Naon ari Rékayasa Antibodi téh?

Kalayan bantosan rékayasa antibodi, parantos tiasa ngarobih ukuran molekul, farmakokinetik, imunogenisitas, afinitas pangiket, spésifisitas sareng fungsi éféktor antibodi. Saatos nyintésis antibodi, pangiket spésifik antibodi ngajantenkeun aranjeunna berharga pisan dina diagnosis sareng pangobatan klinis. Ngaliwatan rékayasa antibodi, aranjeunna tiasa minuhan kabutuhan pamekaran awal ubar sareng diagnostik.

Tujuan rékayasa antibodi nyaéta pikeun ngarancang sareng ngahasilkeun fungsi anu spésifik pisan sareng stabil anu teu tiasa kahontal ku antibodi alami, anu ngawangun dasar pikeun produksi antibodi terapeutik.

Alpha Lifetech, kalayan pangalaman proyék anu lega dina rékayasa antibodi, tiasa nyayogikeun jasa antibodi monoklonal sareng poliklonal anu disaluyukeun pikeun sababaraha spésiés, ogé jasa konstruksi sareng panyaringan perpustakaan antibodi tampilan fag. Alpha Lifetech tiasa nyayogikeun konsumén antibodi biosimilar anu kualitasna saé sareng produk protéin rekombinan, ogé jasa anu saluyu, pikeun ngahasilkeun antibodi anu efisien, spésifik pisan, sareng stabil. Ku cara ngamangpaatkeun platform antibodi, protéin, sareng sistem tampilan fag anu komprehensif, kami nyayogikeun jasa anu ngawengku hulu sareng hilir produksi antibodi, kalebet jasa téknis sapertos humanisasi antibodi, purifikasi antibodi, sekuensing antibodi, sareng validasi antibodi.

Tahap pionir rékayasa antibodi aya patalina jeung dua téknologi:

--Téhnologi DNA Rekombinan

--Téhnologi Hibridoma

Kamajuan rékayasa antibodi anu gancang aya patalina jeung tilu téknologi penting:

--Téhnologi kloning gén sareng réaksi ranté polimérase

--Éksprési protéin: Protéin rekombinan dihasilkeun ku sistem éksprési sapertos ragi, virus anu bentukna batang, sareng pepelakan

--Desain struktural dibantuan komputer

Antibodi generasi kahiji dihumanisasi pikeun ngahasilkeun antibodi kimérik, dimana daérah variabel antibodi monoklonal beurit dihubungkeun kana daérah konstan molekul IgG manusa. Daérah pangiket antigén (CDR) tina antibodi monoklonal beurit generasi kadua dicangkokkeun kana IgG manusa. Iwal daérah CDR, sadaya antibodi anu sanés ampir antibodi manusa, sareng aya usaha pikeun nyingkahan ngainduksi réspon antibodi anti beurit manusa (HAMA) nalika nganggo antibodi klon beurit pikeun pangobatan manusa.

 

Pikeun ngawangun perpustakaan tampilan fag, léngkah munggaran nyaéta kéngingkeun gén anu ngodekeun antibodi, anu tiasa diisolasi tina sél B sato anu diimunisasi (konstruksi perpustakaan imun), diekstrak langsung tina sato anu henteu diimunisasi (konstruksi perpustakaan alami), atanapi bahkan dirakit in vitro sareng fragmen gén antibodi (konstruksi perpustakaan sintétis). Teras, gén-gén éta diamplifikasi ku PCR, diasupkeun kana plasmid, sareng diekspresikeun dina sistem host anu cocog (éksprési ragi (biasana Pichia pastoris), éksprési prokariotik (biasana E. coli), éksprési sél mamalia, éksprési sél tutuwuhan, sareng éksprési sél serangga anu kainféksi ku virus bentuk batang). Anu paling umum nyaéta sistem éksprési E. coli, anu ngahijikeun runtuyan antibodi pangkodean khusus kana fag sareng ngodekeun salah sahiji protéin cangkang fag (pIII atanapi pVIII). Fusi gén, Sareng ditampilkeun dina permukaan baktériofag. Inti tina téknologi ieu nyaéta pikeun ngawangun perpustakaan tampilan fag, anu gaduh kaunggulan tibatan perpustakaan alami sabab tiasa gaduh beungkeutan khusus. Salajengna, antibodi anu spésifisitasna antigén disaring ngaliwatan prosés seleksi biologis, antigén target dibenerkeun, fag anu teu kaiket dikumbah sababaraha kali, sareng fag anu kaiket dikumbah pikeun pangayaan salajengna. Saatos tilu atanapi langkung puteran pangulangan, antibodi spésifisitas anu luhur sareng afinitas anu luhur diisolasi.

Gambar 3: Konstruksi sareng Panyaringan Perpustakaan Antibodi

Téhnologi DNA rekombinan tiasa dianggo pikeun ngahasilkeun fragmen antibodi. Antibodi Fab mimitina ngan ukur tiasa dihidrolisis ku protéase lambung pikeun ngahasilkeun (Fab') 2 fragmen, anu teras dicerna ku papain pikeun ngahasilkeun fragmen Fab individu. Fragmen Fv diwangun ku VH sareng VL, anu gaduh stabilitas anu goréng kusabab henteuna beungkeut disulfida. Ku alatan éta, VH sareng VL dihubungkeun babarengan ngaliwatan péptida pondok tina 15-20 asam amino pikeun ngabentuk antibodi fragmen variabel ranté tunggal (scFv) kalayan beurat molekul sakitar 25KDa.

Ulikan ngeunaan struktur antibodi dina Camelidae (Camel, LIama, sareng Alpaca) parantos ngajelaskeun yén antibodi ngan ukur gaduh ranté beurat sareng teu aya ranté hampang, ku kituna disebut antibodi ranté beurat (hcAb). Domain variabel antibodi ranté beurat disebut antibodi domain tunggal atanapi nanobodi atanapi VHH, kalayan ukuran 12-15 kDa. Salaku monomer, aranjeunna teu gaduh beungkeut disulfida sareng stabil pisan, kalayan afinitas anu luhur pisan pikeun antigén.

Gambar 5: Antibodi Ranté Beurat sareng VHH/Nanobody

Éksprési bébas sél ngamangpaatkeun éksprési DNA alami atanapi sintétis pikeun ngahontal sintésis protéin in vitro, biasana nganggo sistem éksprési E. coli. Éta ngahasilkeun protéin gancang sareng nyingkahan beban métabolik sareng sitotoksik dina sél nalika ngahasilkeun protéin rekombinan dina jumlah anu ageung in vivo. Éta ogé tiasa ngahasilkeun protéin anu hésé disintésis, sapertos anu hésé dirobih saatos tarjamahan atanapi disintésis protéin mémbran.