Layanan Panyaringan Perpustakaan Tampilan Permukaan Ragi

Alpha Lifetech spesialisasi dina konstruksi perpustakaan tampilan ragi sareng panyaringan perpustakaan antibodi, nawiskeun kamampuan pikeun ngahasilkeun rupa-rupa bentuk perpustakaan ragi sareng nyaring éta pikeun afinitas anu luhur sareng antibodi spésifik pikeun klien di sakumna dunya. Kalayan tim panaliti ahli, téknologi sareng peralatan canggih, kami tiasa ngawangun perpustakaan ragi anu narékahan rupa-rupa protéin anu aya hubunganana sareng panyakit. Kami tiasa nyayogikeun téknologi tampilan fag sareng tampilan ragi, kalebet tampilan ragi protéin, tampilan ragi molekul leutik, tampilan ragi antibodi, jsb.

Pustaka tampilan ragi urang gaduh kapasitas anu ageung sareng keragaman anu luhur, anu nyayogikeun pondasi anu luhur pikeun panyaringan anu efektif tina runtuyan antibodi khusus. Urang tiasa ngawangun rupa-rupa bentuk pustaka tampilan ragi antibodi (IgG, scFv, VHH, pustaka antibodi Fab), pustaka protéin, pustaka péptida, pustaka cDNA, jsb. numutkeun kabutuhan anjeun. Salaku tambahan, urang ogé tiasa ngembangkeun pustaka antibodi tina rupa-rupa sipat, kalebet pustaka imun, pustaka alami, pustaka sintétik, pustaka semi-sintétik, sareng pustaka antibodi panyakit.

Bubuka kana Sistem Tampilan Ragi

Téhnologi tampilan permukaan ragi nyaéta hiji métode pikeun nampilkeun protéin rekombinan dina permukaan ragi ngaliwatan fusi gén. Sistem tampilan ragi anu paling umum ngagunakeun protéin target anu ngahiji kana C-terminus tina subunit Aga2p tina protéin kawin alfa lektin, utamina diwangun ku tag epitop dina dua sisi protéin target: tag N-terminal 9-asam amino hemagglutinin (HA) sareng tag C-terminus 10 asam amino c-myc. Subunit 69 asam amino Aga2p ngabeungkeut kana subunit 725 alfa lektin asam amino Aga1p ngaliwatan dua beungkeut disulfida, sareng Aga1p dijangkarkeun kana témbok sél ngaliwatan beungkeut kovalén β 1,6-glukan. Ku alatan éta, protéin target dipidangkeun dina permukaan sél ragi sareng salajengna dikenal ku ligan anu saluyu. Misahkeun protéin fungsional tina perpustakaan ngaliwatan panyaringan sitometri aliran.

Gambar 1: Prinsip tampilan permukaan ragi. (Sumber gambar: Aplikasi Tampilan Permukaan Ragi pikeun Rékayasa Protéin.)

Bubuka kana Perpustakaan Tampilan Permukaan Ragi

Sorting tampilan ragi dumasar kana tampilan permukaan ragi, utamina dianggo pikeun nyaring perpustakaan antibodi anu nargétkeun protéin permukaan sél. Kusabab beungkeutan non-spésifik anu handap antara sél ragi sareng permukaan sél anu sanés, seleksi biologis ragi tiasa nyaring perpustakaan beungkeutan anu ageung pikeun mendakan klon anu langka.

Layanan Panyaringan Perpustakaan Tampilan Permukaan Ragi

Nyiapkeun plasmid sareng kultur sél ragi, nyintésis DNA anu ngode protéin target sareng klon kana véktor éksprési ragi anu ngandung promotor anu tiasa diinduksi, péptida sinyal, sareng gén target anu ngahiji sareng protéin tampilan permukaan (sapertos Aga2p). Gén anu ngode protéin target tiasa ngahiji sareng gén anu ngode protéin témbok sél ragi (biasana Aga2p), sareng gén anu ngahiji tiasa dirobih janten sél ragi ngalangkungan éléktroporasi. Saatos transformasi, sél ragi anu ngébréhkeun gén antibodi dina permukaanna tiasa ngalaman tés panyaringan spésifik antigén: perpustakaan ragi diinkubasi sareng antigén target sareng sél ragi anu khusus ngabeungkeut kana éta dipilih. Nganggo panyortir sél anu diaktipkeun fluoresensi (FACS) pikeun ngasingkeun sél ragi anu nampilkeun protéin kalayan karakteristik anu dipikahoyong, panyaringan perpustakaan tampilan ragi tiasa dilakukeun kalayan ukuran perpustakaan maksimum ~ 10 ^ 8-10 ^ 9 sél ragi. Klon positip teras tiasa diisolasi pikeun analisis salajengna atanapi aplikasi hilir. Sakali klon antibodi khusus diidentifikasi tina perpustakaan antibodi, éta tiasa dicirikeun langkung lanjut sareng diproduksi sacara massal, sareng dimurnikeun nganggo téknik sapertos kromatografi afinitas protéin A/G pikeun ngalengkepan sakabéh prosés panyaringan tampilan ragi sareng produksi antibodi.

