ஒற்றை பி செல் வரிசைப்படுத்தும் தளம்

ஒற்றை பி செல் பிரிப்பு தளத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டு, ஆல்ஃபா லைஃப்டெக் நிறுவனம் பரிசோதனை நேரம் மற்றும் உயர்தர ஆன்டிபாடிகளைப் பெறுவதில் சாதகங்களைக் கொண்டுள்ளது.

எங்களைத் தொடர்பு கொள்ளுங்கள்

ஒற்றை பி செல் வரிசைப்படுத்தும் தளம்

ஆன்டிபாடி மருந்துகளின் முன்னோடியாக விளங்கும் மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடி (mAb), புற்றுநோய் மற்றும் தொற்று நோய்களுக்கான சிகிச்சைக்கு 100-க்கும் மேற்பட்ட மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடிகளை அங்கீகரித்துள்ளது. இது தனக்கென ஒரு மருந்து மேம்பாட்டுச் சந்தையைக் கொண்டுள்ளதுடன், அதன் தனித்துவமான சிகிச்சை மதிப்பையும் வெளிப்படுத்துகிறது. புதிய தலைமுறை ஆன்டிபாடி மேம்பாட்டுத் தொழில்நுட்பமான ஒற்றை பி செல் ஆன்டிபாடி தொழில்நுட்பம், ஒற்றை பி செல்களிலிருந்து ஆன்டிபாடிகளைத் திறமையாகவும் விரைவாகவும் பிரித்தெடுக்கிறது. இது ஹைபிரிடோமா மற்றும் ஃபேஜ் டிஸ்ப்ளேவுக்குப் பிறகு ஆன்டிபாடி உற்பத்தித் தொழில்நுட்பத்தில் ஒரு திருப்புமுனையாகும். ஒற்றை பி செல் பிரித்தெடுக்கும் தொழில்நுட்பத்தை முயல்கள், எலிகள், ஒட்டகங்கள், செம்மறி ஆடுகள் மற்றும் கோழிகள் போன்ற பல உயிரினங்களுக்கு எதிராக ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்கப் பயன்படுத்தலாம். ஒற்றை பி செல் தொழில்நுட்பம் உயர் தனித்தன்மை, உயர் செயல்பாடு மற்றும் உயர் ஈர்ப்பு போன்ற சிறந்த நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது. ஒற்றை பி செல் பிரித்தெடுக்கும் தளத்தின் அடிப்படையில், ஆல்ஃபா லைஃப்டெக் பரிசோதனை நேரம் மற்றும் உயர்தர ஆன்டிபாடிகளைப் பெறுவதில் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது. இது வாடிக்கையாளர்களின் பல்வேறு தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்வதற்காக ஆன்டிஜென் வடிவமைப்பு, தொகுப்பு மற்றும் மாற்றம், விலங்கு நோய் எதிர்ப்பு சக்தி, ஒற்றை பி செல் செறிவூட்டல் பரிசோதனை, ஒற்றை செல் வரிசைப்படுத்தல், உயர் செயல்திறன் பரிசோதனை, வெளிப்பாடு மற்றும் சுத்திகரிப்பு, செயல்பாட்டுச் சரிபார்ப்பு போன்ற ஒரு நிறுத்த தொழில்நுட்ப சேவைகளை வழங்குகிறது.

