Antibody Engineering ke eng?

Ka thuso ea boenjiniere ba li-antibody, ho khonne ho fetola boholo ba limolek'hule, pharmacokinetics, immunogenicity, kamano e tlamang, e ikhethang le ts'ebetso ea phello ea li-antibodies. Kamora ho kopanya li-antibodies, ho tlamaha ha li-antibodies ho li etsa tsa bohlokoa haholo tlhahlobong ea bongaka le kalafong. Ka boenjiniere ba antibody, ba ka fihlela litlhoko tsa nts'etsopele ea pele ea lithethefatsi le tlhahlobo ea tlhahlobo.

Sepheo sa boenjineri ba li-antibody ke ho rala le ho hlahisa mesebetsi e tobileng haholo, e tsitsitseng eo li-antibodies tsa tlhaho li ke keng tsa e fihlela, ho rala motheo oa tlhahiso ea li-antibodies tsa kalafo.

Alpha Lifetech, e nang le boiphihlelo bo pharaletseng ba projeke ea boenjineri ba li-antibody, e ka fana ka lits'ebeletso tse ikhethileng tsa li-monoclonal le polyclonal antibody bakeng sa mefuta e mengata, hammoho le lits'ebeletso tsa kaho le lits'ebeletso tsa tlhahlobo ea phage. Alpha Lifetech e ka fa bareki li-antibodies tsa boleng ba biosimilar le lihlahisoa tsa protheine tse kopaneng, hammoho le lits'ebeletso tse tsamaellanang, ho hlahisa li-antibodies tse sebetsang hantle, tse tobileng haholo, le tse tsitsitseng. Ka ho sebelisa li-antibody tse felletseng, sethala sa liprotheine le lits'ebetso tsa ponts'o ea phage, re fana ka lits'ebeletso tse koahelang karolo e holimo le tlase ea tlhahiso ea li-antibody, ho kenyeletsoa lits'ebeletso tsa tekheniki tse kang antibody humanization, tlhoekiso ea li-antibody, tatellano ea li-antibody, le netefatso ea antibody.

Mokhahlelo oa pele oa boenjiniere ba antibody o amana le mahlale a mabeli:

-- Recombinant DNA theknoloji

-- Theknoloji ea Hybridoma

Tsoelo-pele e potlakileng ea boenjiniere ba antibody e amana le mahlale a mararo a bohlokoa:

-- Theknoloji ea ho kopanya liphatsa tsa lefutso le polymerase chain reaction

--Polelo ea protheine: Liprotheine tse kopanetsoeng li hlahisoa ke litsamaiso tsa polelo tse kang tomoso, livaerase tse bōpehileng joaloka molamu le limela.

--Moetso oa sebopeho o thusoang ke komporo

Moloko oa pele oa li-antibodies o ile oa etsoa motho bakeng sa tlhahiso ea li-antibodies tsa chimeric, moo sebaka se feto-fetohang sa li-antibodies tsa monoclonal se neng se hokahane le sebaka sa kamehla sa limolek'hule tsa IgG tsa motho. Sebaka se tlamang sa antigen (CDR) sa moloko oa bobeli oa moloko oa bobeli oa anti-monoclonal antibody se ile sa kenngoa ho IgG ea motho. Ntle le sebaka sa CDR, li-antibodies tse ling kaofela ke li-antibodies tse batlang li le batho, 'me ho ile ha etsoa boiteko ba ho qoba ho fana ka likarabo tsa anti mouse antibody (HAMA) ha ho sebelisoa li-anti mouse clone bakeng sa phekolo ea batho.

