Моноклонално антитело (mAb) као пионир лекова на бази антитела, више од 100 моноклонских антитела је одобрено за лечење рака, заразних болести, сопствено тржиште за развој лекова, и показује своју јединствену терапеутску вредност. Технологија антитела из појединачних Б ћелија, као нова генерација технологије развоја антитела, може ефикасно и брзо изоловати антитела из појединачних Б ћелија, што је пробој у технологији производње антитела након хибридома и фагног приказа. Технологија сортирања појединачних Б ћелија може се користити за генерисање антитела против више врста као што су зечеви, мишеви, камиле, овце и пилићи. Технологија појединачних Б ћелија има изванредне предности као што су висока специфичност, висока активност и висок афинитет. Заснована на платформи за сортирање појединачних Б ћелија, Алфа Лајфтек има предности у времену скрининга и добијању висококвалитетних антитела. Може да обезбеди дизајн, синтезу и модификацију антигена, имунитет животиња, скрининг обогаћивања појединачних Б ћелија, секвенцирање појединачних ћелија, скрининг високог протока, експресију и пречишћавање, техничке услуге на једном месту као што је функционална верификација како би се задовољиле различите потребе купаца.

Изаберите одговарајући антиген за експерименталне животиње (као што су мишеви, зечеви итд.) за имунолошку стимулацију, тако да могу да произведу специфична антитела против антигена.

Имунизација животиња је почетна фаза стварања антитела. Имунизација животиња је коришћење механизма хуморалног имуног одговора самог организма, кроз континуирану стимулацију антигена, животиње производе јак имуни одговор, а затим луче специфична антитела против специфичних антигена.

Б ћелије су изоловане из периферне крви, слезине или лимфних чворова имуних животиња. Ове Б ћелије су имунолошки стимулисане да производе антитела против специфичних антигена.

Физичким или хемијским методама (као што су центрифугирање градијента густине, сепарација магнетним куглицама итд.) обогаћује се Б ћелија, уклањају се нечистоће у ћелијама, побољшава се чистоћа Б ћелија и ефикасност накнадног сепарирања.

Сортирање ћелија активирано флуоресценцијом (FACS), магнетна сепарација ћелија (MACS), микрофлуидни сортер ћелија (MCS) или друге технике скрининга високог протока, комбиноване са антиген-специфичним обележавањем, могу се користити за скрининг појединачних Б ћелија из обогаћених Б ћелија ради производње циљаних антитела.

Када се једна Б ћелија изолује из мешовите популације Б ћелија, њени гени антитела морају бити секвенцирани технологијом секвенцирања појединачних ћелија и анализирани како би се добиле информације о секвенци ДНК варијабилног региона тешког ланца (VH) и варијабилног региона лаког ланца (VL). Технологија секвенцирања појединачних ћелија углавном укључује три корака: изолацију појединачних ћелија, интрацелуларну амплификацију нуклеинских киселина и анализу секвенцирања. Принцип секвенцирања појединачних ћелија је амплификација трагова ДНК или РНК целог генома изолованих појединачних ћелија како би се добио комплетан геном или транскриптом са високом покривеношћу за секвенцирање високог протока.

Кроз високопропусни скрининг, секвенце гена антитела хиљада Б ћелија могу се добити истовремено, што значајно убрзава брзину откривања антитела. Ове информације о секвенцама могу се даље користити за изградњу и скрининг библиотека антитела.

Сл. 2 Шематски дијаграм хватања појединачних Б ћелија, изградње библиотеке, високопропусног скрининга и секвенцирања.(Извор референце: Масовно паралелно секвенцирање Б-ћелијских рецептора једне ћелије омогућава брзо откривање различитих антиген-реактивних антитела.)

(1) Рекомбинантни протеин: ≥2,5 мг, чистоћа протеина >85%, молекулска тежина протеина већа од 10 kDa, концентрација растворљивог протеина између 0,5 и 5 мг/мл. Ако је потребно пречишћавање афинитета антигена, потребно је додатних 10 мг рекомбинантног протеина.

(2) Полипептиди и мали молекули: Голи пептид ≥10 мг, чистоћа пептида >90%, не мање од 10 AA, спрезање KLH/BSA/OVA или других протеина носача; Мали молекули захтевају претходну структурну процену.