Uhandisi wa Kinga Mwilini ni Nini?

Kwa msaada wa uhandisi wa kingamwili, imewezekana kurekebisha ukubwa wa molekuli, pharmacokinetics, immunogenicity, ufungamano wa kufunga, umahususi na utendaji kazi wa antibodies. Baada ya kutengeneza kingamwili, kufungamana mahususi kwa kingamwili huzifanya kuwa muhimu sana katika utambuzi na matibabu ya kimatibabu. Kupitia uhandisi wa kingamwili, zinaweza kukidhi mahitaji ya dawa na maendeleo ya awali ya uchunguzi.

Madhumuni ya uhandisi wa kingamwili ni kubuni na kutoa kazi mahususi na thabiti ambazo kingamwili asilia haziwezi kufikia, na kuweka msingi wa uzalishaji wa kingamwili za matibabu.

Alpha Lifetech, ikiwa na uzoefu wake mkubwa wa mradi katika uhandisi wa kingamwili, inaweza kutoa huduma za kingamwili za monokloni na polykloni zilizobinafsishwa kwa spishi nyingi, pamoja na huduma za ujenzi na uchunguzi wa maktaba ya kingamwili za maonyesho ya phaji. Alpha Lifetech inaweza kuwapa wateja kingamwili bora zinazofanana na bidhaa za protini zilizounganishwa, pamoja na huduma zinazolingana, ili kutoa kingamwili zenye ufanisi, maalum sana, na thabiti. Kwa kutumia kingamwili kamili, majukwaa ya protini na mifumo ya maonyesho ya phaji, tunatoa huduma zinazohusu uzalishaji wa kingamwili wa juu na wa chini, ikiwa ni pamoja na huduma za kiufundi kama vile uundaji wa kingamwili, utakaso wa kingamwili, mpangilio wa kingamwili, na uthibitishaji wa kingamwili.

Hatua ya upainia ya uhandisi wa kingamwili inahusiana na teknolojia mbili:

--Teknolojia ya DNA iliyounganishwa

--Teknolojia ya mseto

Maendeleo ya haraka ya uhandisi wa kingamwili yanahusiana na teknolojia tatu muhimu:

--Teknolojia ya uundaji wa jeni na mmenyuko wa mnyororo wa polima

--Usemi wa protini: Protini zilizounganishwa tena huzalishwa na mifumo ya usemi kama vile chachu, virusi vyenye umbo la fimbo, na mimea

--Ubunifu wa miundo unaosaidiwa na kompyuta

Kizazi cha kwanza cha kingamwili kilibadilishwa kuwa binadamu kwa ajili ya uzalishaji wa kingamwili za chimeriki, ambapo eneo linalobadilika la kingamwili za monokloni za panya liliunganishwa na eneo lisilobadilika la molekuli za IgG za binadamu. Eneo la kufunga antijeni (CDR) la kingamwili ya monokloni ya panya ya kizazi cha pili lilipandikizwa kwenye IgG ya binadamu. Isipokuwa eneo la CDR, kingamwili zingine zote ni karibu kingamwili za binadamu, na juhudi zilifanywa ili kuepuka kushawishi majibu ya kingamwili za antijeni za binadamu (HAMA) wakati wa kutumia kingamwili za kloni za panya kwa matibabu ya binadamu.

 

Ili kujenga maktaba ya maonyesho ya phaji, hatua ya kwanza ni kupata jeni zinazosimba kingamwili, ambazo zinaweza kutengwa kutoka kwa seli B za wanyama waliochanjwa (ujenzi wa maktaba ya kinga), kutolewa moja kwa moja kutoka kwa wanyama wasiochanjwa (ujenzi wa maktaba ya asili), au hata kukusanywa ndani ya vitro na vipande vya jeni vya kingamwili (ujenzi wa maktaba ya sintetiki). Kisha, jeni hupanuliwa na PCR, kuingizwa kwenye plasmidi, na kuonyeshwa katika mifumo mwenyeji inayofaa (usemi wa chachu (kawaida Pichia pastoris), usemi wa prokaryotic (kawaida E. coli), usemi wa seli za mamalia, usemi wa seli za mimea, na usemi wa seli za wadudu zilizoambukizwa na virusi vyenye umbo la fimbo). Ya kawaida zaidi ni mfumo wa usemi wa E. coli, ambao huunganisha mfuatano maalum wa usemi wa kingamwili kwenye phaji na husimba moja ya protini za ganda la phaji (pIII au pVIII). Mchanganyiko wa jeni, Na huonyeshwa kwenye uso wa bakteriofaji. Kiini cha teknolojia hii ni kujenga maktaba ya maonyesho ya phaji, ambayo ina faida zaidi ya maktaba za asili kwa kuwa inaweza kuwa na uunganishaji maalum. Baadaye, kingamwili zenye umaalumu wa antijeni huchunguzwa kupitia mchakato wa uteuzi wa kibiolojia, antijeni lengwa hurekebishwa, faji zisizofungwa huoshwa mara kwa mara, na faji zilizofungwa huoshwa kwa ajili ya uboreshaji zaidi. Baada ya marudio matatu au zaidi, kingamwili zenye umaalumu wa juu na umaalumu wa juu hutengwa.

Mchoro 3: Ujenzi na Uchunguzi wa Maktaba ya Kinga Mwili

Teknolojia ya DNA iliyounganishwa inaweza kutumika kutengeneza vipande vya kingamwili. Kingamwili za Fab zinaweza awali kuhidrolisishwa tu na protease ya tumbo ili kutoa vipande 2 (Fab '), ambavyo kisha humeng'enywa na papain ili kutoa vipande vya Fab vya kibinafsi. Kipande cha Fv kina VH na VL, ambavyo vina uthabiti duni kutokana na kutokuwepo kwa vifungo vya disulfidi. Kwa hivyo, VH na VL huunganishwa pamoja kupitia peptidi fupi ya amino asidi 15-20 ili kuunda kingamwili ya mnyororo mmoja (scFv) yenye uzito wa molekuli wa takriban 25KDa.

Utafiti wa muundo wa kingamwili katika Camelidae (Camel, LIama, na Alpaca) umebainisha kuwa kingamwili zina minyororo mizito pekee na hazina minyororo nyepesi, kwa hivyo huitwa kingamwili nzito za mnyororo (hcAb). Eneo linalobadilika la kingamwili nzito za mnyororo huitwa kingamwili za kikoa kimoja au nanobodies au VHH, zenye ukubwa wa 12-15 kDa. Kama monoma, hazina vifungo vya disulfidi na ni thabiti sana, zikiwa na mshikamano mkubwa sana kwa antijeni.

Mchoro 5: Kingamwili Nzito ya Mnyororo na VHH/ Nanobody

Usemi huru wa seli hutumia usemi wa DNA asilia au bandia ili kufikia usanisi wa protini ndani ya vitro, kwa kawaida kwa kutumia mfumo wa usemi wa E. coli. Huzalisha protini haraka na huepuka mzigo wa kimetaboliki na sumu kwenye seli wakati wa kutoa kiasi kikubwa cha protini zinazoungana tena ndani ya mwili. Inaweza pia kutoa protini ambazo ni vigumu kutengeneza, kama vile zile ambazo ni vigumu kurekebisha baada ya kubadilishwa au kusanisi protini za utando.