ஆப்டாமர் தொகுப்பின் தொழில்நுட்ப செயல்முறை

அடிப்படைக் கொள்கை மற்றும் தொழில்நுட்ப செயல்முறை

நியூக்ளிக் அமில ஆப்டாமர் தொகுப்பு தொழில்நுட்பத்தின் செயல்முறையானது, ஒற்றை-இழை ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகளின் ஒரு தொகுப்பு ஆய்வகத்தில் வேதியியல் முறையில் தொகுக்கப்பட்டு, இலக்குப் பொருளுடன் கலக்கப்படுகிறது. இந்தக் கலவையில், இலக்குப் பொருள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் ஒரு சிக்கலான சேர்மம் உருவாகிறது. இலக்குப் பொருளுடன் பிணைக்கப்படாத நியூக்ளிக் அமிலம் கழுவி அகற்றப்படுகிறது, மேலும் இலக்குப் பொருளுடன் பிணைக்கும் நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகள் தனிமைப்படுத்தப்படுகின்றன. இந்த நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகள், அடுத்தகட்ட பரிசோதனைக்காக PCR பெருக்கத்தைச் செய்வதற்கு வார்ப்புருக்களாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்படும் செலக்ஸ் பரிசோதனை மற்றும் பெருக்கத்தின் மூலம், இலக்குப் பொருளுடன் பிணைக்கப்படாத அல்லது குறைந்த அல்லது மிதமான ஈர்ப்புத்திறன் கொண்ட சில டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகள் கழுவி அகற்றப்படும். இதன் விளைவாக, இலக்குப் பொருளின் மீது அதிக ஈர்ப்புத்திறன் கொண்ட டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ-வான ஆப்டாமர்கள், அந்த மிகப் பெரிய சீரற்ற தொகுப்பிலிருந்து பிரிக்கப்படும். செலக்ஸ் செயல்முறையின் மூலம் அவற்றின் தூய்மை அதிகரிக்கும், இறுதியில் அவை அந்தத் தொகுப்பின் பெரும்பகுதியை ஆக்கிரமிக்கும்.

நியூக்ளிக் அமில ஆப்டாமர்களின் செலக்ஸ் திரையிடல் செயல்முறையானது, வேதியியல் ரீதியாகத் தொகுக்கப்பட்ட சீரற்ற ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு நூலகங்களை ஒன்றிணைப்பதில் தொடங்குகிறது. சீரற்ற ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு நூலகங்கள் ஒரு பெரிய நூலகக் கொள்ளளவைக் கொண்டுள்ளன. அதிக பன்முகத்தன்மை அதன் குறிப்பிடத்தக்க நன்மையாகும். கோட்பாட்டளவில், ஒரு ஒலிகோநியூக்ளியோடைடில் உள்ள சீரற்ற வரிசை n காரங்களைக் கொண்டிருந்தால், நூலகக் கொள்ளளவு 4n ஆகும். நாம் செயற்கை மாற்றியமைக்கப்பட்ட நூலகத்தைக் கருத்தில் கொண்டால், அது சீரற்ற வரிசைகளின் பன்முகத்தன்மையை அதிகரிக்கும். தற்போது, ​​செலக்ஸ் சோதனைகளில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகளின் சீரற்ற வரிசைகளின் நீளம் பொதுவாக 30 காரங்கள் ஆகும், மேலும் நூலகக் கொள்ளளவு 10^18 வரை அதிகமாக இருக்கலாம். அதிக ஈர்ப்புத்திறன் கொண்ட லிகண்டுகளின் செலக்ஸ் திரையிடலுக்கு நூலகக் கொள்ளளவு மிகவும் முக்கியமானது. இருப்பினும், செயற்கை நூலகங்களின் செறிவு ஒரு குறிப்பிட்ட அளவில் இருப்பதால், மிக நீண்ட சீரற்ற வரிசைகள் நூலகங்களில் உள்ள ஒவ்வொரு ஒலிகோநியூக்ளியோடைடின் செறிவையும் குறைத்துவிடும், இது ஒரு குறிப்பிட்ட ஆப்டாமருக்கான செலக்ஸ் திரையிடல் நிகழ்தகவைக் குறைக்கும். பொதுவாக, செலக்ஸ் திரையிடலின் முதல் சுற்றில் 10^13 முதல் 10^15 வரையிலான நூலகக் கொள்ளளவு நடைமுறைத் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய முடியும்.

படம் 1. SELEX தொழில்நுட்ப செயல்முறை