Huduma ya Kuchunguza Maktaba ya Onyesho la Uso wa Chachu

Alpha Lifetech inataalamu katika ujenzi na uchunguzi wa maktaba ya maonyesho ya chachu, ikitoa uwezo wa kutoa aina tofauti za maktaba ya chachu na kuzichunguza kwa ajili ya kingamwili zenye mshikamano mkubwa na maalum kwa wateja duniani kote. Kwa timu ya watafiti wataalamu, teknolojia ya hali ya juu na vifaa, tunaweza kujenga maktaba za chachu zinazolenga protini mbalimbali zinazohusiana na magonjwa. Tunaweza kutoa teknolojia za maonyesho ya faji na maonyesho ya chachu, ikiwa ni pamoja na maonyesho ya chachu ya protini, maonyesho ya chachu ya molekuli ndogo, maonyesho ya chachu ya kingamwili, n.k.

Maktaba zetu za maonyesho ya chachu zina uwezo mkubwa na utofauti mkubwa, ambao hutoa msingi wa juu wa uchunguzi mzuri wa mfuatano maalum wa kingamwili. Tunaweza kujenga aina tofauti za maktaba za maonyesho ya chachu ya kingamwili (IgG, scFv, VHH, maktaba za kingamwili za Fab), maktaba za protini, maktaba za peptidi, maktaba za cDNA, n.k. kulingana na mahitaji yako. Zaidi ya hayo, tunaweza pia kutengeneza maktaba za kingamwili zenye sifa mbalimbali, ikiwa ni pamoja na maktaba za kingamwili, maktaba asilia, maktaba za sintetiki, maktaba za nusu-synthetic, na maktaba za kingamwili za magonjwa.

Utangulizi wa Mfumo wa Onyesho la Chachu

Teknolojia ya kuonyesha uso wa chachu ni njia ya kuonyesha protini zinazoungana tena kwenye uso wa chachu kupitia muunganiko wa jeni. Mfumo wa kawaida wa kuonyesha chachu hutumia protini lengwa iliyounganishwa na C-terminus ya kitengo kidogo cha Aga2p cha protini ya alpha lectin, hasa ikiwa na lebo za epitope pande zote mbili za protini lengwa: lebo ya N-terminal 9-amino acid hemagglutinin (HA) na lebo ya C-terminus 10 amino acid c-myc. Kitengo kidogo cha Aga2p cha amino asidi 69 hufungamana na kitengo kidogo cha alpha lectin Aga1p cha amino asidi 725 kupitia vifungo viwili vya disulfidi, na Aga1p imeunganishwa kwenye ukuta wa seli kupitia kifungo cha β 1,6-glucan covalent. Kwa hivyo, protini lengwa huonyeshwa kwenye uso wa seli za chachu na baadaye kutambuliwa na ligand inayolingana. Tenganisha protini zinazofanya kazi kutoka kwa maktaba kupitia uchunguzi wa saitometri ya mtiririko.

Mchoro 1: Kanuni ya kuonyesha uso wa chachu. (Chanzo cha Mchoro: Matumizi ya Onyesho la Uso wa Chachu kwa Uhandisi wa Protini.)

Utangulizi wa Maktaba ya Onyesho la Uso wa Chachu

Upangaji wa maonyesho ya chachu unategemea onyesho la uso wa chachu, linalotumika zaidi kuchunguza maktaba za kingamwili zinazolenga protini za uso wa seli. Kutokana na mfungamano mdogo usio maalum kati ya seli za chachu na nyuso zingine za seli, uteuzi wa kibiolojia wa chachu unaweza kuchunguza maktaba kubwa za mfungamano ili kupata nakala adimu.

Huduma ya Kuchunguza Maktaba ya Onyesho la Uso wa Chachu

Tayarisha plasmidi na seli za chachu za utamaduni, unganisha DNA inayosimba protini lengwa na kuiunganisha kwenye vekta ya usemi wa chachu iliyo na vichocheo vinavyoweza kutolewa, peptidi za ishara, na jeni lengwa zilizounganishwa na protini za kuonyesha uso (kama vile Aga2p). Jeni inayosimba protini lengwa inaweza kuunganishwa na jeni inayosimba protini ya ukuta wa seli ya chachu (kawaida Aga2p), na jeni iliyounganishwa inaweza kubadilishwa kuwa seli za chachu kupitia umeme. Baada ya mabadiliko, seli za chachu zinazoonyesha jeni za kingamwili kwenye uso wao zinaweza kupitia vipimo maalum vya uchunguzi wa antijeni: maktaba ya chachu huwekwa ndani ya antijeni lengwa na seli za chachu zinazojifunga mahsusi huchaguliwa. Kwa kutumia upangaji wa seli ulioamilishwa na fluorescence (FACS) ili kutenga seli za chachu zinazoonyesha protini zenye sifa zinazohitajika, uchunguzi wa maktaba ya kuonyesha chachu unaweza kufanywa kwa ukubwa wa juu wa maktaba wa ~10 ^ 8-10 ^ 9 seli za chachu. Kloni chanya zinaweza kutengwa kwa uchambuzi zaidi au matumizi ya chini. Mara tu kloni maalum za kingamwili zinapotambuliwa kutoka kwa maktaba ya kingamwili, zinaweza kutambuliwa zaidi na kuzalishwa kwa wingi, na kusafishwa kwa kutumia mbinu kama vile kromatografia ya protini A/G ili kukamilisha mchakato mzima wa uchunguzi wa maonyesho ya chachu na uzalishaji wa kingamwili.

