Услуга скрининга библиотеке површине квасца

Наше библиотеке приказа квасца имају велики капацитет и велику разноликост, што пружа високу основу за ефикасан скрининг специфичних секвенци антитела.

КОНТАКТИРАЈТЕ НАС

Услуга скрининга библиотеке површине квасца

Алпха Лифетецх је специјализована за изградњу библиотеке приказа квасца и скрининг библиотека антитела, нудећи могућност да се генеришу различити облици библиотека квасца и прегледају на висок афинитет и специфична антитела за клијенте широм света. Са тимом стручних истраживача, напредном технологијом и опремом, можемо да направимо библиотеке квасца које циљају широк спектар протеина повезаних са болестима. Можемо да обезбедимо технологије приказа фага и квасца, укључујући приказ протеинског квасца, приказ малих молекула квасца, приказ квасца антитела итд.

Наше библиотеке приказа квасца имају велики капацитет и велику разноликост, што пружа високу основу за ефикасан скрининг специфичних секвенци антитела. Можемо да направимо различите облике библиотека за приказ антитела квасца (ИгГ, сцФв, ВХХ, Фаб библиотеке антитела), библиотеке протеина, библиотеке пептида, библиотеке цДНК, итд. према вашим потребама. Поред тога, можемо развити и библиотеке антитела различитих својстава, укључујући имунске библиотеке, природне библиотеке, синтетичке библиотеке, полусинтетичке библиотеке и библиотеке антитела за болести.

Увод у систем приказа квасца

Технологија приказа површине квасца је метода приказивања рекомбинантних протеина на површини квасца путем фузије гена. Најчешћи систем приказа квасца користи циљни протеин фузионисан са Ц-терминусом Ага2п подјединице протеина за парење алфа лектина, који се углавном састоји од ознака епитопа на обе стране циљног протеина: Н-терминалне ознаке хемаглутинина 9-амино киселине (ХА) и Ц-терминалне киселине ц-миц амино киселине. Ага2п подјединица од 69 аминокиселина се везује за подјединицу алфа лектина Ага1п од 725 аминокиселина преко две дисулфидне везе, а Ага1п је усидрен за ћелијски зид преко β 1,6-глуканске ковалентне везе. Према томе, циљни протеин се приказује на површини ћелија квасца и потом препознаје одговарајући лиганд. Одвојите функционалне протеине из библиотека кроз скрининг проточне цитометрије.

Слика 1: Принцип приказа површине квасца. (Извор слике:Примене дисплеја површине квасца за протеинско инжењерство.)

Увод у библиотеку за приказ површине квасца

Сортирање приказа квасца засновано је на приказу површине квасца, који се углавном користи за скрининг библиотека антитела које циљају протеине на површини ћелије. Због ниског неспецифичног везивања између ћелија квасца и других ћелијских површина, биолошка селекција квасца може прегледати велике библиотеке везивања како би се пронашле ретке клонове.

Услуга скрининга библиотеке површине квасца

Припремите плазмиде и култивишите ћелије квасца, синтетизујте ДНК која кодира циљни протеин и клонирајте је у вектор експресије квасца који садржи индуцибилне промотере, сигналне пептиде и циљне гене спојене са протеинима на површини (као што је Ага2п). Ген који кодира циљни протеин може се спојити са геном који кодира протеин ћелијског зида квасца (обично Ага2п), а фузионисани ген се може трансформисати у ћелије квасца путем електропорације. Након трансформације, ћелије квасца које експримирају гене антитела на својој површини могу да се подвргну тестовима скрининга специфичним за антиген: библиотека квасца се инкубира са циљним антигеном и ћелије квасца које се специфично везују за њега се бирају. Коришћењем сортирања ћелија активираног флуоресценцијом (ФАЦС) за изоловање ћелија квасца које приказују протеине са жељеним карактеристикама, скрининг библиотеке приказа квасца може да се изведе са максималном величином библиотеке од ~10 ^ 8-10 ^ 9 ћелија квасца. Позитивни клонови се затим могу изоловати за даљу анализу или низводне примене. Једном када се идентификују специфични клонови антитела из библиотеке антитела, они се могу даље карактерисати и масовно производити и пречистити коришћењем техника као што је протеинска А/Г афинитетна хроматографија да би се завршио цео процес скрининга приказа квасца и производње антитела.

Процес скрининга библиотеке приказа квасца

Слика 2 Процес скрининга библиотеке приказа квасца

Ток рада услуге скрининга библиотеке квасца

Степс	Садржај услуге	Временска линија
Припрема антигена	Тип антигена: Ако купац може да обезбеди антигене, одговарајући узорци треба да се испоруче у складу са типом: рекомбинантним протеинима је потребно 3-3,5 мг са захтевом чистоће од преко 85%, мали молекули треба да буду коњуговани са захтевом за чистоћом од преко 90%, синтеза пептида треба да се коњугује са таквим типовима вируса да би се захтевало 90% вируса, потребно је 90% да се инактивира узорак РНК треба да се прегледа да би се спречила деградација, а горе наведени типови антигена се такође могу прилагодити за синтезу.	2-3 недеље
Анимал Иммунити	Број имунизација животиња је 5, а на основу испитивања титра серума потребно је утврдити да ли да се повећа број имунизација. Имунитет на антиген: потенција протеина/вирусног антигена>105; Потенција антигена пептида/малих молекула>10^4	5-6 недеља
Припрема цДНК шаблона	Одвојите плазма ПБМЦ, екстрахујте укупну РНК (комплет за екстракцију РНК) и обрните на цДНК.	1 дан
Изградња библиотеке	Коришћењем цДНК библиотеке као шаблона, ВХХ ген је амплификован са два круга ПЦР-а и конструисан је вектор за приказ квасца за спајање ВХХ гена. Вектор је трансформисан у ћелије квасца електропорацијом да би се конструисала библиотека антитела. Насумично изаберите 48 клонова и идентификујте позитивну стопу (>90%) коришћењем ПЦР методе; Израчунајте капацитет библиотеке (10^7-10^8), НГС секвенцирање да бисте одредили тачну стопу уметања библиотеке (>90%) и разноликост библиотеке.	2 недеље
Библиотека Сцреенинг	Подразумевана три круга скрининга: ФАЦС скрининг протеина обележеног флуоресценцијом, након чега следи НГС секвенцирање у трећем кругу. Позитивни клонови су одабрани за једнограм индукциону експресију и ЕЛИСА детекцију. Сви позитивни клонови су одабрани за секвенцирање гена и одабране су различите секвенце ЦДР региона.	2-3 недеље
Верификација антитела	Конструисање одговарајућих експресионих вектора за секвенце антитела може олакшати експресију антитела, пречишћавање антитела, ЕЛИСА и БЛИ валидацију везивања антигена антитела ради верификације афинитета антитела и блокаду проточне цитометрије да би се потврдила функција ћелије.	1 недеља

Случај скрининга библиотеке на површини квасца

У литератури о платформи за приказ површине квасца за брзо откривање конформационо селективних нанотела, аутори су успоставили комплетну ин витро платформу за откривање нанотела засновану на приказу површине квасца. Прво, синтетичка библиотека нанотела је дизајнирана почевши од гена камиле. Слика Д показује да нанотело има ХА ознаку на карбоксилном крају, а затим је нанотело ковалентно фиксирано на ћелијском зиду квасца. Слика Е приказује процес скрининга нанотела. Нанотела квасца са афинитетом према антигену су изолована, амплификована и више пута одабрана за антитела помоћу ФАЦС-а. Аутори су открили конформациона селективна нанотела која циљају два различита људска ГПЦР-а преко ове платформе.