Layanan Konstruksi Perpustakaan Tampilan Phage

Alpha Lifetech parantos kalibet pisan dina téknologi tampilan Phage salami mangtaun-taun. Éta parantos ngawangun platform téknologi tampilan Phage anu sampurna sareng stabil anu ngahémat waktos pikeun waktos panalungtikan ilmiah atanapi panalungtikan proyék sareng ngagampangkeun produksi salajengna. Alpha Lifetech ogé tiasa nyayogikeun jasa ka konsumén sapertos produksi antibodi vhh, produksi antibodi scFv, produksi Antibodi Fab.

Alpha Lifetech gaduh platform tampilan fag M13/T7 anu komprehensif pikeun mastikeun konstruksi sareng produksi perpustakaan antibodi. Kami ogé tiasa nyayogikeun jasa khusus, sapertos produksi scFv antibodi sareng skrining antibodi throughput tinggi, pikeun nyumponan kabutuhan anjeun.

Bubuka kana tampilan Phage

Téhnologi tampilan fag nyaéta téknik anu ngagunakeun fag (virus anu ngainféksi baktéri) pikeun milarian molekul pangiket fungsional protéin atanapi péptida khusus. Téhnik konstruksi perpustakaan antibodi fag kalebet konstruksi perpustakaan antibodi Fab, konstruksi perpustakaan scFv antibodi, konstruksi perpustakaan nanobody, jsb. Numutkeun jinis baktériofag, éta tiasa dibagi kana M13, T7, T4, λ, sareng sistem sanésna. Numutkeun jinis perpustakaan, éta tiasa dibagi kana perpustakaan péptida acak, perpustakaan cDNA, perpustakaan antibodi, sareng perpustakaan protéin. Téhnologi tampilan fag gampang dioperasikeun sareng murah dianggo. Nanging, téknik ieu ngawatesan karagaman genetika molekuler dina perpustakaan anu henteu tiasa ngébréhkeun runtuyan anu panjang teuing,

Ayeuna, téknologi tampilan fag seueur dianggo. Di antarana, aya prestasi anu signifikan dina panalungtikan sareng pamekaran vaksin énggal (vaksin sintétis anu murah sareng efisien), pamekaran ubar antibodi (inhibitor énzim panyaring), transduksi sinyal sél (panyaring epitop simulasi), sareng panalungtikan epitop antigen (persiapan antibodi monoklonal).

Bubuka kana Bakteriofag T7

Baktériofag T7 nyaéta DNA untaian ganda, panjang DNAna 40kb sareng dibungkus ku kapsid kalayan diaméter 60nm. Konektor antara sirah sareng buntut mangrupikeun struktur cingcin anu diwangun ku sababaraha salinan gp8. Hulu sareng inti baktériofag t7 ngabentuk struktur silinder anu ngabeungkeut kana gp8 sareng tiasa nyambungkeun sirah sareng buntut.

Gambar 1. Gambaran skematis baktériofag T7.(Rujukan: Kamajuan dina sistem tampilan fag T7 (Ulasan))

Bubuka kana Bakteriofag M13

Baktériofag M13 kagolong kana sakelompok fag filamén anu sacara koléktif disebut fag Ff. Éta mibanda panjang 900 nm sareng lébar 6,5 nm. Éta ngandung génom DNA untaian tunggal (ssDNA) kalayan panjang 6407 bp anu diwangun ku salapan gén anu ngodekeun 11 protéin anu béda. Di antarana, lima protéin éta mangrupikeun protéin mantel, sareng genep protéin éta kalibet dina réplikasi sareng perakitan fag. Konsentrasi protéin mantel anu pangluhurna nyaéta protéin kapsid G8P, anu diwangun ku sakitar 2.700 unit protéin sareng ngabentuk amplop di sakitar kromosom.

Gambar 2 Gambaran skematis baktériofag M13.(Rujukan: Dasar-Dasar Téhnologi Tampilan Fag Antibodi)

Bubuka kana Perpustakaan Antibodi Tampilan Fag

Panemuan antibodi beuki penting dina widang médis modéren. Aya rupa-rupa pendekatan panemuan antibodi, tapi perpustakaan antibodi tampilan fag langkung seueur dianggo dina élmu médis.