Mchakato wa Ukaguzi wa Maktaba ya Onyesho la Chachu

Mchoro 2 Mchakato wa uchunguzi wa maktaba ya onyesho la chachu

Mtiririko wa Huduma ya Ukaguzi wa Maktaba ya Onyesho la Chachu

Hatua	Maudhui ya Huduma	Orodha ya matukio
Maandalizi ya Antijeni	Aina ya Antijeni: Ikiwa mteja anaweza kutoa antijeni, sampuli zinazolingana zinahitaji kuwasilishwa kulingana na aina: protini zinazounganishwa zinahitaji 3-3.5mg zenye mahitaji ya usafi wa zaidi ya 85%, molekuli ndogo zinahitaji kuunganishwa na mahitaji ya usafi wa zaidi ya 90%, usanisi wa peptidi unahitaji kuunganishwa na mahitaji ya usafi wa zaidi ya 90%, aina za sampuli kama vile virusi zinahitaji kuamilishwa, RNA zinahitaji kukaguliwa ili kuzuia uharibifu, na aina za antijeni zilizo hapo juu zinaweza pia kubinafsishwa kwa usanisi.	Wiki 2-3
Kinga ya Wanyama	Idadi ya chanjo za wanyama ni 5, na ni muhimu kubaini kama kuongeza idadi ya chanjo kulingana na upimaji wa kiwango cha damu. Kinga ya antijeni: nguvu ya antijeni ya protini/virusi>105; Peptidi/nguvu ya antijeni ya molekuli ndogo>10^4	Wiki 5-6
Maandalizi ya kiolezo cha cDNA	Tenganisha PBMC za plasma, toa jumla ya RNA (kifaa cha kutoa RNA) na ugeuze cDNA.	Siku 1
Ujenzi wa Maktaba	Kwa kutumia cDNA ya maktaba kama kiolezo, jeni la VHH liliongezwa kwa raundi mbili za PCR, na vekta ya kuonyesha chachu ya kuunganisha jeni la VHH ilijengwa. Vekta ilibadilishwa kuwa seli za chachu kwa kutumia umeme ili kujenga maktaba ya kingamwili. Chagua nakala 48 bila mpangilio na utambue kiwango chanya (>90%) kwa kutumia mbinu ya PCR; Kokotoa uwezo wa maktaba (10^7-10^8), mpangilio wa NGS ili kubaini kiwango sahihi cha kuingiza maktaba (>90%) na utofauti wa maktaba.	Wiki 2
Uchunguzi wa Maktaba	Raundi tatu chaguo-msingi za uchunguzi: Uchunguzi wa FACS wa protini wenye lebo ya Fluorescence, ukifuatiwa na mpangilio wa NGS katika raundi ya tatu. Kloni chanya zilichaguliwa kwa ajili ya usemi wa uanzishaji wa gramu moja na ugunduzi wa ELISA. Kloni zote chanya zilichaguliwa kwa ajili ya mpangilio wa jeni, na mfuatano tofauti wa eneo la CDR ulichaguliwa.	Wiki 2-3
Uthibitishaji wa Kinga Mwilini	Kujenga vekta zinazofaa za usemi kwa ajili ya mfuatano wa kingamwili kunaweza kurahisisha usemi wa kingamwili, utakaso wa kingamwili, uthibitisho wa ELISA na BLI wa kufungamana kwa antijeni ya kingamwili ili kuthibitisha ushikamano wa kingamwili, na kizuizi cha saitometri ya mtiririko ili kuthibitisha utendakazi wa seli.	Wiki 1

Uchunguzi wa Maktaba ya Onyesho la Uso wa Chachu

Katika machapisho ya jukwaa la kuonyesha uso wa chachu kwa ajili ya ugunduzi wa haraka wa nanobodi teule za umbo, waandishi walianzisha jukwaa kamili la ugunduzi wa nanobodi za ndani ya vitro kulingana na onyesho la uso wa chachu. Kwanza, maktaba ya nanobodi bandia ilibuniwa kuanzia jeni za ngamia. Mchoro D unaonyesha kwamba nanobodi ina lebo ya HA kwenye mwisho wa kaboksili, na kisha nanobodi imewekwa kwa ushirikiano kwenye ukuta wa seli ya chachu. Mchoro E unaonyesha mchakato wa uchunguzi wa nanobodi. Nanobodi za chachu zenye upendeleo wa antijeni zilitengwa, zikaongezwa, na kuchaguliwa mara kwa mara kwa kingamwili na FACS. Waandishi waligundua nanobodi teule za umbo zinazolenga GPCR mbili tofauti za binadamu kupitia jukwaa hili.