Услуга скрининга библиотеке фага

Технологија скрининга фагног приказа примењена је у областима као што су трансдукција ћелијског сигнала, места за препознавање протеина и развој лекова, поред проучавања антигенских епитопа.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Услуга скрининга библиотеке фага

Алфа Лајфтек је годинама дубоко ангажован у технологији фагног приказа. Изградио је савршену, стабилну платформу за технологију фагног приказа која штеди време за научна истраживања или пројектна истраживања и олакшава накнадну производњу. Алфа Лајфтек такође може да пружи купцима услуге као што су производња vhh антитела, производња scFv антитела и производња Fab антитела.

Алфа Лајфтек има свеобухватну платформу за приказ фага М13/Т7 како би се осигурала изградња и производња библиотека антитела. Такође можемо да пружимо прилагођене услуге, као што су производња scFv антитела и скрининг антитела високог протока, како бисмо задовољили ваше потребе.

Процес изградње библиотеке фагног приказа

Процес изградње фагне библиотеке је следећи: специфични прајмери се дизајнирају за PCR амплификацију која добија производе, који се ензимски лигирају са фагним вектором T7/M13, и рекомбинантни фагни плазмид је успешно конструисан. Рекомбинантни фагни плазмид је трансформисан у TG1 рецепторске ћелије, затим пресвучен медијумом који садржи одговарајуће антибиотике, а након скрининга трансформатора је извршена проширена култура. Након више рунди културе, фаг реплицира времена репликације у бактеријама и успешно експресује циљни протеин или полипептид. Затим се фагна библиотека пречишћава да би се уклониле неке нечистоће и невезани фаги.

Методе скрининга библиотеке фагног приказа

Успех производње антитела помоћу фагног дисплеја углавном зависи од библиотека фагног дисплеја антитела, а уобичајене методе испитивања фага су скрининг у чврстој и течној фази. Скрининг антигена у чврстој фази обогаћује специфична антитела кроз 3-4 круга елуције да би се добиле библиотеке фагног дисплеја антитела; Скрининг антигена у течној фази се врши инкубацијом биотином обележених циљних и фагних библиотека антитела и хватањем везаних фага помоћу магнетних куглица. Скрининг у чврстој фази троши више антигена, а неки антигенски епитопи се уништавају. Скрининг у течној фази карактерише висока ефикасност и обогаћивање, али добијена антитела су мање специфична. Метод испитивања фага зависи од експерименталних потреба, а све то ће имати одређени утицај на ефекат производње антитела помоћу фагног дисплеја.

Скрининг антитела високог протока

Развој антитела је постао брз у савременој медицини. Постоје различите методе за развој антитела, али се скрининг антитела високог протока више користи у медицинској науци. Процес може да обезбеди велику количину разноликости репертоара антитела. Комбиновање са традиционалним методама скрининга библиотека антитела може побољшати квалитет скрининга библиотека фага. Након биолошког скрининга, антитела се могу окарактерисати ELISA тестом ниског протока или скринингом антитела високог протока.

Сл. 1 Дијаграм тока који приказује редослед догађаја од конструисања библиотека фагних антитела до генерисања моноклонских антитела са високим афинитетом за антигене и ниском имуногеношћу.(Извор референце: Технологија фагног приказа као моћна платформа за откривање лекова на бази антитела - ПМЦ (nih.gov))

Мере предострожности за скрининг антитела и фагаПревентивне мере

Разматрања бафера

Избор пуфера треба да узме у обзир стабилност циља, микроокружење везивања и минимално неспецифично везивање у стварном сценарију примене. Неповезани протеини, нејонски детерџенти и физиолошке концентрације соли погодују смањењу позадине. Постоје и други услови, као што је за неке циљеве могуће додавање двовалентних катјона или других кофактора у пуфер, протеински кофактори могу бити кофиксирани са циљем, могу се додати у пуфер за сортирање, па чак се могу користити и као средство за хватање циља.

Разматрања притиска

Уобичајена разматрања селекционог притиска укључују концентрацију циљних молекула, време везивања, интензитет прања итд. Друге технике за повећање селекционог притиска укључују употребу денатурината (као што су киселине, уреа и гванидин), органских растварача, повећање температуре или повећање концентрације конкурентских лиганда или циљева у пуферу за прање.
Међу њима, прва рунда скрининга је важна. Прва рунда скрининга је да се из конструисане библиотеке зароби што више позитивних клонова, док се неспецифични клонови уклањају. Треба користити порозне обложене мете или велики број растворљивих мета како би се осигурало да се зароби велики број везаних фага и одржи разноликост библиотеке. У наредним рундама скрининга, селекциони притисак треба повећати са повећањем обогаћивања, вишеструким прањем и повећањем времена прања, како би се могли скринирати клонови са високим афинитетом.

Стратегија негативног скрининга

Ознаке антигена и носачи: процес скрининга је да се испитају све супстанце на коњугатима антигена, као што су ознаке, фузиони протеини и помоћни супстрати. Негативни скрининг нециљаних материја може ограничити обогаћивање антитела осим циљног антигена.
Целе ћелије, липозоми, нано-фосфолипидни дискови и VLP-ови могу се негативно скринирати коришћењем симулираних трансфектованих ћелија или нетрансфектованих ћелија приликом скрининга трансфектованих ћелијских линија.
Уклањање сложених антигенских смеша Строги негативни скрининг може се извршити за непознате или сложене циљне молекуле, као што су целе ћелије или нечисти протеини.
Стратегија антитела против специфичних места антигена, једна је елуирање антитела које може да се такмичи са лигандом додавањем високе концентрације лиганда, а друга је блокирање антитела.

Примена фагног дисплеја

*Откривање антитела постаје све важније у савременој медицини. Постоје различити приступи откривању антитела, али се технологија фагног приказа више користи у медицинској науци. Од 1990. године, различити формати антитела се користе за конструисање фагних библиотека, укључујући VH, VHH, scFv, диатела и Fab антитела.
*Библиотеке фагних пептида омогућавају брзо одређивање секвенце протеинских епитопа и постале су моћан алат за испитивање интеракције између епитопа и антигенских рецептора
*Фрагменти антитела се фузирају са G3P фага M13, а клонирањем великог броја гена који кодирају фрагмент антитела, могу се генерисати велике библиотеке антитела за приказ фага из којих се могу одабрати многа различита антитела.
*Систем за приказ фага Т7 има многе предности, укључујући једноставност, високу безбедност, стабилност, лако складиштење и транспорт, па се систем користи у превентивним и терапијским вакцинама.
*Систем за приказ фага Т7 може да детектује различите антигене, као што су површински антигени патогених микроорганизама и антигени рака.

Фаг