Ti saprak taun 1990, rupa-rupa format antibodi parantos dianggo pikeun ngawangun perpustakaan fag, kalebet VH, VHH, scFv, diabodies, sareng antibodi Fab. ScFv anu diwangun ku domain struktural VH sareng VL nyaéta antibodi ranté tunggal anu dianggo pikeun ngawangun perpustakaan scFv antibodi. scFv dicirikeun ku satengah hirup anu pondok sareng imunogenisitas anu handap. Perpustakaan Antibodi Fab diwangun ku VH, VL, CL, sareng CH1, anu tiasa gancang nyaring antibodi idéal kalayan afinitas anu luhur. Unit pangleutikna anu tiasa ngabeungkeut antigen-VHH target ngawangun perpustakaan nanobody ayeuna, VHH ngagaduhan kaunggulan struktur anu saderhana, volume alit, kalarutan anu luhur, stabilitas anu saé, sareng persiapan sareng éksprési anu gampang. Perpustakaan nanobody (Nb) sintétis muncul salaku alternatif anu pikaresepeun pikeun imunisasi sato pikeun nanobody sintétis anu stabil sareng afinitas anu luhur. Sacara umum, fragmen antibodi ieu ngahiji jeung G3P tina fag M13, sarta ku cara ngakloning sajumlah ageung gén anu ngodekeun fragmen antibodi, perpustakaan antibodi tampilan fag anu ageung tiasa dihasilkeun ti mana seueur antibodi anu beragam tiasa dipilih.

Prosés Pangwangunan Perpustakaan Phage

Prosés konstruksi perpustakaan fag nyaéta sapertos kieu: primer khusus dirancang pikeun amplifikasi PCR anu kéngingkeun produkna, anu diikat énzim sareng véktor fag T7/M13, sareng plasmid fag rekombinan hasil diwangun. Plasmid fag rekombinan dirobih janten sél reséptor TG1, teras dilapis dina média anu ngandung antibiotik anu pas, sareng kultur anu dilegaan dilaksanakeun saatos nyaring transformator. Saatos sababaraha puteran kultur, fag ngaréplikasi waktos réplikasi dina baktéri sareng hasil ngébréhkeun protéin target atanapi polipéptida. Teras perpustakaan fag dimurnikeun pikeun miceun sababaraha pangotor sareng fag anu teu kaiket.

Daérah variabel (VH sareng VL) berkorelasi sareng karagaman antibodi, sareng VH sareng VL dilebetkeun kana véktor fag sareng runtuyan anu ngodekeun protéin fag PIII. Saatos dirakit, partikel fag diekspos sareng dihijikeun sareng N-terminal tina protéin lapisan minor III pikeun ngabentuk fragmen antibodi fungsional, kéngingkeun perpustakaan anu ngandung runtuyan DNA antibodi.

Saatos imunisasi réngsé, titerna dideteksi, sareng getih sato dicandak saatos titerna dikualifikasi. Limfosit diisolasi tina getih, RNA diekstrak, RT-PCR ngagedekeun fragmen target, sareng fragmen gén daérah V diala. Gén V diamplifikasi nganggo primer khusus.

Perpustakaan alami anu didamel kalebet antibodi imunogenik anu goréng dina sato anu tiasa nargétkeun target naon waé. Antibodi fag anu ngabeungkeut khusus kana antigen tiasa dikumpulkeun nganggo téknik panyaringan anu ngalereskeun atanapi ngalabel antigen.

Antigén target dipasangkeun kana pamawa padet, sapertos liang mikroplat, atanapi digandengkeun kana manik magnét. Perpustakaan antibodi fag teras ditambahkeun pikeun ngabeungkeut kana antigén. Saatos sababaraha kali élusi, fag anu afinitasna handap atanapi non-spésifik dikumbah sareng anu nunjukkeun antibodi spésifik ditahan.

Aplikasi Tampilan Fag

*Panemuan antibodi beuki penting dina widang médis modéren. Aya rupa-rupa pendekatan panemuan antibodi, tapi téknologi tampilan fag langkung seueur dianggo dina élmu médis. Ti saprak 1990, rupa-rupa format antibodi parantos dianggo pikeun ngawangun perpustakaan fag, kalebet VH, VHH, scFv, diabodies, sareng antibodi Fab.
*Pustaka péptida fag ngamungkinkeun nangtukeun runtuyan épitop protéin sacara gancang sareng parantos janten alat anu kuat pikeun nalungtik interaksi antara épitop sareng reséptor antigén.
*Fragmen antibodi ngahiji jeung G3P tina fag M13, sarta ku cara ngakloning sajumlah badag gén anu ngodekeun fragmen antibodi, perpustakaan antibodi tampilan fag anu ageung bisa dihasilkeun ti mana loba antibodi anu rupa-rupa bisa dipilih.
*Sistem tampilan fag T7 ngagaduhan seueur kaunggulan, kalebet kesederhanaan, kaamanan anu luhur, stabilitas, gampang disimpen, sareng transportasi, janten sistem ieu dianggo dina vaksin pencegahan sareng terapi.
*Sistem tampilan fag T7 tiasa ngadeteksi rupa-rupa antigen, sapertos antigen permukaan mikroorganisme patogén sareng antigen kanker.

Fage