Plattform för utveckling av fagdisplayantikroppar

Alpha Lifetech, med sin omfattande projekterfarenhet inom antikroppsupptäckt, kan erbjuda skräddarsydda monoklonala och polyklonala antikroppstjänster för flera arter, samt konstruktion och screening av antikroppsbibliotek. Alpha Lifetech kan förse kunder med kvalitetssäkrade antikropps- och rekombinanta antikroppsprodukter, samt motsvarande tjänster, för att framställa effektiva, mycket specifika och stabila antikroppar. Genom att använda omfattande antikroppsplattformar och antikroppsteknik tillhandahåller vi tjänster som täcker uppströms och nedströms antikroppsproduktion, inklusive tekniska tjänster som antikroppsberedning, rening, antikroppssekvensering och validering.

Alpha Lifetech har en mogen plattform för antikroppsupptäckt som förser kunder med en rad tjänster, inklusive djurimmunitet, konstruktion och screening av fagdisplay-antikroppsbibliotek, antikroppssekvensering, antikroppsuttryck, antikroppsrening, antikroppsvalidering och antikroppsmärkning baserat på hybridomteknik, B-cellsteknik, fagdisplayteknik med mera. Alpha Lifetech har en standardiserad produktionslinje, och utöver antikroppsberedning kan även stödjande tjänster som antikroppshumanisering, antikroppsaffinitetsmognad, ADC-läkemedelsdesign och -utveckling samt efterföljande CAR-T-sekvensdesign tillhandahållas. Samtidigt har Alpha Lifetech konstruerat ett antikroppsbibliotek baserat på M13-, T4- och T7-fagdisplayteknikplattformar, med en lagringskapacitet på upp till 10^8-10^9. Den positiva frekvensen, insättningsfrekvensen och diversiteten i biblioteket kan alla nå över 90 %.

Fagdisplayteknik

Produktion av monoklonala antikroppar gjordes initialt med hjälp av hybridommonoklonal antikroppsteknik för att producera monoklonala antikroppar mot mushybridom. Mer specifikt, genom att fusionera mjältceller från immuniserade möss med myelomceller från människor eller möss, bildas hybridomceller, vilka utsöndrar specifika antikroppar mot hybridommonoklonala antikroppar. Genom humaniserad modifiering av musmonoklonala antikroppar och genteknisk modifiering av antikropparna för att ge dem en konstant human immunoglobulinregion kan deras immunogenicitet minskas. Monoklonala antikroppsframställning används ofta inom biomedicinska och kliniska tillämpningar.

Alpha Lifetech kan erbjuda kompletta antikroppstekniska tjänster, från preklinisk forskningsprotokolldesign till upptäckt av antikroppsläkemedelskonjugat (ADC) och djurvalidering. Antikroppsläkemedelskonjugat (ADC) kan leverera kemoterapiläkemedel till cancerceller. Efter att ha bundit till specifika mål uttryckta på cancerceller frisätter ADC cytotoxiska läkemedel i cancercellerna. Alpha Lifetech kan också erbjuda kunder omfattande tjänster för mognad av antikroppsaffinitet. Med avancerad mutationsoptimering och högkapacitets-fagdisplayscreeningsteknik screenas först antikroppar med viss affinitet, och sedan introduceras aminosyramutationer för att generera olika varianter. Därefter utvärderades och screenades antikroppar med hög affinitet med hjälp av screeningstekniker. Efter flera omgångar av optimering och strukturell analys erhölls slutligen antikroppar med högre affinitet och starkare specificitet.

Alpha Lifetech kan konstruera olika typer av antikroppsfagdisplaybibliotek, inklusive immunbibliotek, nativa bibliotek, semisyntetiska bibliotek och syntetiska bibliotek. Baserat på antikroppsbibliotekens höga kapacitet kan mycket specifika antikroppar erhållas. Flera fagemidvektorer såsom pMECS, pComb3X och pCANTAB 5E kan tillhandahållas, såväl som stammar såsom TG1 E. coli, XL1 Blue och ER2738. Förutom en bibliotekskapacitet på upp till 10^9 är bibliotekets insättningshastighet för målfragment också hög, vilket skapar tillräckliga förutsättningar för screening av antikroppar som tillfredsställer kunderna. Flödesschemat för Alpha Lifetechs antikroppsberedningstjänst baserad på fagdisplayteknik visas i figur 1.