ஒற்றை பி-செல் பரிசோதனை நுட்பங்களின் சுருக்கம்

ஒற்றை பி செல் திரையிடல் முறைகள் முக்கியமாக சீரற்ற பிரித்தெடுத்தல் முறை மற்றும் ஆன்டிஜென்-தேர்ந்தெடுத்தல் பிரித்தெடுத்தல் எனப் பிரிக்கப்படுகின்றன. சீரற்ற பிரித்தெடுத்தல் அதிக செறிவுள்ள மாதிரிகளுக்குப் பொருந்தும். ஆன்டிஜென்-தேர்ந்தெடுத்தல் பிரித்தெடுத்தலில், பி செல்கள் மட்டுமே பிரிக்கப்படுகின்றன. இது செயல்படுத்துவதற்கு எளிமையானது, ஆனால் அதிக உழைப்பு தேவைப்படுகிறது, மேலும் இது பெரும்பாலும் ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட பிரித்தெடுத்தலின் முதல் படியாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. கட்டி எதிர்ப்பு ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் தன்னுடல் தாக்கு ஆன்டிபாடிகள் போன்ற குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளின் உள்ளடக்கம் குறைவாக இருக்கும் சூழ்நிலைக்கு ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட பிரித்தெடுத்தல் முறை பொருத்தமானது. ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடி ஆகியவை மூலத்துடன் குறிப்பிட்ட பிணைப்பைக் கொண்டிருக்கும் நோயெதிர்ப்பு கொள்கையைப் பயன்படுத்தி, குறிப்பிட்ட பி செல்களைப் பிரித்தெடுப்பது ஒப்பீட்டளவில் சிக்கலானது. பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் வகைப்படுத்தல் முறை மற்றும் அதன் நன்மைகள் மற்றும் தீமைகள் அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளன.

	அணுகுமுறைகள்	நன்மைகள்	தீமைகள்
சீரற்ற தனிமைப்படுத்துதல்	நுண் கையாளுதல்	குறைந்த உபகரணத் தேவைகள் எளிய செயல்பாடு	குறைந்த செயல்திறன் வரையறுக்கப்பட்ட வகையான தனிமைப்படுத்தப்பட்ட செல்கள்
	லேசர் பிடிப்பு நுண் அறுவை சிகிச்சை	உயர் நிலை துல்லியம் எளிய செயல்பாடு மாதிரியிலிருந்து ஒத்த செல்களைப் பார்வை மூலம் தேர்ந்தெடுத்து அசுத்தங்களை அகற்றவும்.	மாதிரி தயாரிப்பின் சிக்கலான செயல்முறை தானியங்குபடுத்த இயலாமை
	ஒளிர்தல்-செயல்படுத்தப்பட்ட செல் வரிசைப்படுத்தல்	அதிக துல்லியம் மற்றும் செயல்திறன் அதிக அளவிலான தானியக்கம் பரந்த பயன்பாடு	சிக்கலான செயல்பாடு அதிக உபகரணத் தேவைகள்
ஆன்டிஜென் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட தனிமைப்படுத்தல்	பல அளவுருக்கள் வழியாக ஃப்ளோரோகுரோம் குறியிடப்பட்ட ஆன்டிஜென்கள்	அதிக துல்லியம் மற்றும் செயல்திறன் அதிக அளவிலான தானியக்கம் அதிக செயல்திறன் மற்றும் பல அளவுருக்கள் பல்வேறு நிலைகளில் பி செல்களைப் பிரித்தெடுக்கும் திறன்	சிக்கலான செயல்பாடு அதிக உபகரணத் தேவைகள்
	ஆன்டிஜென் பூசப்பட்ட காந்த மணிகள்	எளிய செயல்பாடு உயர் மறுசெயல்திறன் இலக்கு B செல்களை செறிவூட்ட முடியும்	சிக்கலான செயல்பாடு காந்த மணிகள் செல்களின் உயிரியல் செயல்பாட்டைப் பாதிப்பதோடு, அவற்றைப் பிரித்தெடுத்த பிறகு வளர்ப்பதற்கும் செயல்படுவதற்கும் உகந்தவையாகவும் இருப்பதில்லை.
	நுண் பொறிப்பு	உயர் செயல்திறன் அதிவேகம்	அதிக உபகரணத் தேவைகள் குறைந்த செயல்திறன்
	சிப்பில் இம்யூனோஸ்பாட் வரிசைப் பரிசோதனை	அதிக அளவிலான தானியக்கம் அதிக துல்லியம் மற்றும் செயல்திறன்	சிக்கலான செயல்பாடு அதிக விலை

ஒற்றை பி செல் ஸ்கிரீனிங் ஆன்டிபாடி சேவை செயல்முறை

விலங்கு நோய்த்தடுப்பு

நோயெதிர்ப்புத் தூண்டுதலுக்காக, சோதனை விலங்குகளுக்கு (எலிகள், முயல்கள் போன்றவை) பொருத்தமான ஆன்டிஜெனைத் தேர்ந்தெடுக்கவும், இதன் மூலம் அவை அந்த ஆன்டிஜெனுக்கு எதிராகக் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்க முடியும்.

