Naon ari Téknik Antibodi?

Kalayan bantosan rékayasa antibodi, parantos tiasa ngarobih ukuran molekular, pharmacokinetics, immunogenicity, afinitas mengikat, spésifisitas sareng fungsi éféktor antibodi. Saatos nyintésis antibodi, beungkeutan khusus antibodi ngajantenkeun aranjeunna penting pisan dina diagnosis sareng perawatan klinis. Ngaliwatan rékayasa antibodi, aranjeunna tiasa nyumponan kabutuhan ubar sareng pangembangan awal diagnostik.

Tujuan rékayasa antibodi nyaéta pikeun ngarancang sareng ngahasilkeun fungsi anu spésifik, stabil anu henteu tiasa dihontal ku antibodi alami, nempatkeun pondasi pikeun ngahasilkeun antibodi terapeutik.

Alpha Lifetech, kalayan pangalaman proyék éksténsif na dina rékayasa antibodi, tiasa nyayogikeun jasa antibodi monoklonal sareng poliklonal pikeun sababaraha spésiés, ogé konstruksi perpustakaan antibodi sareng jasa saringan phage. Alpha Lifetech bisa nyadiakeun konsumén jeung antibodi biosimilar kualitas sarta produk protéin rekombinan, kitu ogé jasa pakait, pikeun ngahasilkeun efisien, kacida spésifik, sarta antibodi stabil. Ku ngagunakeun antibodi komprehensif, platform protéin sareng sistem tampilan phage, kami nyayogikeun jasa anu nyertakeun hulu sareng hilir produksi antibodi, kalebet jasa téknis sapertos humanisasi antibodi, purifikasi antibodi, urutan antibodi, sareng validasi antibodi.

Tahap pioneering rékayasa antibodi aya hubunganana sareng dua téknologi:

--Teknologi DNA rékombinan

--Teknologi Hybridoma

Ngembangkeun gancang rékayasa antibodi aya hubunganana sareng tilu téknologi penting:

- Téknologi kloning gen sareng réaksi ranté polimérase

--Éksprési protéin: Protéin rékombinan dihasilkeun ku sistem éksprési sapertos ragi, virus ngawangun rod, sareng pepelakan.

- Desain struktural dibantuan komputer

Generasi kahiji antibodi dimanusiakeun pikeun ngahasilkeun antibodi chimeric, dimana daérah variabel antibodi monoklonal beurit dihubungkeun sareng daérah konstan molekul IgG manusa. Wewengkon mengikat antigen (CDR) tina antibodi monoklonal mouse generasi kadua ditransplantasikeun kana IgG manusa. Kacuali daérah CDR, sadaya antibodi sanés ampir antibodi manusa, sareng usaha dilakukeun pikeun ngahindarkeun réspon antibodi anti beurit manusa (HAMA) nalika nganggo antibodi klon beurit pikeun pengobatan manusa.

 

Pikeun ngawangun perpustakaan tampilan phage, lengkah kahiji nyaéta pikeun ménta gén encoding antibodi, nu bisa diisolasi tina sél B sato imunisasi (konstruksi perpustakaan imun), sasari langsung ti sato non immunized (konstruksi perpustakaan alam), atawa malah dirakit in vitro kalawan fragmen gén antibodi (konstruksi perpustakaan sintétik). Saterusna, gén diamplifikasi ku PCR, diasupkeun kana plasmid, sarta diekspresikeun dina sistem inang nu cocog (ekspresi ragi (biasana Pichia pastoris), éksprési prokariot (biasana E. coli), éksprési sél mamalia, éksprési sél tutuwuhan, jeung éksprési sél serangga kainfeksi virus ngawangun rod). Nu paling umum nyaéta sistem éksprési E. coli, nu ngahijikeun runtuyan antibodi encoding husus kana fag jeung nangkodkeun salah sahiji protéin cangkang fag (pIII atawa pVIII). The fusi gén tina, Jeung dipintonkeun dina beungeut bacteriophages. Inti tina téknologi ieu nyaéta pikeun ngawangun perpustakaan tampilan phage, anu gaduh kaunggulan dibandingkeun perpustakaan alam anu tiasa gaduh beungkeutan khusus. Satuluyna, antibodi kalawan spésifisitas antigén disaring ngaliwatan prosés seléksi biologis, antigén udagan dibenerkeun, fag unbound sababaraha kali dikumbah jauh, sarta fag kabeungkeut dikumbah jauh pikeun pengayaan salajengna. Saatos tilu atanapi langkung babak pengulangan, spésifisitas tinggi sareng antibodi afinitas tinggi diisolasi.

Gbr 3: Konstruksi Perpustakaan Antibodi sarta Screening

Téknologi DNA rékombinan tiasa dianggo pikeun ngahasilkeun fragmen antibodi. Antibodi Fab mimitina ngan bisa dihidrolisis ku protease lambung pikeun ngahasilkeun (Fab ') 2 fragmen, nu lajeng dicerna ku papain pikeun ngahasilkeun fragmen Fab individu. Fragmén Fv diwangun ku VH jeung VL, nu boga stabilitas goréng alatan henteuna beungkeut disulfida. Ku alatan éta, VH jeung VL dihijikeun ngaliwatan péptida pondok tina 15-20 asam amino pikeun ngabentuk hiji ranté variabel fragmen (scFv) antibodi kalawan beurat molekul kira 25KDa.

Ulikan ngeunaan struktur antibodi dina Camelidae (Onta, LIama, jeung Alpaca) geus ngajelaskeun yén antibodi ngan boga ranté beurat jeung euweuh ranté lampu, ku kituna maranéhanana disebut antibodi ranté beurat (hcAb). Domain variabel antibodi ranté beurat disebut antibodi domain tunggal atanapi nanobodies atanapi VHH, kalayan ukuran 12-15 kDa. Salaku monomér, aranjeunna henteu gaduh beungkeut disulfida sareng stabil pisan, kalayan afinitas anu luhur pikeun antigén.

Gambar 5: Antibodi Ranté beurat sareng VHH / Nanobody

Éksprési bébas sél ngagunakeun éksprési DNA alam atawa sintétik pikeun ngahontal sintésis protéin in vitro, ilaharna ngagunakeun sistem éksprési E. coli. Éta ngahasilkeun protéin gancang sareng ngahindarkeun beban métabolik sareng sitotoksik dina sél nalika ngahasilkeun protéin rékombinan anu ageung dina vivo. Éta ogé tiasa ngahasilkeun protéin anu hese disintésis, sapertos anu hese dimodifikasi saatos ditarjamahkeun atanapi nyintésis protéin mémbran.