Platform Sortir Sél B Tunggal

Antibodi monoklonal (mAb) salaku pionir ubar antibodi, langkung ti 100 antibodi monoklonal parantos disatujuan pikeun pengobatan kanker, panyakit tepa, pasar pamekaran ubar sorangan, sareng nunjukkeun nilai terapi anu unik. Téhnologi antibodi sél B tunggal, salaku generasi énggal téknologi pamekaran antibodi, tiasa sacara efisien sareng gancang ngasingkeun antibodi tina sél B tunggal, anu mangrupikeun kamajuan dina téknologi produksi antibodi saatos hibridoma sareng tampilan fag. Téhnologi sortir sél B tunggal tiasa dianggo pikeun generasi antibodi ngalawan sababaraha spésiés sapertos kelenci, beurit, onta, domba, sareng hayam. Téhnologi sél B tunggal gaduh kaunggulan anu luar biasa sapertos spésifisitas anu luhur, aktivitas anu luhur, sareng afinitas anu luhur. Dumasar kana platform sortir sél B Tunggal, Alpha Lifetech gaduh kaunggulan dina waktos panyaringan sareng kéngingkeun antibodi anu kualitasna luhur. Éta tiasa nyayogikeun desain antigén, sintésis, sareng modifikasi, imunitas sato, panyaringan pangayaan sél B tunggal, sekuensing sél tunggal, panyaringan throughput anu luhur, éksprési, sareng purifikasi, Layanan téknis hiji eureun sapertos verifikasi fungsional pikeun minuhan rupa-rupa kabutuhan konsumén.

Ringkesan Téhnik Skrining Sél-B Tunggal

Métode panyaringan sél B tunggal utamina dibagi kana métode isolasi acak sareng isolasi Antigenselektif. Pamisahan acak tiasa diterapkeun kana sampel kalayan konsentrasi isolasi Antigenselektif anu luhur, sareng ngan ukur sél B anu dipisahkeun. Éta gampang dioperasikeun tapi meryogikeun seueur padamelan, sareng sering dianggo salaku léngkah munggaran pikeun pamisahan spésifik antigén. Métode pamisahan spésifik antigén cocog pikeun kaayaan dimana eusi antibodi spésifik sapertos antibodi anti-tumor sareng antibodi otoimun rendah. Kawilang rumit pikeun ngasingkeun sél B spésifik ku ngagunakeun prinsip imunologis tina beungkeutan spésifik antigén sareng antibodi kana aslina. Métode klasifikasi anu umum dianggo sareng kaunggulan sareng kakuranganna dipidangkeun dina tabel.

	Pamarekan	Kauntungan	Kakurangan
Acak Isolasi	Mikromanipulasi	Sarat parabot anu handap Operasi basajan	Efisiensi rendah Jenis sél anu kawates anu diisolasi
	Mikrodiseksi panangkepan laser	Akurasi posisi anu luhur Operasi basajan Pilih sél anu sami tina sampel sacara visual sareng miceun kokotor	Prosés persiapan sampel anu rumit Teu mampuh pikeun ngotomatisasi
	Pemilahan sél anu diaktipkeun ku fluoresensi	Akurasi sareng efisiensi anu luhur Otomatisasi tingkat luhur Aplikasi anu lega	Operasi anu rumit Sarat parabot anu luhur
Isolasi Selektif Antigen	Antigén anu dilabélan fluorokrom ngalangkungan multiparameter	Akurasi sareng efisiensi anu luhur Otomatisasi tingkat luhur Throughput anu luhur sareng multiparameter Kamampuh ngasingkeun sél B dina tahapan anu béda	Operasi anu rumit Sarat parabot anu luhur
	Manik-manik magnét anu dilapis antigen	Operasi basajan Pangulangan anu luhur Bisa ngabeungharan sél B target	Operasi anu rumit Manik-manik magnét mangaruhan aktivitas biologis sél sareng henteu kondusif pikeun kultur sareng operasi saatos isolasi.
	Mikroukir	Efisiensi anu luhur Gancang	Sarat parabot anu luhur Efisiensi rendah
	Uji array Immunospot dina chip	Otomatisasi tingkat luhur Akurasi sareng efisiensi anu luhur	Operasi anu rumit Biaya anu luhur