விலங்கு நோய்த்தடுப்பு என்பது ஆன்டிபாடி உருவாக்கத்தின் ஆரம்ப கட்டமாகும். விலங்கு நோய்த்தடுப்பு என்பது, உயிரினத்தின் திரவ நோய் எதிர்ப்புப் பதில் பொறிமுறையைப் பயன்படுத்துவதாகும்; ஆன்டிஜென்களின் தொடர்ச்சியான தூண்டுதல் மூலம், விலங்குகள் ஒரு வலுவான நோய் எதிர்ப்புப் பதிலை உருவாக்கி, பின்னர் குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்களுக்கு எதிராக குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைச் சுரக்கின்றன.

பி செல்களை சேகரித்தல் மற்றும் செறிவூட்டுதல்

நோயெதிர்ப்புத் திறன் கொண்ட விலங்குகளின் புற இரத்தம், மண்ணீரல் அல்லது நிணநீர் முடிச்சுகளிலிருந்து பி செல்கள் பிரித்தெடுக்கப்பட்டன. இந்த பி செல்கள், குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்களுக்கு எதிராக ஆன்டிபாடிகளை உற்பத்தி செய்வதற்காக நோயெதிர்ப்புத் தூண்டல் செய்யப்பட்டன.

இயற்பியல் அல்லது வேதியியல் முறைகள் (அடர்த்தி சரிவு மையவிலக்கம், காந்த மணிப் பிரிப்பு போன்றவை) மூலம் பி செல்களைச் செறிவூட்டுதல், அசுத்த செல்களை அகற்றுதல், பி செல்களின் தூய்மையை மேம்படுத்துதல் மற்றும் அதனைத் தொடரும் பிரித்தெடுப்பின் செயல்திறனை அதிகரித்தல்.

படம் 1. முயல் மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடியின் குளோனிங் மற்றும் தயாரிப்பு. மேற்கோள் ஆதாரம்:ஒற்றை பி செல் குளோனிங் மற்றும் முயல் மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடிகளின் உற்பத்தி.)

பி செல் வரிசைப்படுத்தல்

செறிவூட்டப்பட்ட B செல்களிலிருந்து தனிப்பட்ட B செல்களைப் பிரித்தெடுத்து, இலக்கு வைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளை உற்பத்தி செய்வதற்காக, ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட குறியிடலுடன் இணைந்த ஃப்ளோரசன்ஸ்-ஆக்டிவேட்டட் செல் சார்ட்டிங் (FACS), மேக்னடிக் செல் செப்பரேஷன் (MACS), மைக்ரோஃப்ளூயிடிக் செல் சார்ட்டர் (MCS) அல்லது பிற உயர்-செயல்திறன் திரையிடல் நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தலாம்.

கலப்பு பி செல் கூட்டத்திலிருந்து ஒரு தனி பி செல் பிரித்தெடுக்கப்படும்போது, அதன் ஆன்டிபாடி மரபணுக்களை ஒற்றை செல் வரிசைப்படுத்தல் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி வரிசைப்படுத்தி, கன சங்கிலி மாறுபடும் பகுதி (VH) மற்றும் இலகு சங்கிலி மாறுபடும் பகுதி (VL) ஆகியவற்றின் டிஎன்ஏ வரிசைத் தகவல்களைப் பெற பகுப்பாய்வு செய்ய வேண்டும். ஒற்றை செல் வரிசைப்படுத்தல் தொழில்நுட்பம் முக்கியமாக மூன்று படிகளை உள்ளடக்கியது: தனி செல் பிரித்தெடுத்தல், செல் உள் நியூக்ளிக் அமிலப் பெருக்கம் மற்றும் வரிசைப்படுத்தல் பகுப்பாய்வு. ஒற்றை செல் வரிசைப்படுத்தலின் கொள்கை என்னவென்றால், அதிக செயல்திறன் கொண்ட வரிசைப்படுத்தலுக்காக, பிரித்தெடுக்கப்பட்ட தனி செல்களின் மிகச்சிறிய முழு மரபணு டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ-வைப் பெருக்கி, உயர் கவரேஜுடன் ஒரு முழுமையான மரபணு அல்லது டிரான்ஸ்கிரிப்டோமைப் பெறுவதாகும்.

