Jukwaa la Upangaji wa Seli Moja B

Kingamwili ya monokloni (mAb) kama waanzilishi wa dawa za kingamwili, zaidi ya kingamwili 100 za monokloni zimeidhinishwa kwa ajili ya matibabu ya saratani, magonjwa ya kuambukiza, soko lao la utengenezaji wa dawa, na kuonyesha thamani yao ya kipekee ya matibabu. Teknolojia ya kingamwili ya seli moja ya B, kama kizazi kipya cha teknolojia ya utengenezaji wa kingamwili, inaweza kutenganisha kingamwili kwa ufanisi na haraka kutoka kwa seli moja ya B, ambayo ni mafanikio katika teknolojia ya uzalishaji wa kingamwili baada ya mseto na uonyeshaji wa faji. Teknolojia ya upangaji wa seli moja ya B inaweza kutumika kutengeneza kingamwili dhidi ya spishi nyingi kama vile sungura, panya, ngamia, kondoo, na kuku. Teknolojia ya seli moja ya B ina faida bora kama vile umaalum wa hali ya juu, shughuli nyingi, na mshikamano mkubwa. Kulingana na jukwaa la upangaji wa seli moja ya B, Alpha Lifetech ina faida katika muda wa uchunguzi na kupata kingamwili zenye ubora wa hali ya juu. Inaweza kutoa muundo wa antijeni, usanisi, na urekebishaji, kinga ya wanyama, uchunguzi wa uboreshaji wa seli moja ya B, mpangilio wa seli moja, uchunguzi wa kiwango cha juu cha upitishaji, usemi, na utakaso, Huduma za kiufundi za kituo kimoja kama vile uthibitishaji wa utendaji ili kukidhi mahitaji mbalimbali ya wateja.

Muhtasari wa Mbinu za Uchunguzi wa Seli B Moja

Mbinu za uchunguzi wa seli B moja zimegawanywa zaidi katika mbinu ya kutenganisha bila mpangilio na kutenganisha Antigen. Utenganishaji bila mpangilio unatumika kwa sampuli zenye mkusanyiko mkubwa wa kutenganisha Antigen, na ni seli B pekee ndizo hutenganishwa. Ni rahisi kufanya kazi lakini inahitaji kazi nyingi, na mara nyingi hutumika kama hatua ya kwanza ya kutenganisha antijeni mahususi. Mbinu ya kutenganisha antijeni mahususi inafaa kwa hali ambayo kiwango cha kingamwili maalum kama vile kingamwili za kupambana na uvimbe na kingamwili za kingamwili ni cha chini. Ni ngumu kiasi kutenganisha seli B maalum kwa kutumia kanuni ya kingamwili ya kufungamana maalum kwa antijeni na kingamwili kwa asili. Njia ya kawaida ya uainishaji na faida na hasara zake imeonyeshwa kwenye jedwali.

	Mbinu	Faida	Hasara
Nasibu Kujitenga	Udhibiti mdogo	Mahitaji ya chini ya vifaa Uendeshaji rahisi	Ufanisi mdogo Aina chache za seli zilizotengwa
	Upasuaji mdogo wa kunasa kwa leza	Usahihi wa nafasi ya juu Uendeshaji rahisi Chagua seli zinazofanana kutoka kwa sampuli kwa macho na uondoe uchafu	Mchakato mgumu wa kuandaa sampuli Kutoweza kujiendesha kiotomatiki
	Upangaji wa seli unaowezeshwa na mwangaza	Usahihi na ufanisi wa hali ya juu Kiwango cha juu cha otomatiki Matumizi mapana	Operesheni ngumu Mahitaji ya juu ya vifaa
Utenganishaji Teule wa Antijeni	Antijeni zenye lebo ya fluorochrome kupitia vigezo vingi	Usahihi na ufanisi wa hali ya juu Kiwango cha juu cha otomatiki Ubora wa juu na vigezo vingi Uwezo wa kutenganisha seli B katika hatua tofauti	Operesheni ngumu Mahitaji ya juu ya vifaa
	Shanga za sumaku zisizo na mipako	Uendeshaji rahisi Uwezo wa kurudia juu Inaweza kuimarisha seli B lengwa	Operesheni ngumu Shanga za sumaku huathiri shughuli za kibiolojia za seli na hazifai kwa ukuaji na uendeshaji baada ya kutengwa.
	Uchongaji mdogo	Ufanisi mkubwa Kasi ya Juu	Mahitaji ya juu ya vifaa Ufanisi mdogo
	Kipimo cha safu ya kinga mwilini kwenye chipu	Kiwango cha juu cha otomatiki Usahihi na ufanisi wa hali ya juu	Operesheni ngumu Gharama kubwa