Prosés Layanan Antibodi Skrining Sél B Tunggal

Imunisasi sasatoan

Pilih antigen anu pas pikeun sato percobaan (sapertos beurit, kelenci, jsb.) pikeun stimulasi imun, supados aranjeunna tiasa ngahasilkeun antibodi spésifik ngalawan antigen éta.

Imunisasi sato nyaéta tahap awal tina generasi antibodi. Imunisasi sato nyaéta panggunaan mékanisme réspon imun humoral organisme éta sorangan, ngaliwatan stimulasi antigén anu terus-terusan, sato ngahasilkeun réspon imun anu kuat, teras ngaluarkeun antibodi spésifik ngalawan antigén spésifik.

Pangumpulan sareng pangayaan sél B

Sél B diisolasi tina getih periferal, limpa, atanapi kelenjar getah bening sato imun. Sél B ieu parantos dirangsang sacara imunologis pikeun ngahasilkeun antibodi ngalawan antigen spésifik.

Ku cara fisik atanapi kimia (sapertos sentrifugasi gradien kapadetan, pamisahan manik magnét, jsb.) pangayaan sél B, miceun sél pangotor, ningkatkeun kamurnian sél B sareng efisiensi pamisahan salajengna.

Gambar 1 Kloning sareng persiapan antibodi monoklonal kelenci. Sumber rujukan:Kloning Sél B Tunggal sareng Produksi Antibodi Monoklonal Kelenci.)

Pemilahan sél B

Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS), Magnetic Cell Separation (MACS), Microfluidic Cell Sorter (MCS) atanapi téknik panyaringan throughput tinggi anu sanésna, digabungkeun sareng panyiri spésifik antigen, tiasa dianggo pikeun nyaring sél B individu tina sél B anu diperkaya pikeun ngahasilkeun antibodi anu dituju.

Nalika hiji sél B diisolasi tina populasi sél B campuran, gén antibodina kedah diurutkeun ku téknologi sekuensing sél tunggal sareng dianalisis pikeun kéngingkeun inpormasi sekuensing DNA daérah variabel ranté beurat (VH) sareng daérah variabel ranté hampang (VL). Téhnologi sekuensing sél tunggal utamina ngawengku tilu léngkah: isolasi sél tunggal, amplifikasi asam nukléat intraseluler sareng analisis sekuensing. Prinsip sekuensing sél tunggal nyaéta pikeun ngagedekeun DNA atanapi RNA génom lengkep tina sél tunggal anu diisolasi pikeun kéngingkeun génom atanapi transkriptom lengkep kalayan cakupan anu luhur pikeun sekuensing throughput anu luhur.

Ngaliwatan panyaringan throughput anu luhur, runtuyan gén antibodi tina rébuan sél B tiasa diala sakaligus, anu ngagancangkeun pisan kana kecepatan panemuan antibodi. Inpormasi runtuyan ieu tiasa dianggo salajengna pikeun konstruksi sareng panyaringan perpustakaan antibodi.

Gambar 2 Diagram skematis tina panangkepan sél B tunggal, konstruksi perpustakaan, panyaringan throughput tinggi sareng sekuensing.(Sumber rujukan: Sekuensing reséptor sél B sél tunggal anu paralel sacara masif ngamungkinkeun kapanggihna gancang tina rupa-rupa antibodi réaktif antigén..)

Amplifikasi gén antibodi

Hiji sél B dibeulah pikeun ngaleupaskeun mRNA. Teras, runtuyan cDNA daérah variabel ranté beurat (VH) sareng daérah variabel ranté hampang (VL) diamplifikasi ku réaksi ranté transkripsi-polimérase terbalik (RT-PCR).

