Layanan Panyaringan Perpustakaan Tampilan Fag

Alpha Lifetech parantos kalibet pisan dina téknologi tampilan Phage salami mangtaun-taun. Éta parantos ngawangun platform téknologi tampilan Phage anu sampurna sareng stabil anu ngahémat waktos pikeun waktos panalungtikan ilmiah atanapi panalungtikan proyék sareng ngagampangkeun produksi salajengna. Alpha Lifetech ogé tiasa nyayogikeun jasa ka konsumén sapertos produksi antibodi vhh, produksi antibodi scFv, produksi Antibodi Fab.

Alpha Lifetech gaduh platform tampilan fag M13/T7 anu komprehensif pikeun mastikeun konstruksi sareng produksi perpustakaan antibodi. Kami ogé tiasa nyayogikeun jasa khusus, sapertos produksi scFv antibodi sareng skrining antibodi throughput tinggi, pikeun nyumponan kabutuhan anjeun.

Prosés Pangwangunan Perpustakaan Tampilan Fag

Prosés konstruksi perpustakaan fag nyaéta sapertos kieu: primer khusus dirancang pikeun amplifikasi PCR anu kéngingkeun produkna, anu diikat énzim sareng véktor fag T7/M13, sareng plasmid fag rekombinan hasil diwangun. Plasmid fag rekombinan dirobih janten sél reséptor TG1, teras dilapis dina média anu ngandung antibiotik anu pas, sareng kultur anu dilegaan dilaksanakeun saatos nyaring transformator. Saatos sababaraha puteran kultur, fag ngaréplikasi waktos réplikasi dina baktéri sareng hasil ngébréhkeun protéin target atanapi polipéptida. Teras perpustakaan fag dimurnikeun pikeun miceun sababaraha pangotor sareng fag anu teu kaiket.

Métode Panyaringan Pustaka Tampilan Fag

Kasuksésan produksi antibodi tampilan fag utamina gumantung kana perpustakaan tampilan fag antibodi, sareng metode umum panning fag nyaéta panyaringan fase padet sareng fase cair. Panyaringan antigen fase padet ngabeungharan antibodi spésifik ngalangkungan 3-4 puteran élusi pikeun kéngingkeun perpustakaan tampilan fag antibodi; Panyaringan antigen fase cair dilakukeun ku cara ngainkubasi perpustakaan tampilan fag target sareng antibodi anu dilabélan biotin sareng néwak fag anu kaiket nganggo manik-manik magnét. Panyaringan fase padet ngonsumsi langkung seueur antigen sareng sababaraha epitop antigen ancur. Panyaringan fase cair dicirikeun ku efisiensi sareng pengayaan anu luhur, tapi antibodi anu diala kirang spésifik. Metode panning fag gumantung kana kabutuhan ékspérimén, anu sadayana bakal gaduh dampak anu tangtu kana pangaruh produksi antibodi tampilan fag.

Panyaringan Antibodi Throughput Tinggi

Pangwangunan antibodi geus jadi gancang pisan dina widang médis modéren. Aya rupa-rupa métode pangwangunan antibodi, tapi skrining antibodi throughput anu luhur leuwih loba dipaké dina élmu médis. Prosés ieu bisa meunangkeun rupa-rupa répertoar antibodi. Ngahijikeun jeung métode skrining perpustakaan antibodi tradisional bisa ningkatkeun kualitas skrining perpustakaan tampilan fag. Saatos skrining biologis, antibodi bisa dicirikeun ku ELISA throughput rendah atawa skrining antibodi throughput tinggi.

Gambar 1 Bagan alir anu ngajelaskeun runtuyan kajadian ti mimiti pangwangunan perpustakaan antibodi fag dugi ka generasi antibodi monoklonal kalayan afinitas anu luhur pikeun antigen sareng imunogenisitas anu handap.(Sumber rujukan: Téhnologi Tampilan Fag salaku Platform anu Kuat pikeun Panemuan Obat Antibodi - PMC (nih.gov))

Pancegahan pikeun Panyaringan Tampilan Fag AntibodiTindakan pancegahan

Pertimbangan Buffer

Pilihan buffer kedah merhatoskeun stabilitas target, lingkungan mikro anu ngiket, sareng minimalna ngiket non-spésifik dina skénario aplikasi anu saleresna. Protéin anu teu aya hubunganana, deterjen non-ionik, sareng konsentrasi uyah fisiologis kondusif pikeun ngirangan latar tukang. Aya ogé kaayaan sanés, sapertos sababaraha target panginten meryogikeun panambahan kation bivalén atanapi kofaktor sanés kana buffer, kofaktor protéin tiasa diko-fix sareng target, tiasa ditambihkeun kana buffer sortir, sareng bahkan tiasa dianggo salaku cara pikeun néwak target.