Mchakato wa Huduma ya Kinga Mwili ya Uchunguzi wa Seli B Moja

Chanjo ya wanyama

Chagua antijeni inayofaa kwa wanyama wa majaribio (kama vile panya, sungura, n.k.) kwa ajili ya kuchochea kinga, ili waweze kutoa kingamwili maalum dhidi ya antijeni.

Chanjo ya wanyama ni hatua ya awali ya uzalishaji wa kingamwili. Chanjo ya wanyama ni matumizi ya utaratibu wa mwitikio wa kingamwili wa kiumbe chenyewe, kupitia kusisimua mfululizo kwa antijeni, wanyama hutoa mwitikio mkubwa wa kingamwili, na kisha hutoa kingamwili maalum dhidi ya antijeni maalum.

Ukusanyaji na uboreshaji wa seli B

Seli B zilitengwa kutoka kwa damu ya pembeni, wengu au nodi za limfu za wanyama wenye kinga. Seli hizi B zimechochewa na kinga ili kutoa kingamwili dhidi ya antijeni maalum.

Kwa njia za kimwili au kemikali (kama vile upenyezaji wa msongamano wa msongamano, utenganishaji wa shanga za sumaku, n.k.) uboreshaji wa seli B, kuondoa seli zisizo safi, kuboresha usafi wa seli B na ufanisi wa utenganishaji unaofuata.

Mchoro 1 Uundaji na utayarishaji wa kingamwili ya sungura ya monokloni. Chanzo cha marejeleo:Uundaji na Uzalishaji wa Kingamwili za Sungura za Monokloni.)

Upangaji wa seli B

Upangaji wa Seli Uliowashwa na Mwangaza (FACS), Utenganishaji wa Seli za Sumaku (MACS), Upangaji wa Seli za Microfluidic (MCS) au mbinu zingine za uchunguzi wa kiwango cha juu, pamoja na uwekaji lebo maalum wa antijeni, zinaweza kutumika kuchunguza seli za B kutoka kwa seli za B zilizoimarishwa ili kutoa kingamwili zinazolengwa.

Wakati seli moja ya B inapotengwa kutoka kwa idadi ya seli B mchanganyiko, jeni zake za kingamwili zinahitaji kupangwa kwa kutumia teknolojia ya mpangilio wa seli moja na kuchanganuliwa ili kupata taarifa za mfuatano wa DNA wa eneo lenye mabadiliko ya mnyororo mzito (VH) na eneo lenye mabadiliko ya mnyororo mwepesi (VL). Teknolojia ya mpangilio wa seli moja inajumuisha hatua tatu: kutenganisha seli moja, ukuzaji wa asidi ya kiini ndani ya seli na uchanganuzi wa mpangilio. Kanuni ya mpangilio wa seli moja ni kukuza DNA au RNA ya jenomu nzima ya chembechembe zilizotengwa ili kupata jenomu kamili au transcriptome yenye kifuniko cha juu kwa mpangilio wa matokeo ya juu.

Kupitia uchunguzi wa kiwango cha juu cha upitishaji, mfuatano wa jeni za kingamwili za maelfu ya seli B unaweza kupatikana kwa wakati mmoja, na kuharakisha sana kasi ya ugunduzi wa kingamwili. Taarifa hizi za mfuatano zinaweza kutumika zaidi kwa ajili ya ujenzi na uchunguzi wa maktaba ya kingamwili.

Mchoro 2 Mchoro wa kimkakati wa kunasa seli moja B, ujenzi wa maktaba, uchunguzi wa kiwango cha juu cha matokeo na mpangilio.(Chanzo cha marejeleo: Mfuatano mkubwa wa vipokezi vya seli B vya seli moja sambamba huwezesha ugunduzi wa haraka wa kingamwili mbalimbali tendaji za antijeni.)

