Aptamer-utvecklingsplattform

Aptamerer är enkelsträngade oligonukleotider (DNA, RNA eller XNA) med egenskapen hög affinitet och hög specificitet som specifikt binder till målmolekyler som antikroppar, och de används i stor utsträckning för utveckling av biosensorer, diagnostik och behandlingar.

Aptamerplattformen som tillhandahålls av Alpha Lifetech omfattar två kategorier: en aptamersyntesplattform, som huvudsakligen omfattar SELEX aptamerbibliotekssyntestjänst och aptamerutvecklingstjänst (DNA, RNA eller XNA), och en aptamerscreeningsplattform som inkluderar screeningstjänster baserade på SELEX-teknik för proteiner, peptider, celler, små molekyler, metalljoner och andra målmolekyler, samt nedströms aptameroptimerings- och identifieringsanalystjänster.

Aptamersyntesplattform

SELEX aptamerbibliotekssyntestjänst

SELEX aptamerbibliotekssyntestjänst innebär huvudsakligen att konstruera ett bibliotek som innehåller ett stort antal slumpmässiga enkelsträngade oligonukleotidsekvenser genom kemisk syntes in vitro i enlighet med målmolekylerna. Bibliotekskonstruktion är utgångspunkten för SELEX-tekniken, som tillhandahåller rikliga kandidatsekvenser för den efterföljande screeningprocessen genom att konstruera enorma slumpmässiga bibliotek och ökar möjligheten att screena aptamerer med hög affinitet.

Bibliotekssyntes är huvudsakligen uppdelad i följande steg:

Steg	Teknikdetaljer
Identifiera målmolekyler	Identifiera de målmolekyler som behöver screenas för aptamerer, vilka kan vara proteiner, nukleinsyror, småmolekylära joner, metalljoner etc.
Slumpmässig sekvensdesign	Slumpmässig sekvenslängd, bassammansättning och andra parametrar utformades enligt målmolekylernas egenskaper och screeningskrav. Vanligtvis är slumpmässiga sekvenser mellan tiotals och hundratals baser långa.
Syntes av fasta sekvenser	Oligonukleotidfragment med fixerade sekvenser (såsom PCR-primersekvenser) i båda ändar designas och syntetiseras, vilka kommer att användas i den efterföljande amplifierings- och screeningprocessen.

Det syntetiserade biblioteket behöver fortfarande bearbetas ytterligare för kvalitetskontroll. Bibliotekets koncentration bestämdes för att säkerställa dess användbarhet i den efterföljande screeningprocessen. Mångfalden och noggrannheten hos slumpmässiga sekvenser i biblioteket verifierades genom sekvensering och andra metoder för att säkerställa att bibliotekets kvalitet uppfyllde screeningskraven.

Genom ovanstående steg kan ett högkvalitativt och mycket diversifierat SELEX aptamerbibliotek syntetiseras, vilket kan ge rikliga kandidatsekvenser för den efterföljande screeningprocessen.

Aptamerutvecklingstjänster (DNA, RNA eller XNA)

Aptamerer hänvisar vanligtvis till nukleinsyraaptamerer. Nukleinsyraaptamerer inkluderar DNA-aptamerer, RNA-aptamerer och XNA-aptamerer, vilket är kemiskt modifierade nukleinsyraaptamerer. SELEX-tekniken används ofta för utveckling av aptamerer. Det grundläggande arbetsflödet för aptamerutvecklingstjänster inkluderar bibliotekskonstruktion, målbindning, isolering och rening, amplifiering, flera screeningrundor och sekvensidentifiering. I många år har vi fokuserat på bibliotekskonstruktion och har stor erfarenhet av aptamerutveckling. Vi strävar efter att ge kunderna bättre tjänster.

SELEX-teknikprocessen

SELEX-processen består av flera omgångar, som var och en består av följande huvudsteg:

Bibliotek och målbindning

Det konstruerade nukleinsyrabiblioteket blandas med specifika målmolekyler (såsom proteiner, småmolekylära föreningar etc.), så att nukleinsyrasekvenserna i biblioteket har möjlighet att binda till målmolekylerna.

Isolering av obundna molekyler

Nukleinsyrasekvenser som inte är bundna till målmolekylen separeras från blandningen med specifika metoder såsom affinitetskromatografi, magnetisk pärlseparation etc.

Amplifiering av bindande molekyler

Nukleinsyrasekvensen som är bunden till en målmolekyl amplifieras, vanligtvis med hjälp av polymeraskedjereaktionsteknik (PCR). För den efterföljande screeningsfasen kommer de amplifierade sekvenserna att användas som startbibliotek.

Figur 1: SELEX-screeningprocess

Aptamerscreeningsplattform

Aptamer-screeningtjänst

Alpha Lifetech erbjuder ett brett utbud av specialiserade aptamer-screeningstjänster med olika SELEX-metoder för olika typer av dina molekyler:

Måltyper	Tekniska detaljer
Proteinaptamerscreening av SELEX	Huvudsyftet med screening av proteinaptamerer är att screena aptamerer som specifikt kan binda till målproteinmolekyler. Dessa aptamerer är enklare att syntetisera, mer stabila och mindre känsliga för miljöfaktorer.
Peptidaptamerscreening av SELEX	Peptidaptamerer är en klass av korta peptidsekvenser med hög specificitet och affinitet, som specifikt kan binda till målsubstanser och uppvisar ett brett användningsområde inom det biomedicinska området. Genom en specifik screeningsprocess screenas peptidaptamerer som specifikt kan binda till målmolekyler från ett stort antal slumpmässiga peptidsekvensbibliotek.
Cellspecifik aptamerscreening (Cell-SELEX)	Målceller eller specifika molekyler på cellytan framställs som mål. Målen kan vara hela celler, receptorer på cellmembranet, proteiner eller andra små molekyler.
Screening av småmolekylära aptamerer med Capture SELEX	Capture SELEX är en in vitro-screeningsteknik för screening av småmolekylära aptamerer, vilket är en variant av SELEX. Capture SELEX är särskilt väl lämpad för aptamerscreening av småmolekylära målproteiner, vilka vanligtvis har färre funktionella grupper och är svåra att immobilisera direkt på fastfasbärare.
SELEX-tjänster baserade på levande djur	Screening med levande djur är en experimentell teknik som används flitigt inom biovetenskap, medicin och bioteknik, där levande djur används som experimentella modeller för att screena och utvärdera specifika molekyler, läkemedel, terapeutiska medel eller biologiska processer. Tjänsterna är utformade för att simulera den fysiologiska miljön i människokroppen för att mer exakt förutsäga och utvärdera effekten och säkerheten hos experimentella resultat i människokroppen.

Aptameroptimeringstjänst

Hydrofiliciteten, den höga affinitetsförlusten under produktionen och den snabba utsöndringen av aptamerer begränsar deras tillämpning. För närvarande har en mängd olika optimeringsmetoder utforskats för att förbättra aptamerers prestanda.

Vi har också en mängd olika sätt att optimera aptamerer, bestående av trunkering, modifieringar och konjugering till lämplig grupp (tiol, karboxi, amin, fluorofor, etc.).

Aptamerkarakteriseringsanalystjänst

Aptamerkarakteriseringsanalystjänster avser professionella tjänster för prestandautvärdering, strukturupplösning och funktionell verifiering av den erhållna aptameren för att säkerställa att aptameren uppfyller kraven på specifik bindningsförmåga, stabilitet och specificitet. Det omfattar huvudsakligen affinitets- och specificitetsanalys, stabilitetsutvärdering och verifiering av biologisk funktion.