Platform Pangukuran Afinitas
Dumasar kana platform Octet sareng Biacore-T2000, Alpha Lifetech tiasa nyayogikeun jasa nangtukeun afinitas anu tiasa dipercaya.
TAROS KAMI01
Platform Pangukuran Afinitas
Dumasar kana platform Octet sareng Biacore-T2000, Alpha Lifetech tiasa nyayogikeun jasa nangtukeun afinitas anu tiasa dipercaya. Kami tiasa nyayogikeun nangtukeun afinitas pikeun sababaraha sampel, sapertos antibodi, sél, protéin, molekul leutik, jsb. Aya rupa-rupa metode nangtukeun afinitas, kalebet résonansi plasmon permukaan (SPR) sareng nangtukeun afinitas gangguan bio-lapisan (BLI).
Alpha Lifetech gaduh platform panangtuan afinitas anu profésional sareng akurat anu ngagabungkeun ELISA sareng panangtuan afinitas, nyayogikeun hasil panangtuan afinitas anu profésional, efisien, gancang, sareng tepat pikeun para nasabah di sakumna dunya. Kami tiasa nawiskeun dua metode pikeun para nasabah pikeun dipilih: Panangtuan Afinitas Gancang sareng Panangtuan Afinitas anu Tepat. Panangtuan afinitas gancang nyaéta panangtuan konsentrasi tunggal, sedengkeun panangtuan afinitas anu tepat tiasa ngukur afinitas tina konsentrasi anu béda. Dilarapkeun kana ulikan interaksi antara rupa-rupa sanyawa molekul leutik, péptida, protéin, oligonukleotida, sareng oligomer, ogé lipid, baktériofag, virus, sareng sél. Platform pangukuran afinitas tiasa neundeun pondasi pikeun uji sareng panyaringan ubar afinitas, panemuan antibodi, sareng ngagampangkeun panalungtikan salajengna.
Bubuka kana Afinitas Pangiket
Afinitas penting dina meunteun interaksi antarmolekul, uji afinitas ubar, sareng panyaringan ubar. Interaksi antarmolekul tiasa dijelaskeun ku persamaan: L + R = LR, dimana L ngagambarkeun ligan bébas, R ngagambarkeun reséptor anu teu kabeungkeut, sareng LR ngagambarkeun kompleks ligan-reséptor anu kabeungkeut. Réaksi pangiket ngajelaskeun interaksi antarmolekul, dimana pertukaran dinamis lumangsung antara kaayaan kabeungkeut sareng teu kabeungkeut salami réaksi dugi ka kasaimbangan kahontal. Ieu tiasa dijelaskeun ku dua konstanta laju, Kon (konstanta laju pangiket) sareng Koff (konstanta laju disosiasi), tina réaksi. Nilai Kd, anu mangrupikeun timbal balik tina konstanta pangiket (Ka), nyaéta Koff/Kon, konstanta penting pikeun afinitas réaksi. Ku alatan éta, beuki pageuh pangiket antara dua molekul, beuki luhur afinitasna. Beuki leutik nilai Kd, sabalikna. Persamaan ieu tiasa digambarkeun salaku kurva bentuk S dina grafik semi-logaritmik, kalayan konsentrasi ligan dina sumbu-x (dina sumbu skala logaritmik) sareng wates fraksional dina sumbu-y. Garis putus-putus ngagambarkeun konsentrasi ligan dina Kd (1 nM) tina fraksi pangiket 0,5.
Gambar 1: Kurva pangiket sigmoidal tina rupa-rupa konsentrasi ligan anu kaiket kana reséptor permukaan sél. (Sumber rujukan: Hunter SA, Cochran JR. Uji Pangiket Sél pikeun Nangtukeun Afinitas Interaksi Protéin-Protéin: Téhnologi sareng Pertimbangan.)
Métode pikeun Nangtukeun Afinitas
Uji afinitas pengikatan ELISA
Téhnik anu seueur dianggo pikeun nalungtik afinitas antibodi dumasar kana metode ELISA, anu dicirikeun ku genah, kecepatan, kesederhanaan, sensitivitas anu luhur, sareng spésifisitas anu kuat. Éta tiasa nganggo sajumlah alit réagen (nyaéta, antibodi sareng antigen) sareng ngukur afinitas antibodi tanpa peryogi réagen purifikasi. Ku cara ngimobilisasi antigen dina permukaan padet sareng ngadeteksina nganggo antibodi primér, antibodi sekundér anu dilabélan réaksi sareng antibodi primér pikeun maca sareng nganalisis data dina pamaca uji imunosorben anu aya hubunganana sareng énzim (ELISA).
Gambar 2: Uji sapertos ELISA pikeun meunteun beungkeutan péptida anu dirancang kana targetna. (Sumber rujukan: Hajikarimlou, Maryam, et al., 2022. Hiji pendekatan komputasi pikeun ngarancang péptida gancang anu ngadeteksi protéin permukaan SARS-CoV-2 S.)
