиотека антитела. сцФв карактерише кратак полуживот и ниска имуногеност. Фаб библиотека антитела се састоји од ВХ, ВЛ, ЦЛ и ЦХ1, који могу брзо да открију идеална антитела са високим афинитетом. Најмања јединица која може да веже циљни антиген-ВХХ тренутно чини библиотеку нанотела, ВХХ има предности једноставне структуре, мале запремине, високе растворљивости, добре стабилности и лаке припреме и експресије. Библиотеке синтетичких нанотела (Нб) се појављују као атрактивна алтернатива имунизацији животиња за стабилно синтетичко нанотело високог афинитета. Генерално, ови фрагменти антитела су фузионисани са Г3П фага М13, и клонирањем великог броја гена који кодирају фрагмент антитела, могу се генерисати велике библиотеке антитела за приказ фага из којих се могу изабрати многа различита антитела.

Процес изградње библиотеке фага

Процес изградње фагне библиотеке је следећи: дизајнирани су специфични прајмери за ПЦР амплификацију којом се добијају производи, који су ензимски везани вектором фага Т7/М13, а рекомбинантни фагни плазмид је успешно конструисан. Плазмид рекомбинантног фага је трансформисан у ТГ1 рецепторске ћелије, затим обложен медијумом који садржи одговарајуће антибиотике, а експандирана култура је изведена након скрининга трансформатора. После више циклуса културе, фаг реплицира времена репликације у бактеријама и успешно експримира циљни протеин или полипептид. Затим се библиотека фага пречишћава да би се уклониле неке нечистоће и невезани фаги.

Варијабилни региони (ВХ и ВЛ) су у корелацији са разноврсношћу антитела, а ВХ и ВЛ су убачени у вектор фага заједно са секвенцом која кодира протеин фага ПИИИ. После склапања, честица фага је изложена и фузионисана са Н-терминалом мањег протеина омотача ИИИ да би се формирао функционални фрагмент антитела, чиме се добија библиотека која садржи ДНК секвенцу антитела.

По завршетку имунизације детектован је титар и узета је крв животиња након квалификовања титра. Лимфоцити се изолују из крви, РНК се екстрахује, РТ-ПЦР амплифицира циљни фрагмент и добије се фрагмент гена В региона. В ген је амплификован коришћењем специфичног прајмера.

Створене природне библиотеке укључују слаба имуногена антитела код животиња која могу да циљају било коју мету. Антитела фага која се специфично везују за антиген могу се прикупити коришћењем техника скрининга које фиксирају или обележавају антиген.

Циљни антиген је фиксиран за чврсти носач, као што је рупа на микроплочи, или спојен на магнетну куглицу. Затим се додаје библиотека антитела фага да би се она везала за антиген. Након вишеструких елуација, фаги ниског афинитета или неспецифични се испиру и они који показују специфична антитела се задржавају.

Примена дисплеја фага

*Откриће антитела постаје све важније у савременој медицини. Постоје различити приступи откривању антитела, али технологија приказа фага се више користи у медицинској науци. Од 1990. године, различити формати антитела су коришћени за прављење библиотека фага, укључујући ВХ, ВХХ, сцФв, дијатела и Фаб антитела.
* Библиотеке фагних пептида омогућавају брзо одређивање секвенце протеинских епитопа и постале су моћно средство за истраживање интеракције између епитопа и рецептора антигена
*Фрагменти антитела су спојени са Г3П фага М13, и клонирањем великог броја гена који кодирају фрагмент антитела, могу се генерисати велике библиотеке антитела за приказ фага из којих се могу одабрати многа различита антитела.
*Т7 фаг дисплеј систем има многе предности, укључујући једноставност, високу сигурност, стабилност, лако складиштење и транспорт, тако да се систем користи у превентивним и терапијским вакцинама.
*Т7 фаг дисплеј систем може да открије различите антигене, као што су површински антигени патогених микроорганизама и антигени рака.

Пхаге