Layanan Pangwangunan Antibodi Monoklonal

Alpha Lifetech Inc.tiasa nyayogikeun prediksi epitop, sintésis péptida, éksprési protéin, produksi antibodi poliklonal, atanapi monoklonal ogé purifikasi antibodi tina kultur sél, cairan asites atanapi sérum lengkep.

Alpha Lifetech Inc.berpengalaman dina nyayogikeun rupa-rupa jasa garis sél anu stabil ka para nasabah kalebet sél hibridoma, garis sél éditing génom, garis sél knockdown, sareng garis sél overexpression. Kami nyobian nawiskeun jasa garis sél khusus anu canggih ka unggal klien sareng jasa kami kabuktian sareng dipercaya.

Strategi Pangwangunan Antibodi

1. Desain sareng persiapan antigen
Antigén ieu tiasa protéin, péptida, atanapi molekul sanésna. Ngarancang imunogen meryogikeun pendekatan anu komprehensif anu ngahijikeun pangaweruh ngeunaan struktur antigen, imunologi, sareng sistem pangiriman. Alpha Lifetech gaduh téknologi desain antigen anu tiasa ngarancang imunogen pikeun konsumén anu meryogikeun.
Alpha Lifetech nyayogikeun produk protéin rekombinan pikeun dipilih ku konsumén. Kami gaduh rupa-rupa sistem éksprési protéin, sapertos sistem éksprési E. coli, sistem éksprési ragi, sistem éksprési baculovirus-serangga, sistem éksprési mamalia, jsb., pikeun ngahasilkeun protéin rekombinan anu anjeun peryogikeun pikeun panalungtikan.

2. Imunisasi sato
Alpha Lifetech tiasa nyayogikeun imunogén ka konsumén, sareng sato imun sapertos beurit, kelenci, domba, alpaka, marmut, hamster, jsb. sayogi kanggo anjeun pilih.

3. Métode produksi antibodi monoklonal

●Produksi Mabs ku téknologi Hybridoma
Hibridoma nyaéta sél hibrida anu dihasilkeun ku fusi dua jinis sél, nyaéta sél myeloma beurit sareng sél plasma (limfosit B), dimana sél hétérozigot tiasa ngahasilkeun antibodi kontinyu ngalawan antigén anu dipikaresep sacara in vitro. Produksi sél hibridoma diwangun ku tilu bagian: desain antigén (hapten, molekul leutik, sareng péptida), imunisasi sato, fusi sél, sareng skrining klon positif. Ngagunakeun metodologi imunisasi anu unik, kami kéngingkeun efisiensi fusi sél anu luar biasa luhur (1-10 hibridoma per sarébu sél B) sareng titer antibodi anu luhur, ngamaksimalkeun tingkat kasuksésan kami dina tés analitis salajengna anu kalebet skrining biokimia, uji dumasar sél in-vitro, sareng studi sato.

●Produksi Mabs ku téknologi tampilan phage
Tampilan fag nawiskeun metode séjén pikeun ngahasilkeun antibodi monoklonal. Limfosit-B diisolasi tina getih sato sareng mRNA-na diekstrak. Ngaliwatan PCR, mRNA ieu dirobih janten cDNA, anu ngagedekeun sadaya segmen VH sareng VL. Segmen-segmen ieu teras diklon kana vektor, biasana salaku fragmen variabel ranté tunggal (scFv), sareng protéin PIII tina bakteriofag. Salajengna, konstruksi ieu dianggo pikeun ngainféksi E. coli, anu ngahasilkeun nyiptakeun perpustakaan anu ngandung sakitar 10^10 sél ngalangkungan inokulasi ku fag pembantu. E. coli teras tiasa ngaluarkeun bakteriofag anu ngandung segmen VH sareng VL salaku bagian tina mantelna. Saatos ieu, segmen VH sareng VL khusus anu narékahan antigen anu dipikaresep tiasa dipilih sareng dianggo pikeun ngaokulasi deui E. coli sareng bakteriofag. Sél anu ngandung plasmid teras diisolasi sareng diurutkeun.

4. Panyaringan fusi

●Fusi jeung Seleksi Sél
Sél B anu dipanén teras digabungkeun sareng sél myeloma, nyaéta sél kanker anu tiasa baranahan sacara teu terbatas dina kultur. Fusi ieu biasana kahontal nganggo téknik sapertos fusi polietilen glikol (PEG).
Saatos fusi, sél hibridoma dibudidayakeun dina média selektif anu ngan ukur ngamungkinkeun hibridoma salamet. Médium ieu biasana ngandung aminopterin, anu nyegah kamekaran sél myeloma anu teu ngahiji.