Pertimbangan Tekanan

Pertimbangan tekanan seleksi umum kalebet konsentrasi molekul target, waktos ngabeungkeut, inténsitas pencucian, jsb. Téhnik sanés pikeun ningkatkeun tekanan seleksi kalebet panggunaan denaturan (sapertos asam, uréa, sareng guanidin), pangleyur organik, ningkatkeun suhu, atanapi ningkatkeun konsentrasi ligan atanapi target anu bersaing dina buffer pencucian.
Di antarana, babak kahiji panyaringan téh penting. Babak kahiji panyaringan nyaéta pikeun néwak klon positif sabanyak-banyakna tina perpustakaan anu diwangun bari miceun klon anu teu spésifik. Target anu dilapis pori atanapi sajumlah ageung target anu leyur kedah dianggo pikeun mastikeun yén sajumlah ageung fag anu kaiket ditéwak pikeun ngajaga karagaman perpustakaan. Dina babak salajengna panyaringan, tekanan seleksi kedah ditingkatkeun kalayan ningkatna pangayaan, sababaraha kali cuci, sareng ningkatkeun waktos cuci, klon anu gaduh afinitas anu luhur tiasa disaring.

Strategi Panyaringan Négatif

Tag antigen sareng bahan pamawa prosés panyaringan nyaéta pikeun nyaring sadaya zat dina konjugat antigen, sapertos tag, protéin fusi, sareng substrat pendukung. Panyaringan négatif pikeun non-target tiasa ngawatesan pangayaan antibodi anu sanés ti antigen target.
Sél utuh, liposom, cakram nano-fosfolipid, sareng VLP tiasa disaring sacara négatif nganggo sél anu ditransfeksi simulasi atanapi sél anu henteu ditransfeksi nalika nyaring garis sél anu ditransfeksi.
Ngaleungitkeun campuran antigen kompléks Skrining négatif anu ketat tiasa dilakukeun pikeun molekul target anu teu dipikanyaho atanapi kompléks, sapertos sél utuh atanapi protéin anu teu murni.
Strategi antibodi ngalawan situs antigen anu spésifik, anu kahiji nyaéta pikeun misahkeun antibodi anu tiasa bersaing sareng ligan ku cara nambihan konsentrasi ligan anu luhur, sareng anu kadua nyaéta pikeun meungpeuk antibodi.

Aplikasi Tampilan Fag

*Panemuan antibodi beuki penting dina widang médis modéren. Aya rupa-rupa pendekatan panemuan antibodi, tapi téknologi tampilan fag langkung seueur dianggo dina élmu médis. Ti saprak 1990, rupa-rupa format antibodi parantos dianggo pikeun ngawangun perpustakaan fag, kalebet VH, VHH, scFv, diabodies, sareng antibodi Fab.
*Pustaka péptida fag ngamungkinkeun nangtukeun runtuyan épitop protéin sacara gancang sareng parantos janten alat anu kuat pikeun nalungtik interaksi antara épitop sareng reséptor antigén.
*Fragmen antibodi ngahiji jeung G3P tina fag M13, sarta ku cara ngakloning sajumlah badag gén anu ngodekeun fragmen antibodi, perpustakaan antibodi tampilan fag anu ageung bisa dihasilkeun ti mana loba antibodi anu rupa-rupa bisa dipilih.
*Sistem tampilan fag T7 ngagaduhan seueur kaunggulan, kalebet kesederhanaan, kaamanan anu luhur, stabilitas, gampang disimpen, sareng transportasi, janten sistem ieu dianggo dina vaksin pencegahan sareng terapi.
*Sistem tampilan fag T7 tiasa ngadeteksi rupa-rupa antigen, sapertos antigen permukaan mikroorganisme patogén sareng antigen kanker.

Fage