புரத-புரத இடைவினை பகுப்பாய்வு சேவை

பல்வேறு வாடிக்கையாளர்களின் சோதனைத் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்யும் வகையில், ஆல்ஃபா லைஃப்டெக் நிறுவனம் அவர்களுக்குப் புரத மதிப்பீடுகள், புரத இடைவினைப் பகுப்பாய்வு, புரத-புரத இடைவினை மதிப்பீடு (CO-IP, வெஸ்டர்ன் பிளாட், குரோமாடின் இம்யூனோபிரெசிபிடேஷன் மதிப்பீடு) மற்றும் புரதச் செயல்பாட்டு மதிப்பீடு ஆகியவற்றையும் வழங்குகிறது.

எங்களைத் தொடர்பு கொள்ளுங்கள்

புரத-புரத இடைவினை பகுப்பாய்வு சேவை

ஆல்ஃபா லைஃப்டெக் பல ஆண்டுகளாகப் புரதப் பரிசோதனைகளில் ஆழ்ந்து ஈடுபட்டு, புரதச் செயல்பாட்டுப் பரிசோதனைக்கான ஒரு வலுவான தளத்தை உருவாக்கியுள்ளது. மேலும், புரத இடைவினைகளைச் சரிபார்க்கப் பல்வேறு தொழில்நுட்ப வழிமுறைகளிலும் தேர்ச்சி பெற்றுள்ளது. இது அறிவியல் ஆராய்ச்சி அல்லது திட்ட ஆராய்ச்சிக்கான நேரத்தைச் சேமிப்பதோடு, நிலையான முடிவுகளையும் வழங்குகிறது.

புரத-புரத இடைவினை மதிப்பீட்டிற்கான அறிமுகம்

மரபணுப் பொருட்களில் சேமிக்கப்பட்ட அறிவுறுத்தல்களுக்கு ஏற்ப செயல்படும் புரதங்கள், எந்தவொரு உயிரினத்திலும் மிக முக்கியமான நிர்வாக மூலக்கூறுகளாகும். பெரும்பாலும், புரதங்கள் மற்ற புரதங்களுடன் இடைவினை புரியும் பங்களிப்பாளர்களாகச் செயல்படுவதன் மூலம் தங்கள் பணிகளைச் செய்கின்றன; ஒரு செல்லின் உண்மையான சூழலில் ஒரு புரதத்தின் செயல்பாட்டை ஆராயும்போது இது மேலும் தெளிவாகத் தெரிகிறது. ஒரு தனிப்பட்ட புரதத்தின் உயிர்வேதியியல் ஆய்வுக்கு, புரதங்களுக்கு இடையேயான இடைவினைகளைக் கண்டறிவது மிகவும் முக்கியமானதாகும். பொதுவான புரத இடைவினைப் பகுப்பாய்வுகள் பின்வருமாறு:

கூட்டு நோயெதிர்ப்பு வீழ்படிவாக்கல் சோதனை

கூட்டு நோயெதிர்ப்பு வீழ்படிவாக்கல் முறையின் கொள்கை என்னவென்றால், இலக்குப் புரதம், குறிப்பிட்ட நோயெதிர்ப்புப் பொருள் மற்றும் புரதம் A/G காந்த மணிகளை அடைகாப்பதற்காகக் கலப்பது, காந்தத் தட்டில் காந்த மணிகள் ஒட்டிக்கொள்வதன் மூலம் பிணைக்கப்படாத புரதத்தின் மேல்தேங்கிய திரவத்தை அகற்றுவது, மற்றும் குறிப்பாகப் பிணைக்கப்படாவிட்டால், புரதம் மற்றும் பிற அசுத்தங்களை நீக்குவதற்காகக் காந்த மணிகளைக் கழுவுவது ஆகும்.

படம் 1. கோ-ஐபி மதிப்பீடுகளின் திட்ட வரைபடம்.(மேற்கோள் ஆதாரம்:) கூட்டு நோயெதிர்ப்பு வீழ்படிவாக்கல் சோதனை - பப்மெட் (nih.gov))

புல்-டவுன் அஸ்ஸே

புல்-டவுன் அஸ்ஸே என்பது, அறியப்பட்ட புரதத்தை காந்த மணிக்கில் நிலைநிறுத்தி, கண்டறியப்பட வேண்டிய பொருளைச் சேர்ப்பதாகும். வெளியேறும் திரவமானது, இடைவினை புரியும் புரதங்களின் உறிஞ்சுதலைக் கண்டறியப் பயன்படுகிறது.