●Panyaringan sareng Clonging
Sél hibridoma anu dihasilkeun disaring pikeun produksi antibodi anu spésifik pikeun antigén target. Ieu biasana dilakukeun nganggo téknik sapertos enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunoprecipitation, sareng flow cytometry.

Sakali sél hibridoma anu ngahasilkeun antibodi diidentifikasi, éta diklon pikeun ngahasilkeun populasi sél anu idéntik. Ieu mastikeun yén antibodi anu dihasilkeun ku unggal sél hibridoma idéntik.

5. Verifikasi Fungsional Antibodi
Alpha Lifetech nyayogikeun validasi fungsional antibodi, sapertos Western blotting, imunohistokimia, atanapi uji fungsional, pikeun ngacirikeun antibodi monoklonal sareng mastikeun spésifisitas, afinitas, sareng fungsionalitas antibodi.

6. Optimalisasi antibodi
Pemurnian antibodi tina supernatan kultur nganggo téknik sapertos kromatografi afinitas protéin A atanapi protéin G, sareng Alpha Lifetech ogé tiasa nyayogikeun metode modifikasi antibodi pikeun ningkatkeun afinitas antibodi.

7. Produksi antibodi
Alpha Lifetech tiasa ngaevaluasi calon antibodi pikeun aplikasi panyaringan throughput tinggi sareng produksi skala ageung.

FAQFAQ

FAQS ngeunaan pamekaran antibodi monoklonal

1

Kumaha milih hibridoma fusi anu pas?

Salila prosés fusi, 10-15 pelat mikrotiter 96-sumur disiram ku campuran hibrida fusi. Unggal pelat dieusian média seleksi HAT-IMDM sareng dijaga dina inkubator karbon dioksida dina suhu 37 derajat Celsius. 9 - 14 dinten saatos fusi, supernatan hibrida diuji pikeun ayana antibodi khusus anu dipikahoyong.
2

Kumaha carana ningkatkeun efisiensi seleksi?

Fusi sél plasma jeung sél myeloma-na teu 100% efektif. Sanajan dina kaayaan optimal jeung stimulasi anu pangéféktifna, fusi sél tetep ngahasilkeun campuran sél anu teu ngahiji jeung anu ngahiji anu kudu dipisahkeun. Pikeun ningkatkeun efisiensi prosés seleksi, sél myeloma anu dipaké pikeun fusi kakurangan HGPRT, énzim konci dina jalur penyelamatan nukléotida. Campuran éta tuluy dibudidayakeun dina média HAT, dimana ngan sél anu mibanda énzim HGPRT, hibridoma anu ngawaris HGPRT tina sél plasma, anu bisa hirup.
3

Kumaha cara nyaring garis sél hibridoma pikeun aktivitas antibodi?

Évaluasi variétas hibrida mangrupikeun léngkah anu penting. Biasana, panyaringan supernatan hibridoma, klon, sareng subklon disayogikeun ngalangkungan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot assay, sareng fluorescence activated cell sorting (FACS). Kami bakal milih pikeun ngalaksanakeun sadaya panyaringan supernatan di laboratorium kami nyalira.
4

Nyayogikeun pitunjuk anu lengkep ngeunaan kumaha ngalaksanakeun panyaringan aktivitas antibodi?

Supernat hibridoma anu bade diuji tiasa ti 500 dugi ka 1.440 sampel sareng bakal siap diuji dina dinten ka-9 dugi ka-14. Urang tiasa muncul salami tilu dugi ka lima dinten atanapi sadayana tiasa siap dina dinten anu sami, janten penting pikeun laboratorium klien pikeun nyiapkeun sababaraha minggu sateuacanna kalayan uji panyaringan sekundér khusus anu tiasa dianggo.
5

Naha hibridoma positif kedah disubklon?

Saatos Sumur positip diidentifikasi nalika prosedur panyaringan ELISA awal, hibridoma dipindahkeun ka volume anu langkung ageung, nyaéta, pelat 24-sumur, pikeun persiapan prosedur subkloning. Subkloning hibridoma biasana dilakukeun ku metode pengenceran terbatas pikeun mastikeun isolasi monoklon anu stabil. Téhnik ieu ngalibatkeun pengenceran kultur hibridoma sareng nyebarkeunana kana pelat 96-sumur pikeun ngahontal monoklonitas (hiji sél per sumur). Sahenteuna dua pengenceran terbatas kedah dilakukeun pikeun ngirangan résiko ngembangkeun populasi hibridoma campuran.
6

Naon mangpaat tina ngagunakeun téknologi hibridoma pikeun panemuan antibodi?

Garis sél hibrida geus dipuji kusabab kamampuanna pikeun ngahasilkeun antibodi kalayan afinitas, stabilitas, sareng spésifisitas anu luhur ku cara anu paling efektif biaya.