Служба за анализу интеракције протеина и протеина

Алпха Лифетецх такође може да обезбеди клијентима тестове протеина, анализу интеракције протеина, тест интеракције протеин-протеин (ЦО-ИП, Вестерн Блот, тест имунопреципитације хроматина) и тест функције протеина како би се задовољиле експерименталне потребе различитих купаца.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Служба за анализу интеракције протеина и протеина

Алпха Лифетецх је већ дуги низ година дубоко ангажован у тестовима протеина, изградио је солидну платформу за тест функције протеина и савладао низ техничких средстава за верификацију интеракције протеина, што може уштедети време научног истраживања или истраживања пројекта док даје стабилне резултате.

Увод у тест интеракције протеин-протеин

Протеини су најкритичнији извршни молекули у било ком облику живота који реагују на упутства ускладиштена у генетском материјалу. Чешће, протеини раде свој посао тако што се понашају као играчи који ступају у интеракцију са другим протеинима, што је очигледније када се функција протеина испита у стварном контексту ћелије. Идентификовање интеракција између протеина је веома важно за биохемијско испитивање појединачног протеина. Анализа интеракције протеина уобичајених врста како следи:

Цо-иммунопреципитатион Ассаи

Принцип методе ко-имунопреципитације је мешање циљног протеина, специфичног антитела и протеина А/Г магнетних куглица за инкубацију, супернатант невезаног протеина се одбацује кроз адсорпцију магнетних куглица на магнетном носачу, а магнетне перле се испиру да би се уклонио протеин и друге нечистоће осим ако нису посебно.

Слика 1 Шематски дијаграм Цо-ИП тестова.(Референтни извор:Коимунопреципитацијски тест - ПубМед (них.гов))

Пулл-довн Ассаи

Повлачењем теста се фиксира познати протеин на магнетној перли и дода супстанца која се детектује. Елуент се детектује за адсорпцију интерагујућих протеина.

Године 1988, Смитх ет ал. пречишћени ГСТ фузиони протеин, који је примењен у пулл-довн тестовима и назива се Гст пулл довн, што значи да се циљном протеину дода ГСТ ознака, ухвати интерагујући протеин кроз ГСХ, елуира везивање и верификује се кроз ВБ тестове.

Слика 2 Шематски дијаграм ГСТ падајућих тестова.(Референтни извор:ГСТ Пулл-Довн тест за проучавање везивања ПИФ4 ин витро – ПубМед (них.гов))

Његово смањење је да користи металне јоне као што су никл или кобалт као медијум, пречисти протеин афинитетном хроматографијом и елуира везивање кроз ВБ експеримент ради верификације.

Поред тога, постоје ДНК Пулл-довн (тест везивања протеина ДНК), РНА Пулл-довн (тест интеракције протеина РНА) и тестови повлачења малих молекула.

ДНК Пулл-довн (тест везивања протеина ДНК) је ин витро метода за одређивање ДНК везивања протеина. ВБ тестовима је откривено да ли се специфични протеини везују за циљну ДНК; Непознати фрагменти ДНК везани за протеине, који ДНК фрагменти су познати МС детекцијом

РНА Пулл-довн (тест интеракције протеина РНА) је ин витро метода за одређивање везивања РНК за протеине. ВБ тестовима је откривено да ли се специфични протеини везују за циљну РНК; Непознати РНК фрагменти везани за протеине, који су РНК фрагменти познати МС детекцијом

СМ пулл-довн (смалл молецуле пулл-довн тестови) могу пронаћи циљне протеине који се специфично везују за мале молекуле, а када се комбинују са МС, циљни протеини малих молекула се могу прецизно прегледати, који се могу поделити на ин витро метод обележавања и биолошки ортогонални метод.

ВБ Екперимент

ВБ експеримент (такође познат као Вестерн Блот експеримент или Вестерн блот), суштина је специфична реакција антигена и антитела, основни принцип је да се одвоје денатурисани протеини путем електрофорезе у СДС полиакриламидном гелу и пренесу на чврсти фазни носач (као што је ПВДФ мембрана, НЦ мембрана) преко мембранског или полу-трансфера. Након блокирања (користећи БСА, млаћеницу, итд.), примарно антитело се примењује да се специфично везује за протеин, а секундарно антитело обележено флуоресцеином се додаје након прања филма. везивањем другог антитела са примарним антителом, циљни протеин се може посматрати развојем боје супстрата и хемилуминисценцијом. Обично се користи за одређивање да ли је одређени протеин експримиран у узорку и грубо анализирање његовог нивоа експресије.

Поређење метода интеракције протеина и протеина

Протеин пулл-довн тестови су слични Цо-ИП тестовима, од којих оба припадају детекцији експеримената интеракције протеина. Разлика између ове две методе је у томе што Цо-ИП тестови добијају интеракцијске протеине познатих протеина, који имају одређену аутентичност, али не могу потврдити да ли интерагујући протеини интерагују директно или индиректно. Пулл-довн тестови су да пронађу непознати протеин у интеракцији са познатим протеином. Може директно да потврди да ли познати протеин интерагује са откривеним протеином, али не може знати ситуацију везивања ин виво.

Технологија ко-имунопреципитације се користи за анализу да ли постоји интеракција између два или више протеина, на основу експеримената имунопреципитације. У поређењу са другим анализама интеракције протеина у експерименталним техникама (ГСТ Пулл-довн, Вестерн Блот, хроматински имунопреципитацијски тест, итд.), Цо-ИП технологија има већу специфичност и поновљивост, што може да избегне високу неспецифичну осетљивост и интеракција протеина у природном стању.

	ГСТ Повуците надоле	Цо-ИП	ВБ
Предност	* Једноставан за руковање *Погодно за пречишћавање различитих протеина	За анализу интеракција ин виво Може се идентификовати са низводним протеином	* Јака специфичност *Квалитативно и квантитативно ин витро
Ограничење	Можда неспецифично везивање Потребна је даља валидација интеракције	Јака зависност од антитела Може доћи до неспецифичног везивања	Одузети време Тешко за употребу за велике анализе протеина
Пример примене	Идентификујте интеракције Комплекс пречишћених протеина	Проучите трансдукцију сигнала Механизам болести	Накнадна анализа интеракција протеин-протеин, протеин-ДНК и протеин-РНА