அதிவேகப் பரிசோதனை மூலம், ஆயிரக்கணக்கான பி செல்களின் ஆன்டிபாடி மரபணு வரிசைகளை ஒரே நேரத்தில் பெற முடியும். இது ஆன்டிபாடி கண்டுபிடிப்பின் வேகத்தை வெகுவாக அதிகரிக்கிறது. இந்த வரிசைத் தகவல்களை, ஆன்டிபாடி நூலகத்தை உருவாக்குவதற்கும் பரிசோதனை செய்வதற்கும் மேலும் பயன்படுத்தலாம்.

படம் 2. ஒற்றை பி செல் கைப்பற்றல், லைப்ரரி உருவாக்கம், அதிவேக ஸ்கிரீனிங் மற்றும் வரிசைப்படுத்துதல் ஆகியவற்றின் திட்ட வரைபடம்.(மேற்கோள் ஆதாரம்:) மிகப்பெரிய இணையான ஒற்றை-செல் பி-செல் ஏற்பி வரிசைமுறைப்படுத்தல், பல்வேறு ஆன்டிஜென்-வினைபுரியும் ஆன்டிபாடிகளை விரைவாகக் கண்டறிய உதவுகிறது..)

ஆன்டிபாடி மரபணு பெருக்கம்

mRNA-வை வெளியிடுவதற்காக ஒரு தனிப்பட்ட B செல் பிளவுபடுத்தப்படுகிறது. பின்னர், கன சங்கிலி மாறுபடும் பகுதி (VH) மற்றும் இலகு சங்கிலி மாறுபடும் பகுதி (VL) ஆகியவற்றின் cDNA வரிசைகள், தலைகீழ் படியெடுத்தல்-பாலிமரேஸ் சங்கிலி வினை (RT-PCR) மூலம் பெருக்கப்பட்டன.

ஆன்டிபாடி வெளிப்பாடு மற்றும் சுத்திகரிப்பு

மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடி வெளிப்பாட்டு பிளாஸ்மிடை உருவாக்குவதற்காக, பெருக்கப்பட்ட மாறுபடும் பகுதி மரபணு, நிலையான பகுதி மரபணுவைக் கொண்ட வெக்டர் பிளாஸ்மிடில் செருகப்பட்டது. பின்னர், வெளிப்பாட்டிற்காகப் பொருத்தமான வெளிப்பாட்டு அமைப்பு (CHO செல்கள் போன்ற யூக்கரியோடிக் வெளிப்பாட்டு அமைப்பு அல்லது எஸ்செரிச்சியா கோலை போன்ற புரோக்கரியோடிக் வெளிப்பாட்டு அமைப்பு) தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு, உயிரியல் செயல்பாடு கொண்ட மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடி பெறப்பட்டது. செல் வளர்ப்பிலிருந்து வெளிப்படுத்தப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளைப் பிரித்தெடுத்துத் தூய்மைப்படுத்தவும், உயர் தரமான மறுசேர்க்கை மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பெறவும் புரோட்டீன் A பிணைப்பு நிறப்பிரிகை பயன்படுத்தப்பட்டது.

ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்பு

ஆன்டிபாடியின் செயல்திறன் எதிர்பார்ப்புகளைப் பூர்த்திசெய்ததா என்பதை உறுதி செய்வதற்காக, ELISA, வெஸ்டர்ன் பிளாட், ஃப்ளோ அனாலிசிஸ் மற்றும் இம்யூனோகோபிரெசிபிடேஷன் ஆகியவற்றின் மூலம் அதன் தனித்தன்மை, ஈர்ப்புத்திறன் மற்றும் உயிரியல் செயல்பாடு ஆகியவை சரிபார்க்கப்படுகின்றன. ஆன்டிபாடிகளின் தரம் மற்றும் நம்பகத்தன்மையை உறுதி செய்வதில், ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்பு ஒரு முக்கியப் படியாகும்.

