Услуга скрининга библиотеке Пхаге Дисплаи

Технологија скрининга фагног дисплеја је примењена у областима као што су трансдукција ћелијског сигнала, места за препознавање протеина и развој лекова, поред проучавања епитопа антигена.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Услуга скрининга библиотеке Пхаге Дисплаи

Алпха Лифетецх је већ дуги низ година дубоко ангажован у технологији дисплеја Пхаге. Изградио је савршену стабилну технолошку платформу Пхаге дисплеја која штеди време за научно истраживање или истраживање пројекта и олакшава накнадну производњу. Алпха Лифетецх такође може да пружи клијентима услуге као што су производња вхх антитела, производња сцФв антитела, производња Фаб антитела.

Алпха Лифетецх има свеобухватну платформу за приказ фага М13/Т7 која обезбеђује изградњу и производњу библиотека антитела. Такође можемо да пружимо прилагођене услуге, као што су производња антитела сцФв и високопропусни скрининг антитела, како бисмо задовољили ваше потребе.

Процес изградње библиотеке дисплеја фага

Процес изградње фагне библиотеке је следећи: дизајнирани су специфични прајмери за ПЦР амплификацију којом се добијају производи, који су ензимски везани вектором фага Т7/М13, а рекомбинантни фагни плазмид је успешно конструисан. Плазмид рекомбинантног фага је трансформисан у ТГ1 рецепторске ћелије, затим обложен медијумом који садржи одговарајуће антибиотике, а експандирана култура је изведена након скрининга трансформатора. После више циклуса културе, фаг реплицира времена репликације у бактеријама и успешно експримира циљни протеин или полипептид. Затим се библиотека фага пречишћава да би се уклониле неке нечистоће и невезани фаги.

Методе скрининга библиотеке дисплеја фага

Успех производње антитела дисплејем фага углавном зависи од библиотека фаг дисплеја антитела, а уобичајене методе пановања фага су скрининг у чврстој и течној фази. Скрининг антигена у чврстој фази обогаћује специфична антитела кроз 3-4 круга елуирања да би се добиле библиотеке за приказ фага антитела; Скрининг антигена у течној фази се изводи инкубацијом биотином обележених мета и библиотека фагова за приказ антитела и хватањем везаних фага коришћењем магнетних перли. Скрининг на чврстој фази троши више антигена и неки епитопи антигена су уништени. Скрининг течне фазе карактерише висока ефикасност и обогаћивање, али су добијена антитела мање специфична. Метода панирања фага зависи од експерименталних потреба, које ће све имати одређени утицај на ефекат производње антитела дисплеја фага.

Скрининг антитела високе пропусности

Развој антитела је постао брз у савременој медицини. Постоје различите методе развоја антитела, али скрининг антитела високе пропусности се више користи у медицинској науци. Процес може да добије велику количину разноликости репертоара антитела. Комбиновање са традиционалним методама скрининга библиотеке антитела може побољшати квалитет скрининга библиотека дисплеја фага. Након биолошког скрининга, антитела се могу окарактерисати ЕЛИСА тестом ниске пропусности или високопропусним скринингом на антитела.

Слика 1 Дијаграм тока који приказује редослед догађаја од изградње библиотека фаг антитела до стварања моноклонских антитела са високим афинитетом за антигене и ниском имуногеношћу.(Референтни извор:Технологија дисплеја фага као моћна платформа за откривање лекова против антитела- ПМЦ (них.гов))

Мере предострожности за скрининг антитела фаг дисплејаПревентивне мере

Разматрање бафера

Избор бафера треба да узме у обзир стабилност циља, везујуће микроокружење и минимално неспецифично везивање у стварном сценарију примене. Неповезани протеини, нејонски детерџенти и физиолошке концентрације соли доприносе смањењу позадине. Постоје и други услови, као што неки циљеви могу захтевати додавање бивалентних катјона или других кофактора у пуфер, протеински кофактори могу бити кофиксирани са метом, могу се додати у пуфер за сортирање, па чак и користити као средство за хватање мете.

Разматрање притиска

Уобичајена разматрања притиска селекције укључују концентрацију циљних молекула, време везивања, интензитет испирања, итд. Друге технике за повећање притиска селекције укључују употребу денатуранти (као што су киселине, уреа и гванидин), органских растварача, повећање температуре или повећање концентрације конкурентских лиганда или циљева у пуферу за прање.
Међу њима је важан први круг скрининга. Први круг скрининга је да се ухвати што више позитивних клонова из изграђене библиотеке уз уклањање неспецифичних клонова. Порозно обложене мете или велики број растворљивих мета треба да се користе да би се обезбедило да се ухвати велики број везаних фага да би се одржала разноврсност библиотеке. У наредним круговима скрининга, притисак селекције треба повећати са повећањем обогаћивања, вишеструким испирањем и повећањем времена испирања, клонови са високим афинитетом се могу прегледати.

Негативна стратегија скрининга

Ознаке антигена и материјали носачи процес скрининга је да скринингује све супстанце на коњугатима антигена, као што су ознаке, фузиони протеини и потпорни супстрати. Негативан скрининг нециља може ограничити обогаћивање антитела која нису циљни антиген.
Целе ћелије, липозоми, нано-фосфолипидни дискови и ВЛП-ови могу се негативно прегледати коришћењем симулираних трансфектованих ћелија или нетрансфектованих ћелија приликом скрининга трансфицираних ћелијских линија.
Уклањање комплексних мешавина антигена. Строги негативни скрининг може се извршити за непознате или сложене циљне молекуле, као што су целе ћелије или нечисти протеини.
Стратегија антитела против специфичних места антигена, једна је да елуира антитело које може да се такмичи са лигандом додавањем високе концентрације лиганда, а друга је да блокира антитело.

Примена дисплеја фага

*Откриће антитела постаје све важније у савременој медицини. Постоје различити приступи откривању антитела, али технологија приказа фага се више користи у медицинској науци. Од 1990. године, различити формати антитела су коришћени за прављење библиотека фага, укључујући ВХ, ВХХ, сцФв, дијатела и Фаб антитела.
* Библиотеке фагних пептида омогућавају брзо одређивање секвенце протеинских епитопа и постале су моћно средство за истраживање интеракције између епитопа и рецептора антигена
*Фрагменти антитела су спојени са Г3П фага М13, и клонирањем великог броја гена који кодирају фрагмент антитела, могу се генерисати велике библиотеке антитела за приказ фага из којих се могу одабрати многа различита антитела.
*Т7 фаг дисплеј систем има многе предности, укључујући једноставност, високу сигурност, стабилност, лако складиштење и транспорт, тако да се систем користи у превентивним и терапијским вакцинама.
*Т7 фаг дисплеј систем може да открије различите антигене, као што су површински антигени патогених микроорганизама и антигени рака.

Пхаге