1988-ல், ஸ்மித் மற்றும் அவரது குழுவினர் ஜிஎஸ்டி இணைவுப் புரதத்தைத் தூய்மைப்படுத்தினர். இது புல்-டவுன் சோதனைகளில் பயன்படுத்தப்பட்டது மற்றும் ஜிஎஸ்டி புல்-டவுன் என்று அழைக்கப்படுகிறது. இதன் செயல்முறையானது, இலக்குப் புரதத்துடன் ஒரு ஜிஎஸ்டி குறியீட்டைச் சேர்ப்பது, இடைவினை புரியும் புரதத்தை ஜிஎஸ்ஹெச் (GSH) மூலம் பிடிப்பது, பிணைப்பை வெளியேற்றுவது, மற்றும் அதை டபிள்யூபி (WB) சோதனைகள் மூலம் சரிபார்ப்பது ஆகும்.

படம் 2. ஜிஎஸ்டி புல்-டவுன் மதிப்பீடுகளின் திட்ட வரைபடம்.(மேற்கோள் ஆதாரம்:) இன் விட்ரோவில் PIF4 பிணைப்பை ஆய்வு செய்வதற்கான ஜிஎஸ்டி புல்-டவுன் அஸ்ஸே - பப்மெட் (nih.gov) )

அவரது பிரித்தெடுப்பு முறையானது, நிக்கல் அல்லது கோபால்ட் போன்ற உலோக அயனிகளை ஊடகமாகப் பயன்படுத்தி, பிணைப்பு நிறப்பிரிகை மூலம் புரதத்தைத் தூய்மைப்படுத்தி, சரிபார்ப்பதற்காக WB பரிசோதனை மூலம் பிணைப்பை வெளியேற்றுகிறது.

மேலும், டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் (புரத டிஎன்ஏ பிணைப்புச் சோதனை), ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் (புரத ஆர்என்ஏ இடைவினைச் சோதனை) மற்றும் சிறு மூலக்கூறு பிரித்தெடுத்தல் சோதனைகளும் உள்ளன.

டிஎன்ஏ புல்-டவுன் (புரத டிஎன்ஏ பிணைப்புச் சோதனை) என்பது புரதத்தின் டிஎன்ஏ பிணைப்பைக் கண்டறியும் ஒரு இன் விட்ரோ முறையாகும். குறிப்பிட்ட புரதங்கள் இலக்கு டிஎன்ஏவுடன் பிணைகின்றனவா என்பது WB சோதனைகள் மூலம் கண்டறியப்பட்டது; புரதங்களுடன் பிணைந்த அறியப்படாத டிஎன்ஏ துண்டுகள், MS கண்டறிதல் மூலம் அறியப்படுகின்றன.

ஆர்.என்.ஏ புல்-டவுன் (புரத ஆர்.என்.ஏ இடைவினைச் சோதனை) என்பது, ஆர்.என்.ஏ புரதங்களுடன் பிணைவதைக் கண்டறியும் ஒரு இன் விட்ரோ முறையாகும். குறிப்பிட்ட புரதங்கள் இலக்கு ஆர்.என்.ஏ-வுடன் பிணைகின்றனவா என்பது WB சோதனைகள் மூலம் கண்டறியப்பட்டது; புரதங்களுடன் பிணைந்த அறியப்படாத ஆர்.என்.ஏ துண்டுகள், MS கண்டறிதல் மூலம் அறியப்படுகின்றன.

SM புல்-டவுன் (சிறிய மூலக்கூறு புல்-டவுன் சோதனைகள்) மூலம், சிறிய மூலக்கூறுகளுடன் குறிப்பாகப் பிணைக்கும் இலக்குப் புரதங்களைக் கண்டறிய முடியும். மேலும், இதை MS உடன் இணைக்கும்போது, சிறிய மூலக்கூறு இலக்குப் புரதங்களைத் துல்லியமாகச் சோதிக்க முடிகிறது. இதனை இன் விட்ரோ லேபிளிங் முறை மற்றும் உயிரியல் ஆர்த்தோகனல் முறை எனப் பிரிக்கலாம்.

WB பரிசோதனை

WB பரிசோதனை (வெஸ்டர்ன் பிளாட் பரிசோதனை அல்லது வெஸ்டர்ன் பிளாட் என்றும் அழைக்கப்படுகிறது), இதன் சாராம்சம் ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடியின் ஒரு குறிப்பிட்ட வினையாகும். இதன் அடிப்படைக் கொள்கை, SDS பாலிஅக்ரிலாமைடு ஜெல் எலக்ட்ரோஃபோரெசிஸ் மூலம் இயல்பு இழந்த புரதங்களைப் பிரித்து, மென்படலப் பரிமாற்றம் (ஈரமான அல்லது அரை-உலர் சுழற்சி) வழியாக ஒரு திட நிலை தாங்கிக்கு (PVDF மென்படலம், NC மென்படலம் போன்றவை) மாற்றுவதாகும். தடுப்புக்குப் (BSA, மோர் போன்றவற்றைப் பயன்படுத்தி) பிறகு, புரதத்துடன் குறிப்பாகப் பிணைவதற்காக முதன்மை ஆன்டிபாடி பயன்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் படலத்தைக் கழுவிய பிறகு ஃபுளோரசெய்ன்-குறியிடப்பட்ட இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்படுகிறது. இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடியை முதன்மை ஆன்டிபாடியுடன் பிணைப்பதன் மூலம், அடி மூலக்கூறு நிற வளர்ச்சி மற்றும் வேதி ஒளிர்தல் மூலம் இலக்குப் புரதத்தைக் காண முடியும். இது பொதுவாக ஒரு குறிப்பிட்ட புரதம் மாதிரியில் வெளிப்படுத்தப்படுகிறதா என்பதைத் தீர்மானிக்கவும், அதன் வெளிப்பாட்டு அளவை தோராயமாகப் பகுப்பாய்வு செய்யவும் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