Fig. 1 Processdiagram för framställning av monoklonala antikroppar baserade på fagdisplayteknik.

Arbetsflöde för produktion av antikroppar för fagdisplay

Steg	Tjänstens innehåll	Tidslinje
Steg 1: Djurimmunisering	(1) Djurimmunisering 4 gånger, boosterimmunisering 1 dos, totalt 5 immuniserade doser. (2) Negativt serum före immunisering samlades in, och ELISA utfördes på den fjärde dosen för att detektera serumtiter. (3) Om serumantikroppstitern för den fjärde dosen uppfyller kraven, kommer ytterligare en immuniseringsdos att administreras 7 dagar före blodprovtagning. Om den inte uppfyller kraven kommer rutinmässig immunisering att fortsätta. (4) Kvalificerad potens, blodinsamling och separation av monocyter	10 veckor
Steg 2: cDNA-beredning	(1) PBMC Total RNA-extraktion (RNA-extraktionskit) (2) Högkvalitativ RT-PCR-beredning av cDNA (omvänd transkriptionskit)	1 dag
Steg 3: Konstruktion av antikroppsbibliotek	(1) Med cDNA som mall amplifierades generna med två omgångar PCR. (2) Fagkonstruktion och -transformation: gensplitsningsfagemidvektor, elektroporationstransformation av TG1-värdbakterier, konstruktion av antikroppsbibliotek. (3) Identifiering: Slumpmässigt välja 24 kloner, PCR-identifieringsfrekvens positiv + insättningsfrekvens. (4) Assisterad fagpreparering: M13-fagamplifiering + rening. (5) Räddning av fagdisplaybibliotek	3–4 veckor
Steg 4: Screening av antikroppsbibliotek (3 omgångar)	(1) Standard 3-omgångsscreening (fastfasscreening): tryckscreening för att avlägsna ospecifika antikroppar i största möjliga utsträckning. (2) Enkelklonamplifiering, selekterad med bakteriofag + IPTG-inducerad expression + ELISA-detektion av positiva kloner. (3) Alla positiva kloner selekterades för gensekvensering.	4–5 veckor

Fördel med fagdisplayteknik

Alpha Lifetech har stor erfarenhet inom antikroppsutveckling. Under årens lopp har Alpha Lifetech etablerat en omfattande plattform för antikroppsutveckling.

Supporttjänster

Vi kan erbjuda olika tjänster för att bygga upp djurbaserade immunbibliotek och screeningtjänster för naturliga antikroppsbibliotek enligt kundens behov.

Flera mål

Flera olika tjänster för att upptäcka målantikroppar finns tillgängliga: proteiner, peptider, små molekyler, virus, membranproteiner, mRNA, etc.

Flera vektorer

Personlig bibliotekskonstruktionstjänst, vi kan tillhandahålla olika bakteriofagvektorer inklusive PMECS, pComb3X och pCANTAB 5E, och modifiera dem efter kundens behov.

Mogen plattform

Lagringskapaciteten kan nå 10 ^ 8-10 ^ 9, insättningshastigheterna är alla över 90%, och affiniteten hos antikroppar som erhålls genom screening är generellt på nM pM-nivån.

Relaterad TJÄNST

Flera strategier för antikroppsutveckling

Tjänst för utveckling av monoklonala antikroppar

Hybridomteknologiplattform

Platform för sortering av enskilda B-celler

Plattform för utveckling av fagdisplayantikroppar

utveckling av monoklonala antikroppar - Alpha Lifetech

Tjänst för utveckling av monoklonala antikroppar

Vi kan erbjuda högkvalitativa, renhetsstarka och mycket specifika utvecklingstjänster för monoklonala antikroppar, inklusive produktion av monoklonala antikroppar mot mus och kanin.

Hybridomteknologiplattform

Inklusive immuniseringsprogram, antikroppsberedning, antikroppsrening, högkapacitetssekvensering av antikroppar, antikroppsvalidering etc.

Platform för sortering av enskilda B-celler

Alpha Lifetech har fördelar vad gäller screeningtid och att erhålla högkvalitativa antikroppar. Det kan tillhandahålla antigendesign, syntes och modifiering, djurimmunitet, screening av anrikning av enskilda B-celler och sekvensering av enskilda celler.