Upanuzi wa jeni la kingamwili

Seli moja ya B hupasuliwa ili kutoa mRNA. Kisha, mfuatano wa cDNA wa eneo lenye mabadiliko ya mnyororo mzito (VH) na eneo lenye mabadiliko ya mnyororo mwepesi (VL) uliongezwa na mmenyuko wa mnyororo wa unukuzi-polimerasi kinyume (RT-PCR).

Usemi na utakaso wa kingamwili

Jeni la eneo linalobadilika lililokuzwa liliingizwa kwenye plasmidi ya vekta yenye jeni la eneo lisilobadilika ili kujenga plasmidi ya usemi wa kingamwili ya monokloni. Kisha, mfumo unaofaa wa usemi (mfumo wa usemi wa yukariyoti kama vile seli za CHO au mfumo wa usemi wa prokaryoti kama vile Escherichia coli) huchaguliwa kwa ajili ya usemi, na kingamwili ya monokloni yenye shughuli za kibiolojia hupatikana. Kromatografia ya mshikamano wa protini ilitumika kutoa na kusafisha kingamwili zilizoonyeshwa kutoka kwa utamaduni wa seli na kupata kingamwili za monokloni zenye ubora wa juu.

Uthibitishaji wa kingamwili

Uthibitishaji wa kingamwili wa umaalum, mshikamano na shughuli za kibiolojia na ELISA, Western blot, Flow Analysis, na Immunocoprecipitation ili kuhakikisha kwamba utendaji wa kingamwili unakidhi matarajio. Uthibitishaji wa kingamwili ni hatua muhimu katika kuhakikisha ubora na uaminifu wa kingamwili.

Mahitaji ya kinga mwilini

(1) Protini mseto: ≥2.5 mg, usafi wa protini >85%, uzito wa molekuli wa protini zaidi ya 10 kDa, mkusanyiko wa protini mumunyifu kati ya 0.5 na 5mg/mL. Ikiwa utakaso wa mshikamano wa antijeni unahitajika, 10 mg ya ziada ya protini mseto inahitajika.

(2)Polipeptidi na molekuli ndogo: Peptidi tupu ≥10 mg, usafi wa peptidi >90%, si chini ya 10 AA, kuunganisha KLH/BSA/OVA au protini zingine za kubeba; Molekuli ndogo zinahitaji tathmini ya kimuundo mapema.

Mtiririko wa Huduma ya Upangaji wa Seli B Moja

Hatua	Maudhui ya Huduma	Orodha ya matukio
Hatua ya 1: Chanjo ya wanyama na ugunduzi wa ELISA	(1) Wanyama walichanjwa mara 4-5, kuanzia kipimo cha 4, seramu ilikusanywa kwa ajili ya kugundua titer ya kingamwili ya ELISA (titer ya seramu ya antijeni ya protini ya ELISA >10^5; titer ya seramu ya antijeni ya Peptide ya ELISA >10^4). Wakati huo huo, 0.1ml ya seramu ya kabla ya chanjo na baada ya chanjo hutumwa kwa wateja kwa ajili ya kupimwa; Ikiwa titer haijathibitishwa, chanjo itaendelea au mteja anaomba kusitishwa kwa mradi, na sehemu ya chanjo pekee ndiyo itatozwa; (2) Ikiwa titer ilithibitishwa, seli za PBMC zilitengwa kutoka kwa damu nzima.	Wiki 10-12
Hatua ya 2: Upangaji wa seli B moja	(1) Wengu alikusanywa, seli moja ya B ilitengenezwa, damu ya pembeni ilikusanywa, na seli za PBMC zilitengwa. (2) Alama za kinga mwilini FITC na AF648. (3) Upangaji wa mtiririko wa fluorescence mara mbili+ utamaduni wa kloni ya seli moja ya b. (4) Utambuzi wa ELISA + mpangilio wa nakala chanya.	Wiki 2-3
Hatua ya 3: Usemi na uthibitisho wa kingamwili	(1) usanisi wa jeni wa mfuatano wa 6-10 + uthibitisho wa jaribio la usemi wa mamalia. (2) Utambulisho wa ELISA.	Wiki 3-4
Hatua ya 4: Uwasilishaji	(1) Mfuatano wa kingamwili: mfuatano wa kingamwili 4-6 (mfuatano usioonyeshwa hutolewa pamoja). (2) Kila mfuatano ulioonyeshwa ulitoa 0.2mg ya kingamwili. (3) Ripoti ya majaribio.	Wiki 1