நோயெதிர்ப்பு ஊக்கிக்கான தேவைகள்

(1) மறுசேர்க்கை புரதம்: ≥2.5 மி.கி, புரதத் தூய்மை >85%, புரத மூலக்கூறு எடை 10 kDa-க்கு மேல், கரையக்கூடிய புரதச் செறிவு 0.5 முதல் 5 மி.கி/மி.லி வரை. ஆன்டிஜென் ஈர்ப்பு சுத்திகரிப்பு தேவைப்பட்டால், கூடுதலாக 10 மி.கி மறுசேர்க்கை புரதம் தேவைப்படும்.

(2) பாலிபெப்டைடுகள் மற்றும் சிறிய மூலக்கூறுகள்: வெறும் பெப்டைடு ≥10 மி.கி, பெப்டைடு தூய்மை >90%, 10 அமினோ அமிலங்களுக்குக் குறையாமல், KLH/BSA/OVA அல்லது பிற கடத்திப் புரதங்களை இணைத்தல்; சிறிய மூலக்கூறுகளுக்கு முன்கூட்டியே கட்டமைப்பு மதிப்பீடு தேவை.

ஒற்றை பி செல் வரிசைப்படுத்தும் சேவை பணிப்பாய்வு

படிகள்	சேவை உள்ளடக்கம்	காலவரிசை
படி 1: விலங்கு நோய்த்தடுப்பு மற்றும் ELISA கண்டறிதல்	(1) விலங்குகளுக்கு 4-5 முறை நோய்த்தடுப்பு செய்யப்பட்டது, 4வது டோஸிலிருந்து தொடங்கி, ஆன்டிபாடி டைட்டரைக் கண்டறிய ELISA பரிசோதனைக்காக சீரம் சேகரிக்கப்பட்டது (புரோட்டீன் ஆன்டிஜென் ELISA சீரம் டைட்டர் >10^5; பெப்டைட் ஆன்டிஜென் ELISA சீரம் டைட்டர் >10^4). அதே நேரத்தில், தடுப்பூசிக்கு முந்தைய மற்றும் பிந்தைய 0.1 மில்லி சீரம் பரிசோதனைக்காக வாடிக்கையாளர்களுக்கு அனுப்பப்படுகிறது; அதன் செறிவு தகுதி பெறவில்லை என்றால், தடுப்பூசி போடும் செயல் தொடரும் அல்லது வாடிக்கையாளர் திட்டத்தை நிறுத்தக் கோருவார், மேலும் தடுப்பூசிக்கான கட்டணம் மட்டுமே வசூலிக்கப்படும். (2) டைட்டர் தகுதி பெற்றால், முழு இரத்தத்திலிருந்து PBMC செல்கள் தனிமைப்படுத்தப்பட்டன.	10-12 வாரங்கள்
படி 2: ஒற்றை பி செல் பிரித்தல்	(1) மண்ணீரல் சேகரிக்கப்பட்டது, ஒற்றை பி செல் சஸ்பென்ஷன் தயாரிக்கப்பட்டது, புற இரத்தம் சேகரிக்கப்பட்டது, மற்றும் பிபிஎம்சி செல்கள் தனிமைப்படுத்தப்பட்டன. (2) இம்யூனோஆன்டிஜென் குறிப்பான்கள் FITC மற்றும் AF648. (3) இரட்டை ஃப்ளோரசன்ஸ் ஃப்ளோ வரிசைப்படுத்தல் + ஒற்றை பி செல் குளோன் வளர்ப்பு. (4) ELISA மூலம் நேர்மறை குளோன்களை அடையாளம் காணுதல் + வரிசைப்படுத்துதல்.	2-3 வாரங்கள்
படி 3: ஆன்டிபாடி வெளிப்பாடு மற்றும் சரிபார்ப்பு	(1) 6-10 வரிசை மரபணு தொகுப்பு + பாலூட்டி வெளிப்பாடு சோதனை சரிபார்ப்பு. (2) ELISA அடையாளம்.	3-4 வாரங்கள்
படி 4: விநியோகம்	(1) ஆன்டிபாடி வரிசைகள்: 4-6 ஆன்டிபாடி வரிசைகள் (வெளிப்படுத்தப்படாத வரிசைகள் ஒன்றாக வழங்கப்படுகின்றன). (2) வெளிப்படுத்தப்பட்ட ஒவ்வொரு வரிசையும் 0.2 மிகி ஆன்டிபாடியை வழங்கியது. (3) பரிசோதனை அறிக்கை.	1 வாரம்