Huduma ya Ujenzi wa Maktaba ya Onyesho la Phaji

Alpha Lifetech imekuwa ikijihusisha sana na teknolojia ya maonyesho ya Phage kwa miaka mingi. Imejenga jukwaa thabiti la teknolojia ya maonyesho ya Phage ambalo huokoa muda kwa utafiti wa kisayansi au utafiti wa mradi na kuwezesha uzalishaji unaofuata. Alpha Lifetech inaweza pia kuwapa wateja huduma kama vile uzalishaji wa kingamwili za vhh, uzalishaji wa kingamwili za scFv, uzalishaji wa Kingamwili za Fab.

Alpha Lifetech ina jukwaa kamili la kuonyesha M13/T7 phage ili kuhakikisha ujenzi na uzalishaji wa maktaba za kingamwili. Tunaweza pia kutoa huduma maalum, kama vile uzalishaji wa kingamwili scFv na uchunguzi wa kingamwili wa kiwango cha juu, ili kukidhi mahitaji yako.

Utangulizi wa onyesho la Phage

Teknolojia ya kuonyesha faji ni mbinu inayotumia faji (virusi vinavyoambukiza bakteria) kutafuta molekuli zinazofunga zinazofanya kazi za protini au peptidi maalum. Mbinu za ujenzi wa maktaba ya kingamwili za faji ni pamoja na ujenzi wa maktaba ya kingamwili za Fab, ujenzi wa maktaba ya kingamwili scFv, ujenzi wa maktaba ya nanobody, n.k. Kulingana na aina za bakteriofaji, zinaweza kugawanywa katika M13, T7, T4, λ, na mifumo mingine. Kulingana na aina ya maktaba, inaweza kugawanywa katika maktaba ya peptidi isiyo ya kawaida, maktaba ya cDNA, maktaba ya kingamwili, na maktaba ya protini. Teknolojia ya kuonyesha faji ni rahisi kufanya kazi na haina gharama kubwa kutumia. Hata hivyo, mbinu hii hupunguza utofauti wa jeni za molekuli katika maktaba ambazo haziwezi kuelezea mfuatano mrefu sana,

Kwa sasa, teknolojia ya kuonyesha faji inatumika sana. Miongoni mwao, kuna mafanikio makubwa katika utafiti na ukuzaji wa chanjo mpya (chanjo za sintetiki za gharama nafuu na zenye ufanisi), ukuzaji wa dawa za kingamwili (vizuizi vya uchunguzi wa vimeng'enya), uhamishaji wa mawimbi ya seli (uchunguzi wa epitopu zilizoigwa), na utafiti wa epitopu za antijeni (utayarishaji wa kingamwili za monokloni).

Utangulizi wa Bakteriofaji ya T7

Bakteriofaji ya T7 ni DNA yenye nyuzi mbili, urefu wa DNA ni 40kb na imefungwa kwenye kapsidi yenye kipenyo cha 60nm. Kiunganishi kati ya kichwa na mkia ni muundo wa pete unaoundwa na nakala nyingi za gp8. Kichwa na kiini cha bakteriofaji ya t7 huunda muundo wa silinda unaofungamana na gp8 na unaweza kuunganisha kichwa na mkia.

Mchoro 1 Uwakilishi wa kimfumo wa bakteriofaji ya T7.(Rejea: Maendeleo katika mfumo wa kuonyesha T7 phage (Mapitio))

Utangulizi wa Bakteriofaji ya M13

Bakteriofaji M13 ni ya kundi la faji zenye nyuzi zinazoitwa kwa pamoja faji za Ff. Ina urefu wa nm 900 na upana wa nm 6.5. Ina jenomu ya DNA yenye nyuzi moja (ssDNA) yenye urefu wa bp 6407 ambayo ina jeni tisa zinazojumuisha protini 11 tofauti. Miongoni mwao, protini tano ni protini zenye magamba, na protini sita zinahusika katika urudufishaji na mkusanyiko wa faji. Mkusanyiko mkubwa zaidi wa protini zenye magamba ni protini ya kapsidi G8P, ambayo imeundwa na takriban vitengo 2,700 vya protini na huunda bahasha kuzunguka kromosomu.

Mchoro 2 Uwakilishi wa kimfumo wa bakteriofaji M13.(Rejea: Misingi ya Teknolojia ya Kuonyesha Kingamwili)

Utangulizi wa Maktaba ya Kinga Mwili ya Onyesho la Phaji

Ugunduzi wa kingamwili umekuwa muhimu zaidi katika dawa za kisasa. Kuna mbinu tofauti za ugunduzi wa kingamwili, lakini maktaba ya kingamwili ya kuonyesha fage hutumika zaidi katika sayansi ya matibabu.