Éksprési sareng purifikasi antibodi

Gén daérah variabel anu diamplifikasi dilebetkeun kana plasmid véktor kalayan gén daérah konstan pikeun ngawangun plasmid éksprési antibodi monoklonal. Teras, sistem éksprési anu pas (sistem éksprési eukariotik sapertos sél CHO atanapi sistem éksprési prokariotik sapertos Escherichia coli) dipilih pikeun éksprési, sareng antibodi monoklonal kalayan aktivitas biologis diala. Kromatografi afinitas protéin dianggo pikeun ngekstrak sareng ngamurnikeun antibodi anu diéksprésikeun tina kultur sél sareng kéngingkeun antibodi monoklonal rekombinan anu kualitasna luhur.

Validasi antibodi

Validasi antibodi tina spésifisitas, afinitas sareng aktivitas biologis ku ELISA, Western blot, Flow Analysis, sareng Immunocoprecipitation pikeun mastikeun yén kinerja antibodi nyumponan ekspektasi. Validasi antibodi mangrupikeun léngkah konci dina mastikeun kualitas sareng reliabilitas antibodi.

Sarat pikeun imunogen

(1) Protéin rekombinan: ≥2,5 mg, kamurnian protéin >85%, beurat molekul protéin langkung ageung tibatan 10 kDa, konsentrasi protéin leyur antara 0,5 sareng 5 mg/mL. Upami diperyogikeun purifikasi afinitas antigén, diperyogikeun tambahan 10 mg protéin rekombinan.

(2) Polipeptida sareng molekul leutik: Peptida polos ≥10 mg, kamurnian peptida >90%, teu kirang ti 10 AA, gandeng KLH/BSA/OVA atanapi protéin pamawa anu sanés; Molekul leutik peryogi évaluasi struktural sateuacanna.

Alur Kerja Layanan Sortir Sél B Tunggal

Léngkah-léngkah	Eusi Layanan	Garis Waktu
Léngkah 1: Imunisasi sato sareng deteksi ELISA	(1) Sato diimunisasi 4-5 kali, dimimitian ti dosis ka-4, sérum dikumpulkeun pikeun deteksi ELISA tina titer antibodi (titer sérum antigén protéin ELISA >10^5; titer sérum antigén péptida ELISA >10^4). Dina waktos anu sami, 0.1ml sérum pra-imunisasi sareng pasca-imunisasi dikirim ka para nasabah pikeun diuji; Upami titerna henteu mumpuni, imunisasi bakal diteruskeun atanapi klien nyuhunkeun terminasi proyék, sareng ngan ukur bagian imunisasi anu bakal ditagihkeun; (2) Upami titerna mumpuni, sél PBMC diisolasi tina getih lengkep.	10-12 minggu
Léngkah 2: Panyortiran sél B tunggal	(1) Limpa dikumpulkeun, suspensi sél B tunggal disiapkeun, getih periferal dikumpulkeun, sareng sél PBMC diisolasi. (2) Pananda imunoantigen FITC sareng AF648. (3) Pemilahan aliran fluoresensi ganda + kultur klon sél b tunggal. (4) Idéntifikasi ELISA + sekuensing klon positif.	2-3 minggu
Léngkah 3: Éksprési sareng validasi antibodi	(1) Sintésis gén runtuyan 6-10 + validasi tés éksprési mamalia. (2) Idéntifikasi ELISA.	3-4 minggu
Léngkah 4: Pangiriman	(1) Urutan antibodi: 4-6 urutan antibodi (urutan anu teu diekspresikeun dikirimkeun babarengan). (2) Unggal runtuyan anu diekspresikeun ngirimkeun 0,2 mg antibodi. (3) Laporan ékspérimén.	1 minggu