Моноклонска антитела (мАб) као пионир лекова за антитела, више од 100 моноклонских антитела је одобрено за лечење рака, заразних болести, сопственог тржишта развоја лекова и показују своју јединствену терапеутску вредност. Технологија једноструких Б ћелија антитела, као нова генерација технологије за развој антитела, може ефикасно и брзо изоловати антитела из појединачних Б ћелија, што је пробој у технологији производње антитела након хибридома и приказа фага. Технологија сортирања појединачних Б ћелија може се користити за стварање антитела против више врста као што су зечеви, мишеви, камиле, овце и кокошке. Технологија једне Б ћелије има изванредне предности као што су висока специфичност, висока активност и висок афинитет. Заснован на платформи за сортирање појединачних Б ћелија, Алпха Лифетецх има предности у времену скрининга и добијању антитела високог квалитета. Може да обезбеди дизајн, синтезу и модификацију антигена, имунитет животиња, скрининг обогаћивања једне Б ћелије, секвенцирање једне ћелије, скрининг високе пропусности, експресију и пречишћавање, техничке услуге на једном месту као што је функционална верификација како би се задовољиле различите потребе купаца.

Изаберите одговарајући антиген за експерименталне животиње (као што су мишеви, зечеви, итд.) за имунолошку стимулацију, тако да могу да произведу специфична антитела против антигена.

Имунизација животиња је почетна фаза стварања антитела. Имунизација животиња је коришћење механизма хуморалног имуног одговора самог организма, кроз континуирану стимулацију антигена, животиње производе јак имуни одговор, а затим луче специфична антитела против специфичних антигена.

Б ћелије су изоловане из периферне крви, слезине или лимфних чворова имуних животиња. Ове Б ћелије су имунолошки стимулисане да производе антитела против специфичних антигена.

Физичким или хемијским методама (као што је центрифугирање у градијенту густине, одвајање магнетних куглица, итд.) обогаћивање Б ћелија, уклањање ћелија нечистоћа, побољшава чистоћу Б ћелија и ефикасност накнадног одвајања.

Флуоресцентно активирано сортирање ћелија (ФАЦС), магнетно раздвајање ћелија (МАЦС), микрофлуидно сортирање ћелија (МЦС) или друге технике скрининга високе пропусности, у комбинацији са обележавањем специфичним за антиген, могу се користити за скрининг појединачних Б ћелија из обогаћених Б ћелија за производњу циљаних антитела.

Када је једна Б ћелија изолована из мешовите популације Б ћелија, њени гени антитела треба да буду секвенционирани технологијом секвенцирања једне ћелије и анализирани да би се добиле информације о ДНК секвенци варијабилног региона тешког ланца (ВХ) и варијабилног региона лаког ланца (ВЛ). Технологија секвенцирања једне ћелије углавном укључује три корака: изолацију једне ћелије, интрацелуларну амплификацију нуклеинске киселине и анализу секвенцирања. Принцип секвенцирања једне ћелије је да се појача ДНК или РНК целог генома у траговима изолованих појединачних ћелија да би се добио комплетан геном или транскриптом са високом покривеношћу за секвенционирање високе пропусности.

Кроз скрининг високе пропусности, секвенце гена за антитела од хиљада Б ћелија могу се добити истовремено, што значајно убрзава брзину откривања антитела. Ове информације о секвенци могу се даље користити за изградњу библиотеке антитела и скрининг.

Слика 2 Шематски дијаграм хватања једне Б ћелије, конструкција библиотеке, високопропусни скрининг и секвенцирање.(Референтни извор:Масивно паралелно секвенцирање рецептора Б-ћелија од једне ћелије омогућава брзо откривање различитих антитела реактивних антигена.）

(1) Рекомбинантни протеин: ≥2,5 мг, чистоћа протеина >85%, молекулска тежина протеина већа од 10 кДа, концентрација растворљивог протеина између 0,5 и 5 мг/мЛ. Ако је потребно пречишћавање афинитета антигена, потребно је додатних 10 мг рекомбинантног протеина.

(2) Полипептиди и мали молекули: голи пептид ≥10 мг, чистоћа пептида >90%, не мање од 10 АА, спајање КЛХ/БСА/ОВА или других протеина носача; Мали молекули захтевају процену структуре унапред.