Tangu 1990, miundo tofauti ya kingamwili imetumika kujenga maktaba za faji, ikiwa ni pamoja na VH, VHH, scFvs, diabodies, na kingamwili za Fab. ScFv inayoundwa na vikoa vya kimuundo vya VH na VL ni kingamwili za mnyororo mmoja zinazotumika kujenga maktaba za fajili za scFv. scFv ina sifa ya nusu ya maisha mafupi na kingamwili ya chini. Maktaba ya Faji ya Kingamwili ina VH, VL, CL, na CH1, ambayo inaweza kuchunguza haraka kingamwili bora zenye mshikamano mkubwa. Kitengo kidogo zaidi kinachoweza kufunga antijeni-VHH inayolengwa hufanya maktaba ya nanobody kwa sasa, VHH ina faida za muundo rahisi, ujazo mdogo, umumunyifu mkubwa, uthabiti mzuri, na utayarishaji na usemi rahisi. Maktaba za nanobody bandia (Nb) zinaibuka kama njia mbadala ya kuvutia ya chanjo ya wanyama kwa nanobody bandia thabiti na yenye mshikamano mkubwa. Kwa ujumla, vipande hivi vya kingamwili huunganishwa na G3P ya faji ya M13, na kwa kuiga idadi kubwa ya jeni zinazosimba kipande cha antibody, maktaba kubwa za faji za kuonyesha kingamwili zinaweza kuzalishwa ambazo kingamwili nyingi tofauti zinaweza kuchaguliwa.

Mchakato wa Ujenzi wa Maktaba ya Phage

Mchakato wa ujenzi wa maktaba ya phaji ni kama ifuatavyo: vitangulizi maalum vimeundwa kwa ajili ya ukuzaji wa PCR ambao hupata bidhaa, ambazo zimeunganishwa na kimeng'enya kwa kutumia vekta ya phaji ya T7/M13, na plasmidi ya phaji iliyounganishwa tena imetengenezwa kwa mafanikio. Plasidi ya phaji iliyounganishwa tena ilibadilishwa kuwa seli za vipokezi vya TG1, kisha ikafunikwa kwenye chombo chenye viuavijasumu vinavyofaa, na utamaduni uliopanuliwa ulifanyika baada ya kuchunguza transfoma. Baada ya raundi nyingi za utamaduni, phaji huiga nyakati za urejelezaji katika bakteria na kuonyesha protini inayolengwa au polipeptidi kwa mafanikio. Kisha maktaba ya phaji husafishwa ili kuondoa uchafu na phaji zisizofungwa.

Maeneo yanayobadilika (VH na VL) yalihusiana na utofauti wa kingamwili, na VH na VL ziliingizwa kwenye vekta ya phaji pamoja na mfuatano unaosimba protini ya phaji PIII. Baada ya kukusanyika, chembe ya phaji hufunuliwa na kuunganishwa na N-terminal ya protini ya koti ndogo III ili kuunda kipande cha kingamwili kinachofanya kazi, na kupata maktaba yenye mfuatano wa DNA ya kingamwili.

Baada ya mwisho wa chanjo, titer iligunduliwa, na damu ya wanyama ilichukuliwa baada ya titer kuthibitishwa. Limfosaiti hutengwa kutoka kwa damu, RNA hutolewa, RT-PCR huongeza kipande kinacholengwa, na kipande cha jeni la eneo la V hupatikana. Jeni la V huongezeka kwa kutumia primer maalum.

Maktaba asilia zilizoundwa zinajumuisha kingamwili duni za kinga mwilini kwa wanyama ambazo zinaweza kulenga shabaha yoyote. Kingamwili za faji zinazojifunga mahsusi kwenye antijeni zinaweza kukusanywa kwa kutumia mbinu za uchunguzi zinazorekebisha au kuweka lebo kwenye antijeni.

Antijeni lengwa huwekwa kwenye kibebaji imara, kama vile shimo la microplate, au kuunganishwa na shanga ya sumaku. Maktaba ya kingamwili ya phaji huongezwa ili kuifunga kwenye antijeni. Baada ya kupunguzwa mara nyingi, phaji zenye uhusiano mdogo au zisizo maalum huoshwa na zile zinazoonyesha kingamwili maalum huhifadhiwa.

Matumizi ya Onyesho la Phage

*Ugunduzi wa kingamwili umekuwa muhimu zaidi katika dawa za kisasa. Mbinu tofauti za ugunduzi wa kingamwili zipo, lakini teknolojia ya kuonyesha kingamwili inatumika zaidi katika sayansi ya matibabu. Tangu 1990, miundo tofauti ya kingamwili imetumika kujenga maktaba za kingamwili, ikiwa ni pamoja na VH, VHH, scFvs, diabodies, na kingamwili za Fab.
*Maktaba za peptidi ya faji huruhusu uamuzi wa haraka wa mfuatano wa epitopu za protini na zimekuwa zana yenye nguvu ya kuchunguza mwingiliano kati ya epitopu na vipokezi vya antijeni.
*Vipande vya kingamwili huunganishwa na G3P ya faji ya M13, na kwa kuunganisha idadi kubwa ya jeni zinazosimba kipande cha kingamwili, maktaba kubwa za kingamwili za kuonyesha faji zinaweza kuzalishwa ambapo kingamwili nyingi tofauti zinaweza kuchaguliwa.
*Mfumo wa kuonyesha T7 phage una faida nyingi, ikiwa ni pamoja na urahisi, usalama wa hali ya juu, uthabiti, uhifadhi rahisi, na usafirishaji, kwa hivyo mfumo huo hutumika katika chanjo za kinga na matibabu.
*Mfumo wa kuonyesha faji za T7 unaweza kugundua antijeni mbalimbali, kama vile antijeni za uso wa vijidudu vinavyosababisha magonjwa na antijeni za saratani.

Faji

KWA NINI UTUCHAGUE

Alpha Lifetech pia inaweza kuwapa wateja huduma kama vile uzalishaji wa kingamwili za vhh, uzalishaji wa kingamwili za scFv, uzalishaji wa Kingamwili za Fab.