Uji afinitas pangiket Resonansi Plasmon Permukaan (SPR)
Téhnologi SPR utamina ngadeteksi parobahan dina indéks bias. Kalayan bantosan fénoména optik tradisional sareng fénoména résonansi cahaya, téknologi analisis biosénsing pikeun interaksi antara biomolekul tiasa diwangun pikeun ngadeteksi interaksi antara ligan sareng analit dina chip biosénsing. Sinyal khusus ngeunaan beungkeutan sareng interaksi antara biomolekul tiasa diala ku cara ngawas parobahan dinamis dina sudut SPR salami réaksi biologis.
Gambar 3: Analisis résonansi plasmon permukaan (SPR) tina pangiket H10/AGR2. (Sumber rujukan: Garri, Carolina, et al., 2018. Idéntifikasi, karakterisasi, sareng aplikasi péptida énggal ngalawan homolog gradién anterior 2 (AGR2).)
Uji afinitas pangiket Bio Layer Interference (BLI)
Téhnologi interferensi biofilm nyaéta téknik deteksi optik monitoring real-time anu bébas labél, utamana dipaké pikeun analisis kuantitatif komprehensif interaksi intermolekul sareng nangtukeun konsentrasi protéin. Téhnologi ieu ngagunakeun biosensor berbasis probe pikeun langsung ngadeteksi parobahan dina ketebalan biofilm dina sampel. Ku cara ngadeteksi parobahan pamindahan spéktrum interferensi, beungkeutan sareng disosiasi antara biomolekul anu berinteraksi dina permukaan sénsor dideteksi, sareng pamindahan real-time (nm) tina spéktrum interferensi ditampilkeun.
Gambar 4: Uji interferometri biolayer (BLI) antara aLDRG sareng kitinoligosakarida. (Sumber rujukan: Li, Bing, 2023. Ciri-ciri Transkriptom Komparatif antara Rhizomorf sareng Hifa Armillaria sp. 541 Milu dina Simbiosis Jamur kalayan Penekanan kana Domain LysM.)
Babandingan Téhnologi BLI sareng SPR
| Ngaran Téhnologi | BLI (Interferometri Bio-Lapisan) | SPR (Résonansi Plasmon Permukaan) |
|---|---|---|
| Prinsip | Ngukur parobahan dina pola interferensi cahaya anu dipantulkeun dina permukaan sénsor, ngadeteksi interaksi molekuler ngalangkungan parobahan ketebalan optik dina lapisan bio. Éta nyayogikeun kurva beungkeutan waktos nyata (pangukuran langsung). | Ngukur interaksi molekuler ku cara ngadeteksi parobahan sinyal dina indéks bias caket permukaan chip sensor (kajadian nalika cahaya berinteraksi sareng antarmuka emas sareng kaca, nyababkeun parobahan dina indéks bias). Data dipantulkeun salaku parobahan dina sudut résonansi (pangukuran teu langsung). |
| Pabrikan | Sartorius | GE |
| Instrumen | Biosensor ForteBio | Instrumen SPR Buka |
| Sistem | Sistem Oktet ForteBio (pikeun analisis interaksi molekuler) | TraceDrawer (dikembangkeun ku Ridgeview Instruments, Swédia) |
| Kauntungan | 1. Kompatibilitas sampel anu lega, stabilitas anu saé pisan, khususna pikeun ngadeteksi molekul leutik (sarat khusus pikeun kamurnian sampel sareng kaayaan buffer kirang ketat). Chip SSA hemat biaya pikeun studi pangiket. 2. Throughput anu langkung gancang sareng waktos ékspérimén anu langkung pondok dibandingkeun sareng SPR. | 1. Riwayat perkembangan anu langkung panjang, nawiskeun sensitivitas anu langkung luhur dibandingkeun sareng BLI. 2. Presisi sareng kateguhan anu langkung ageung pikeun aplikasi khusus, sapertos ngadeteksi protéin anu langka atanapi berharga kalayan data afinitas sareng spésifisitas anu langkung luhur. |
| Kakurangan | 1. Katepatan data rada handap dibandingkeun sareng SPR. 2. Meryogikeun pangropéa anu ati-ati kana instrumen ieu. 3. Hargana chip SSA relatif mahal. | 1. Kaayaan buffer pikeun ngadeteksi molekul anu alit pisan tiasa nungtut, ningkatkeun résiko kagagalan deteksi. 2. Chip umumna langkung mahal tibatan anu dianggo dina BLI. 3. Panguapan sampel salami ékspérimén anu diperpanjang tiasa janten masalah. |
| Jenis Chip | Chip SSA | Chip NTA |
Ruang Lingkup Pangukuran Afinitas
Nangtukeun afinitas tiasa kalebet antigen-antibodi (antigen-antibodi kuat, antigen-antibodi lemah), protéin-protéin, protéin-péptida, protéin-molekul leutik, sareng protéin DNA/RNA (aptamer). Nalika ngukur KD, perlu terang salah sahiji konsentrasi molar. Nalika molekul leutik ngabeungkeut, hiji beurat molekul teu tiasa kirang ti 150 dalton.
