Uhandisi wa Kingamwili ni nini?

Kwa msaada wa uhandisi wa antibody, imewezekana kurekebisha ukubwa wa molekuli, pharmacokinetics, immunogenicity, mshikamano wa kumfunga, maalum na kazi ya athari ya antibodies. Baada ya kuunganisha kingamwili, ufungaji maalum wa kingamwili huwafanya kuwa wa thamani sana katika uchunguzi wa kimatibabu na matibabu. Kupitia uhandisi wa kingamwili, wanaweza kukidhi mahitaji ya maendeleo ya mapema ya dawa na utambuzi.

Madhumuni ya uhandisi wa kingamwili ni kubuni na kutoa kazi mahususi, thabiti ambazo kingamwili za asili haziwezi kufikia, na kuweka msingi wa utengenezaji wa kingamwili za matibabu.

Alpha Lifetech, pamoja na tajriba yake ya kina ya mradi katika uhandisi wa kingamwili, inaweza kutoa huduma maalum za kingamwili za monokloni na polyclonal kwa spishi nyingi, pamoja na maonyesho ya fagio ya ujenzi wa maktaba ya kingamwili na huduma za uchunguzi. Alpha Lifetech inaweza kuwapa wateja kingamwili bora zinazofanana na kibayolojia na bidhaa za protini recombinant, pamoja na huduma zinazolingana, ili kuzalisha kingamwili bora, mahususi sana na thabiti. Kwa kutumia kingamwili pana, mifumo ya protini na mifumo ya maonyesho ya fagio, tunatoa huduma zinazofunika sehemu ya juu na chini ya uzalishaji wa kingamwili, ikijumuisha huduma za kiufundi kama vile uboreshaji wa kingamwili, utakaso wa kingamwili, mpangilio wa kingamwili na uthibitishaji wa kingamwili.

Hatua ya upainia ya uhandisi wa kingamwili inahusiana na teknolojia mbili:

--Teknolojia ya DNA ya recombinant

--teknolojia ya Hybridoma

Ukuaji wa haraka wa uhandisi wa kingamwili unahusiana na teknolojia tatu muhimu:

--Teknolojia ya uundaji wa jeni na mmenyuko wa mnyororo wa polimerasi

--Kujieleza kwa protini: Protini zinazounganishwa huzalishwa na mifumo ya kujieleza kama vile chachu, virusi vya umbo la fimbo, na mimea.

-- Usanifu wa miundo inayosaidiwa na Kompyuta

Kizazi cha kwanza cha antibodies kilifanywa kibinadamu kwa ajili ya uzalishaji wa antibodies ya chimeric, ambapo eneo la kutofautiana la antibodies za monoclonal za panya liliunganishwa na eneo la mara kwa mara la molekuli za IgG za binadamu. Eneo la kuunganisha antijeni (CDR) la kingamwili moja ya panya ya kizazi cha pili ilipandikizwa kwenye IgG ya binadamu. Isipokuwa kwa eneo la CDR, kingamwili nyingine zote ni takriban kingamwili za binadamu, na jitihada zilifanywa ili kuepuka kushawishi majibu ya kingamwili ya binadamu ya kupambana na panya (HAMA) wakati wa kutumia kingamwili za clone ya panya kwa matibabu ya binadamu.

 

Ili kuunda maktaba ya maonyesho ya fagio, hatua ya kwanza ni kupata kingamwili za usimbaji wa jeni, ambazo zinaweza kutengwa kutoka kwa seli B za wanyama waliochanjwa (ujenzi wa maktaba ya kinga), iliyotolewa moja kwa moja kutoka kwa wanyama wasio na chanjo (ujenzi wa maktaba asilia), au hata kukusanywa kwa vitro na vipande vya jeni vya antibody (ujenzi wa maktaba ya syntetisk). Kisha, jeni hukuzwa na PCR, kuingizwa kwenye plasmidi, na kuonyeshwa katika mifumo ya mwenyeji inayofaa (msemo wa chachu (kawaida Pichia pastoris), usemi wa prokaryotic (kawaida E. coli), usemi wa seli za mamalia, usemi wa seli za mimea, na usemi wa seli wa wadudu walioambukizwa na virusi vya umbo la fimbo). Inayojulikana zaidi ni mfumo wa kujieleza wa E. koli, ambao huunganisha mfuatano maalum wa kingamwili ya usimbaji kwenye fagio na kusimba mojawapo ya protini za ganda la fagio (pIII au pVIII). Muunganisho wa jeni wa, Na kuonyeshwa kwenye uso wa bacteriophages. Msingi wa teknolojia hii ni kuunda maktaba ya maonyesho ya fagio, ambayo ina faida zaidi ya maktaba asilia kwa kuwa inaweza kuwa na ufungaji maalum. Baadaye, kingamwili zenye umaalumu wa antijeni huchunguzwa kupitia mchakato wa uteuzi wa kibayolojia, antijeni lengwa huwekwa, fagio zisizofungwa huoshwa mara kwa mara, na fagio zilizofungwa huoshwa kwa uboreshaji zaidi. Baada ya duru tatu au zaidi za kurudia, maalum ya juu na kingamwili za mshikamano wa juu hutengwa.

Kielelezo cha 3: Ujenzi wa Maktaba ya Kingamwili na Uchunguzi

Teknolojia ya DNA recombinant inaweza kutumika kutengeneza vipande vya kingamwili. Kingamwili cha kitambaa kinaweza tu kutolewa kwa hidrolisisi na protease ya tumbo ili kutoa vipande 2 vya (Fab '), ambavyo humeng'enywa na paini ili kuzalisha vipande vya Fab. Kipande cha Fv kina VH na VL, ambavyo vina utulivu duni kwa sababu ya kutokuwepo kwa vifungo vya disulfide. Kwa hivyo, VH na VL zimeunganishwa pamoja kupitia peptidi fupi ya amino asidi 15-20 ili kuunda kingamwili ya mnyororo tofauti (scFv) yenye uzito wa molekuli ya takriban 25KDa.

Utafiti wa muundo wa kingamwili katika Camelidae (Ngamia, LIama, na Alpaca) umefafanua kuwa kingamwili zina minyororo mizito pekee na hazina minyororo nyepesi, kwa hivyo zinaitwa kingamwili za mnyororo mzito (hcAb). Kikoa cha kutofautiana cha kingamwili za mnyororo mzito huitwa kingamwili za kikoa kimoja au nanobodi au VHH, zenye ukubwa wa 12-15 kDa. Kama monoma, hazina vifungo vya disulfide na ni thabiti sana, na mshikamano wa juu sana wa antijeni.

Kielelezo cha 5: Kingamwili Mzito Mnyororo na VHH/ Nanobody

Seli huria ya kujieleza hutumia usemi wa DNA asilia au sanisi ili kufikia usanisi wa protini katika vitro, kwa kawaida kwa kutumia mfumo wa kujieleza wa E. koli. Inazalisha protini haraka na huepuka mzigo wa kimetaboliki na cytotoxic kwenye seli wakati wa kuzalisha kiasi kikubwa cha protini za recombinant katika vivo. Inaweza pia kutoa protini ambazo ni ngumu kusanisi, kama vile zile ambazo ni ngumu kurekebisha baada ya kutafsiri au kuunganisha protini za utando.