 

Ho haha ​​​​laeborari ea ponts'o ea phage, mohato oa pele ke ho fumana liphatsa tsa lefutso tse kenyang li-antibodies, tse ka qheleloang ka thoko ho lisele tsa B tsa liphoofolo tse entetsoeng (kaho ea laebrari ea 'mele), e ntšitsoeng ka kotloloho ho liphoofolo tse sa entoeng (kaho ea laeborari ea tlhaho), kapa e bokelletsoeng ka har'a vitro e nang le liphatsa tsa lefutso tsa antibody (kaho ea laeborari ea maiketsetso). Joale, liphatsa tsa lefutso li matlafatsoa ke PCR, li kenngoa ka har'a plasmids, 'me li hlahisoa ka mekhoa e loketseng ea ho amohela (yeast expression (hangata Pichia pastoris), polelo ea prokaryotic (hangata E. coli), polelo ea lisele tsa mammalian, polelo ea lisele tsa semela, le polelo ea lisele tsa kokoanyana tse tšoaelitsoeng ke livaerase tse bōpehileng joaloka molamu). E tloaelehileng haholo ke mokhoa oa ho bua oa E. coli, o kopanyang tatellano e itseng ea antibody ea khouto holim'a phage le ho kenya e 'ngoe ea liprotheine tsa khetla ea phage (pIII kapa pVIII). The gene fusion of, 'Me e bontšoa holim'a bacteriophages. Moko oa theknoloji ena ke ho aha laeborari ea ponts'o ea phage, e nang le molemo ho feta lilaebrari tsa tlhaho ka hore e ka ba le tlamo e khethehileng. Ka mor'a moo, li-antibodies tse nang le li-antigen tse khethehileng li hlahlojoa ka mokhoa oa khetho ea likokoana-hloko, li-antigen tse lebisitsoeng li lokisoa, li-phages tse sa tlangoa li hlatsuoa khafetsa, 'me li-phages tse tlamiloeng li hlatsuoa bakeng sa ntlafatso e eketsehileng. Ka mor'a ho pheta-pheta makhetlo a mararo kapa ho feta, li-antibodies tse phahameng le tse nang le kamano e phahameng li aroloa.

Setšoantšo sa 3: Kaho ea Laebrari ea Likokoana-hloko le Tlhahlobo

Theknoloji ea recombinant DNA e ka sebelisoa ho hlahisa likhechana tsa antibody. Lisireletsi tsa masela li ka qala feela ka hydrolyzed ka gastric protease ho hlahisa (Fab ') 2 fragments, e ntan'o siloa ke papain ho hlahisa likaroloana tsa Fab ka bomong. Sekhechana sa Fv se na le VH le VL, tse nang le botsitso bo fokolang ka lebaka la ho ba sieo ha li-bond tsa disulfide. Ka hona, VH le VL li hokahantsoe hammoho ka peptide e khuts'oane ea 15-20 amino acid ho theha letoto le le leng la ketane e feto-fetohang (scFv) le nang le boima ba molek'hule bo ka bang 25KDa.

Boithuto ba sebopeho sa antibody ho Camelidae (Kamele, LIama, le Alpaca) bo hlakisitse hore li-antibodies li na le liketane tse boima feela 'me ha li na liketane tse bobebe, ka hona li bitsoa li-antibodies tsa ketane e boima (hcAb). Sebaka se feto-fetohang sa li-antibodies tsa ketane e boima e bitsoa single domain antibodies kapa nanobodies kapa VHH, e nang le boholo ba 12-15 kDa. Joaloka li-monomers, ha li na litlamo tsa disulfide 'me li tsitsitse haholo, li na le kamano e phahameng haholo bakeng sa li-antigen.

Setšoantšo sa 5: Antibody e boima ea Ketane le VHH/ Nanobody

Cell free expression e sebelisa polelo ea tlhaho kapa ea maiketsetso ea DNA ho fihlela in vitro protein synthesis, hangata e sebelisa mokhoa oa E. coli expression. E hlahisa liprotheine kapele mme e qoba moroalo oa metabolic le cytotoxic liseleng ha e hlahisa liprotheine tse ngata tse kopantsoeng ka har'a vivo. E ka boela ea hlahisa liprotheine tseo ho leng thata ho li etsa, tse kang tseo ho leng thata ho li fetola ka mor'a ho fetolela kapa ho etsa liprotheine tsa lera.