Услуга изградње библиотеке за приказ фага

Алфа Лајфтек има свеобухватну платформу за фагни дисплеј М13/Т7 како би се осигурала изградња и производња библиотека антитела. Такође можемо да пружимо прилагођене услуге, као што је производња scFv антитела, како бисмо задовољили ваше потребе.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Услуга изградње библиотеке за приказ фага

Алфа Лајфтек је годинама дубоко ангажован у технологији фагног приказа. Изградио је савршену, стабилну платформу за технологију фагног приказа која штеди време за научна истраживања или пројектна истраживања и олакшава накнадну производњу. Алфа Лајфтек такође може да пружи купцима услуге као што су производња vhh антитела, производња scFv антитела и производња Fab антитела.

Алфа Лајфтек има свеобухватну платформу за приказ фага М13/Т7 како би се осигурала изградња и производња библиотека антитела. Такође можемо да пружимо прилагођене услуге, као што су производња scFv антитела и скрининг антитела високог протока, како бисмо задовољили ваше потребе.

Увод у фагни дисплеј

Технологија фагног приказа је техника која користи фаге (вирус који инфицира бактерије) за тражење функционалних везујућих молекула специфичних протеина или пептида. Технике изградње библиотека фагних антитела укључују изградњу Fab библиотека антитела, изградњу scFv библиотека антитела, изградњу библиотека нанотела итд. Према типовима бактериофага, могу се поделити на M13, T7, T4, λ и друге системе. Према типу библиотеке, може се поделити на библиотеку насумичних пептида, библиотеку цДНК, библиотеку антитела и библиотеку протеина. Технологија фагног приказа је једноставна за руковање и јефтина за употребу. Међутим, ова техника ограничава разноликост молекуларне генетике у библиотеци која не може да експресује предугачке секвенце,

Тренутно се технологија фагног приказа широко користи. Међу њима су значајна достигнућа у истраживању и развоју нових вакцина (јефтине и ефикасне синтетичке вакцине), развоју лекова на бази антитела (скрининг инхибитора ензима), трансдукцији ћелијског сигнала (скрининг симулираних епитопа) и истраживању антигенских епитопа (припрема моноклонских антитела).

Увод у Т7 бактериофаг

Т7 бактериофаг је дволанчана ДНК, дужина ДНК је 40kb и обмотана је капсидом пречника 60nm. Конектор између главе и репа је прстенаста структура састављена од више копија gp8. Глава и језгро т7 бактериофага формирају цилиндричну структуру која се везује за gp8 и може повезати главу и реп.

Сл. 1 Шематски приказ бактериофага Т7.(Референца: Напредак у систему приказивања фага Т7 (Преглед))

Увод у бактериофаг М13

Бактериофаг М13 припада групи филаментозних фага који се заједнички називају Ff фаги. Има дужину од 900 nm и ширину од 6,5 nm. Садржи геном једноланчане ДНК (ssDNA) дужине 6407 bp који се састоји од девет гена који кодирају 11 различитих протеина. Међу њима, пет протеина су протеини омотача, а шест протеина је укључено у репликацију и склапање фага. Највећа концентрација протеина омотача је капсидни протеин G8P, који се састоји од око 2.700 протеинских јединица и формира омотач око хромозома.

Сл. 2 Шематски приказ бактериофага М13.(Референца: Основе технологије приказивања антитела фага)

Увод у библиотеку антитела за фагни приказ

Откривање антитела постаје све важније у савременој медицини. Постоје различити приступи откривању антитела, али се библиотека антитела фагног приказа више користи у медицинској науци.

Од 1990. године, различити формати антитела су коришћени за конструисање фагних библиотека, укључујући VH, VHH, scFv, диабодије и Fab антитела. scFv састављен од VH и VL структурних домена су једноланчана антитела која се користе за конструисање scFv библиотека антитела. scFv карактерише кратко време полураспада и ниска имуногеност. Fab библиотека антитела се састоји од VH, VL, CL и CH1, који могу брзо да елиминишу идеална антитела са високим афинитетом. Најмања јединица која може да се веже за циљни антиген - VHH, тренутно представља библиотеку нанотела. VHH има предности једноставне структуре, мале запремине, високе растворљивости, добре стабилности и лаке припреме и експресије. Библиотеке синтетичких нанотела (Nb) се појављују као атрактивна алтернатива имунизацији животиња за стабилна, синтетичка нанотела са високим афинитетом. Генерално, ови фрагменти антитела су спојени са G3P фага M13, и клонирањем великог броја гена који кодирају фрагмент антитела, могу се генерисати велике библиотеке антитела за приказ фага из којих се могу одабрати многа различита антитела.

Процес изградње фагне библиотеке

Процес изградње фагне библиотеке је следећи: специфични прајмери се дизајнирају за PCR амплификацију која добија производе, који се ензимски лигирају са фагним вектором T7/M13, и рекомбинантни фагни плазмид је успешно конструисан. Рекомбинантни фагни плазмид је трансформисан у TG1 рецепторске ћелије, затим пресвучен медијумом који садржи одговарајуће антибиотике, а након скрининга трансформатора је извршена проширена култура. Након више рунди културе, фаг реплицира времена репликације у бактеријама и успешно експресује циљни протеин или полипептид. Затим се фагна библиотека пречишћава да би се уклониле неке нечистоће и невезани фаги.

Варијабилни региони (VH и VL) су били у корелацији са разноликошћу антитела, а VH и VL су уметнути у фагни вектор заједно са секвенцом која кодира фагни протеин PIII. Након склапања, фагна честица је изложена и спојена са N-терминалом споредног протеина омотача III да би се формирао функционални фрагмент антитела, добијајући библиотеку која садржи ДНК секвенцу антитела.

Након завршетка имунизације, титар је детектован, а крв животиња је узета након што је титар квалификован. Лимфоцити су изоловани из крви, РНК је екстрахована, RT-PCR амплификован је циљни фрагмент и добијен је фрагмент гена V региона. V ген је амплификован коришћењем специфичног прајмера.

Природне библиотеке које су створене укључују слаба имуногена антитела код животиња која могу циљати било коју мету. Фагна антитела која се специфично везују за антиген могу се сакупити коришћењем техника скрининга које фиксирају или обележавају антиген.

Циљни антиген је фиксиран на чврсти носач, као што је отвор микроплоче, или је повезан са магнетном куглицом. Затим се додаје библиотека фагних антитела да би се везала за антиген. Након вишеструких елуција, фаги ниског афинитета или неспецифични фаги се испирају, а они који показују специфична антитела се задржавају.

Примена фагног дисплеја

*Откривање антитела постаје све важније у савременој медицини. Постоје различити приступи откривању антитела, али се технологија фагног приказа више користи у медицинској науци. Од 1990. године, различити формати антитела се користе за конструисање фагних библиотека, укључујући VH, VHH, scFv, диатела и Fab антитела.
*Библиотеке фагних пептида омогућавају брзо одређивање секвенце протеинских епитопа и постале су моћан алат за испитивање интеракције између епитопа и антигенских рецептора
*Фрагменти антитела се фузирају са G3P фага M13, а клонирањем великог броја гена који кодирају фрагмент антитела, могу се генерисати велике библиотеке антитела за приказ фага из којих се могу одабрати многа различита антитела.
*Систем за приказ фага Т7 има многе предности, укључујући једноставност, високу безбедност, стабилност, лако складиштење и транспорт, па се систем користи у превентивним и терапијским вакцинама.
*Систем за приказ фага Т7 може да детектује различите антигене, као што су површински антигени патогених микроорганизама и антигени рака.

Фаг