Prosés Panyaringan Perpustakaan Tampilan Ragi

Gambar 2 Prosés panyaringan perpustakaan tampilan ragi

Alur Kerja Layanan Panyaringan Perpustakaan Tampilan Ragi

Léngkah-léngkah	Eusi Layanan	Garis Waktu
Persiapan Antigen	Jenis antigen: Upami konsumén tiasa nyayogikeun antigen, sampel anu saluyu kedah dikirimkeun numutkeun jinisna: protéin rekombinan peryogi 3-3.5mg kalayan sarat kamurnian langkung ti 85%, molekul alit kedah dikonjugasi kalayan sarat kamurnian langkung ti 90%, sintésis péptida kedah dikonjugasi kalayan sarat kamurnian langkung ti 90%, jinis sampel sapertos virus kedah diinaktivasi, RNA kedah dipariksa pikeun nyegah degradasi, sareng jinis antigen di luhur ogé tiasa disaluyukeun pikeun sintésis.	2-3 minggu
Kekebalan Sato	Jumlah imunisasi sato nyaéta 5, sareng perlu ditangtukeun naha kedah ningkatkeun jumlah imunisasi dumasar kana uji titer sérum. Imunitas antigen: poténsi antigen protéin/virus>105; poténsi antigen péptida/molekul leutik>10^4	5-6 minggu
Persiapan cDNA citakan	Pisahkeun PBMC plasma, ékstrak RNA total (kit ékstraksi RNA) teras balikkeun kana cDNA.	1 dinten
Pangwangunan Perpustakaan	Ngagunakeun cDNA perpustakaan salaku citakan, gén VHH diamplifikasi ku dua puteran PCR, sareng véktor tampilan ragi splicing gén VHH diwangun. Véktor éta dirobah jadi sél ragi ku éléktroporasi pikeun ngawangun perpustakaan antibodi. Pilih sacara acak 48 klon sareng idéntifikasi laju positip (>90%) nganggo metode PCR; Hitung kapasitas perpustakaan (10^7-10^8), sekuensing NGS pikeun nangtukeun laju sisipan perpustakaan anu leres (>90%) sareng karagaman perpustakaan.	2 minggu
Pameuntasan Perpustakaan	Tilu babak panyaringan standar: Panyaringan FACS protéin anu dilabélan fluoresensi, dituturkeun ku sekuensing NGS dina babak katilu. Klon positif dipilih pikeun éksprési induksi gram tunggal sareng deteksi ELISA. Sadaya klon positif dipilih pikeun sekuensing gén, sareng runtuyan daérah CDR anu béda dipilih.	2-3 minggu
Verifikasi Antibodi	Ngawangun véktor éksprési anu pas pikeun runtuyan antibodi tiasa ngagampangkeun éksprési antibodi, purifikasi antibodi, validasi ELISA sareng BLI tina pangiket antigén antibodi pikeun mastikeun afinitas antibodi, sareng blokade sitometri aliran pikeun ngavalidasi fungsi sél.	1 minggu

Kasus Panyaringan Pustaka Tampilan Permukaan Ragi

Dina literatur platform tampilan permukaan ragi pikeun panemuan gancang nanobodi selektif konformasional, para panulis ngadegkeun platform panemuan nanobodi in vitro lengkep dumasar kana tampilan permukaan ragi. Mimitina, perpustakaan nanobodi sintétis dirancang dimimitian tina gén unta. Gambar D nunjukkeun yén nanobodi gaduh tag HA dina tungtung karboksil, teras nanobodi dipasang sacara kovalén dina témbok sél ragi. Gambar E nunjukkeun prosés panyaringan nanobodi. Ragi kalayan nanobodi afinitas antigén diisolasi, diamplifikasi, sareng dipilih sacara berulang pikeun antibodi ku FACS. Para panulis mendakan nanobodi selektif konformasional anu narékahan dua GPCR manusa anu béda ngalangkungan platform ieu.