| Tipe | Ruang lingkup | Tindakan pancegahan |
|---|---|---|
| 1. Antigen-Antibodi | 10^-6 nepi ka 10^-12 | Nilai Kd tina kaseueuran antibodi aya dina kisaran 10^-6-10^-7 dugi ka 10^-9. Sacara umum dipercaya yén antibodi afinitas luhur aya dina 10^-9, sedengkeun afinitas luhur. Antibodi aya dina 10^-12. |
| 2. Protéin - Molekul Leutik | 10^-4 nepi ka 10^-5 | KD molekul leutik jeung protéin aya antara 10^-4 jeung 10^-5, sedengkeun 10^-3 jeung 10^-7 normal sarta teu bisa ngahontal 10^-10. Molekul leutik kovalén bisa ngahontal 10^-10. |
| 3. Avidin-Biotin | 10^-14 | Afinitas tiasa kalayan gampang ngalaman pangiket anu non-spésifik, sareng afinitas streptavidin atanapi deglikosilasi tiasa dianggo. |
| 4. DNA-Protéin | 10^-8 nepi ka 10^-10 | DNA anu kualitasna luhur sareng lengkep; ati-ati pikeun nyegah pangaruh éléktroforésis. |
Sarat sampel pikeun nangtukeun afinitas
| Conto | Sarat |
|---|---|
| 1. Sampel Molekul Ageung | Protéin > 50 µg, antibodi > 100 µg, protéin biotinilasi > 200 µg; protéin tanpa biotin > 2 mg, sarat kamurnian > 90%, larutan buffer: PBS, HEPBS. Teu tiasa ngandung gugus imidazol; diperyogikeun kontrol kualitas. |
| 2. Sampel Molekul Leutik | Kuantitas >1mg, bubuk atanapi cair, cairan kedah leyur dina cai atanapi DMSO. Coba ulah ngandung gliserol, imidazol, trehalosa atanapi uyah sanésna; cobian hindari réagen kalayan gugus amino sapertos Tris dina buffer, umumna PBS, HEPPS, jsb. tanpa réagen organik. |
Analisis sababaraha sampel
Alpha Lifetech tiasa nyayogikeun uji afinitas pikeun rupa-rupa sampel, kalebet antibodi, sél, protéin, sareng biomolekul sanésna.
Platform téknologi dewasa
Kami gaduh téknologi canggih sapertos spr binding assay, bli binding assay, sareng elisa binding assay.
Pilihan proyék anu fleksibel
Konsumén tiasa milih antara nangtukeun afinitas gancang sareng nangtukeun afinitas anu tepat.
Hasil presisi tinggi
Tim téknis profésional kami tiasa mastikeun hasil nangtukeun afinitas anu efisien, akurat, sareng tiasa dipercaya.
Studi KasusKASUS
Uji afinitas gancang BLI antibodi sareng uji afinitas aptamer
Tangkep aptamer biotinilasi kalayan spésifisitas probe SA teras leyurkeun. Larutkeun sareng éncérkeun sampel kana konsentrasi anu tetep, padetkeun aptamer Target 1-5 anu ditangkep spésifik probe, teras saatos saturasi sinyal, iketkeun kana sampel. Teras tambahkeun kana pelat 96-sumur.
Gambar 5: Distribusi posisi deteksi pikeun sampel pelat 96-sumur. B nujul kana buffer anu dianggo pikeun ngimbangan sareng disosiasi sensor. L: Biotin Target 1-5 aptamers, 221: Sampel.
Perhatikeun pangeboran pikeun mastikeun stabilitas sareng akurasi data, sareng atur program anu saluyu pikeun kéngingkeun hasilna:
Gambar 6: Diagram pas interaksi antara aptamer Target 1, 2, sareng 3 sareng sampel. (CH 1 \ 3 \ 5 ngagambarkeun sinyal sareng data tina interaksi antara probe aptamer Target 1 \ 2 \ 3 anu padet sareng sampel.)
Gambar 7: Diagram pas interaksi antara aptamer Target 4 sareng 5 sareng sampel. (CH 1 \ 3 ngagambarkeun sinyal sareng data interaksi antara probe aptamer Target 4 \ 5 anu padet sareng sampel.)
hasilna nunjukkeun
Hasil ieu didapet: Afinitas adaptor Target 1 kana sampel saatos dipasang nyaéta 9,41 ^ -8; afinitas adaptor Target 2 kana sampel saatos dipasang nyaéta 8,32 ^ -8; afinitas adaptor Target 3 kana sampel saatos dipasang nyaéta 8,64 ^ -8; afinitas adaptor Target 4 kana sampel saatos dipasang nyaéta 3,70 ^ -8; afinitas adaptor Target 5 kana sampel saatos dipasang nyaéta 3,01 ^ -8.
Upami anjeun gaduh patarosan, mangga ngahubungi kami iraha waé.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102