புரத-புரத இடைவினை முறை ஒப்பீடு

புரதப் பிரித்தெடுப்புச் சோதனைகள் (protein pull-down assays) மற்றும் கூட்டு-ஐபி சோதனைகள் (Co-IP assays) ஆகிய இரண்டும் புரத இடைவினைகளைக் கண்டறியும் சோதனைகளின் வகையைச் சேர்ந்தவை. இவ்விரு முறைகளுக்கும் உள்ள வேறுபாடு என்னவென்றால், கூட்டு-ஐபி சோதனைகள் அறியப்பட்ட புரதங்களுடன் இடைவினை புரியும் புரதங்களைப் பெறுகின்றன. இது ஒரு குறிப்பிட்ட நம்பகத்தன்மையைக் கொண்டிருந்தாலும், இடைவினை புரியும் புரதங்கள் நேரடியாகவா அல்லது மறைமுகமாகவா இடைவினை புரிகின்றன என்பதை உறுதிப்படுத்த முடியாது. பிரித்தெடுப்புச் சோதனைகள், அறியப்பட்ட புரதத்துடன் இடைவினை புரியும் அறியப்படாத புரதத்தைக் கண்டறிவதாகும். அறியப்பட்ட புரதம் கண்டறியப்பட்ட புரதத்துடன் இடைவினை புரிகிறதா என்பதை இது நேரடியாக உறுதிப்படுத்த முடியும், ஆனால் உயிருள்ள உயிரினத்தில் (in vivo) பிணைப்பு நிலையை அறிய முடியாது.

இம்யூனோபிரெசிபிடேஷன் சோதனைகளின் அடிப்படையில், இரண்டு அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட புரதங்களுக்கு இடையில் ஒரு இடைவினை உள்ளதா என்பதைப் பகுப்பாய்வு செய்ய கோ-இம்யூனோபிரெசிபிடேஷன் தொழில்நுட்பம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. மற்ற புரத இடைவினைப் பகுப்பாய்வு சோதனை நுட்பங்களுடன் (ஜிஎஸ்டி புல்-டவுன், வெஸ்டர்ன் பிளாட், குரோமாடின் இம்யூனோபிரெசிபிடேஷன் அஸ்ஸே போன்றவை) ஒப்பிடும்போது, கோ-ஐபி தொழில்நுட்பம் அதிகத் தனித்தன்மை, உணர்திறன் மற்றும் உயர் மீள்நிகழ்வுத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது. இது குறிப்பிட்ட பிணைப்பு அல்லாதவற்றின் குறுக்கீட்டைத் தவிர்த்து, புரதங்களின் இடைவினையை அவற்றின் இயல்பு நிலையில் பிரதிபலிக்கிறது.

	ஜிஎஸ்டி குறைக்கப்பட்டது	கூட்டு-ஐபி	WB
நன்மை	இயக்குவதற்கு எளிதானது பல்வேறு புரதங்களைத் தூய்மைப்படுத்த ஏற்றது	*உயிரின இடைவினைப் பகுப்பாய்விற்காக கீழ்நிலை புரதத்தைக் கொண்டு இதை அடையாளம் காண முடியும்.	வலுவான தனித்தன்மை *பண்புசார் மற்றும் அளவுசார் இன் விட்ரோ
வரம்பு	ஒருவேளை குறிப்பிட்ட பிணைப்பு இல்லாமல் இருக்கலாம் இந்த ஊடாடலுக்கு மேலதிக சரிபார்ப்பு தேவைப்படுகிறது.	ஆன்டிபாடிகளை வலுவாகச் சார்ந்திருத்தல் *குறிப்பிடப்படாத பிணைப்பு ஏற்படலாம்	*நேரம் எடுக்கும் பெரிய அளவிலான புரதப் பகுப்பாய்வுக்குப் பயன்படுத்துவது கடினம்
பயன்பாட்டு உதாரணம்	* தொடர்புகளைக் கண்டறியவும் *சுத்திகரிக்கப்பட்ட புரதக் கலவை	சமிக்ஞை கடத்தலைப் பற்றி ஆய்வு செய்யவும் *நோய் பொறிமுறை	புரத-புரத, புரத-டிஎன்ஏ, மற்றும் புரத-ஆர்என்ஏ இடைவினைகளின் அடுத்தடுத்த பகுப்பாய்வு