ஒற்றை B செல் வரிசைப்படுத்தும் தளம்

ஒற்றை B செல் வரிசையாக்க தளத்தை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஆல்பா லைஃப்டெக், ஸ்கிரீனிங் நேரம் மற்றும் உயர்தர ஆன்டிபாடிகளைப் பெறுவதில் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது.

எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும்

01 தமிழ்

ஒற்றை B செல் வரிசைப்படுத்தும் தளம்

ஆன்டிபாடி மருந்துகளின் முன்னோடியாக மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடி (mAb), புற்றுநோய், தொற்று நோய் சிகிச்சைக்காக 100க்கும் மேற்பட்ட மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகள் அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளன, மருந்து மேம்பாட்டு சந்தையை சொந்தமாக்குகின்றன, மேலும் அவற்றின் தனித்துவமான சிகிச்சை மதிப்பைக் காட்டுகின்றன. புதிய தலைமுறை ஆன்டிபாடி மேம்பாட்டு தொழில்நுட்பமாக, ஒற்றை B செல் ஆன்டிபாடி தொழில்நுட்பம், ஒற்றை B செல்களிலிருந்து ஆன்டிபாடிகளை திறமையாகவும் விரைவாகவும் தனிமைப்படுத்த முடியும், இது ஹைப்ரிடோமா மற்றும் பேஜ் டிஸ்ப்ளேவுக்குப் பிறகு ஆன்டிபாடி உற்பத்தி தொழில்நுட்பத்தில் ஒரு திருப்புமுனையாகும். முயல்கள், எலிகள், ஒட்டகங்கள், செம்மறி ஆடுகள் மற்றும் கோழிகள் போன்ற பல இனங்களுக்கு எதிராக ஆன்டிபாடி உருவாக்க ஒற்றை B செல் வரிசையாக்க தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தலாம். ஒற்றை B செல் தொழில்நுட்பம் உயர் விவரக்குறிப்பு, உயர் செயல்பாடு மற்றும் உயர் தொடர்பு போன்ற சிறந்த நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது. ஒற்றை B செல் வரிசையாக்க தளத்தின் அடிப்படையில், ஆல்பா லைஃப்டெக் ஸ்கிரீனிங் நேரம் மற்றும் உயர்தர ஆன்டிபாடிகளைப் பெறுவதில் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது. இது ஆன்டிஜென் வடிவமைப்பு, தொகுப்பு மற்றும் மாற்றம், விலங்கு நோய் எதிர்ப்பு சக்தி, ஒற்றை B செல் செறிவூட்டல் ஸ்கிரீனிங், ஒற்றை செல் வரிசைப்படுத்துதல், உயர் செயல்திறன் ஸ்கிரீனிங், வெளிப்பாடு மற்றும் சுத்திகரிப்பு, வாடிக்கையாளர்களின் பல்வேறு தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய செயல்பாட்டு சரிபார்ப்பு போன்ற ஒரு நிறுத்த தொழில்நுட்ப சேவைகளை வழங்க முடியும்.

ஒற்றை பி-செல் ஸ்கிரீனிங் நுட்பங்களின் சுருக்கம்

ஒற்றை B செல் பரிசோதனை முறைகள் முக்கியமாக சீரற்ற தனிமைப்படுத்தல் முறை மற்றும் ஆன்டிஜென்செலக்டிவ் தனிமைப்படுத்தல் என பிரிக்கப்படுகின்றன. ஆன்டிஜென்செலக்டிவ் தனிமைப்படுத்தலின் அதிக செறிவு கொண்ட மாதிரிகளுக்கு சீரற்ற பிரிப்பு பொருந்தும், மேலும் B செல்கள் மட்டுமே பிரிக்கப்படுகின்றன. இது செயல்பட எளிதானது ஆனால் நிறைய வேலை தேவைப்படுகிறது, மேலும் இது பெரும்பாலும் ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட பிரிப்பின் முதல் படியாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட பிரிப்பு முறை, கட்டி எதிர்ப்பு ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் ஆட்டோ இம்யூன் ஆன்டிபாடிகள் போன்ற குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளின் உள்ளடக்கம் குறைவாக இருக்கும் சூழ்நிலைக்கு ஏற்றது. ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடி குறிப்பிட்ட பிணைப்பின் நோயெதிர்ப்பு கொள்கையைப் பயன்படுத்தி அசல் B செல்களை தனிமைப்படுத்துவது ஒப்பீட்டளவில் சிக்கலானது. பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் வகைப்பாடு முறை மற்றும் அதன் நன்மைகள் மற்றும் தீமைகள் அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளன.

	அணுகுமுறைகள்	நன்மைகள்	குறைபாடுகள்
சீரற்ற தனிமைப்படுத்துதல்	நுண் கையாளுதல்	குறைந்த உபகரணத் தேவைகள் எளிய செயல்பாடு	குறைந்த செயல்திறன் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட செல்களின் வரையறுக்கப்பட்ட வகைகள்
	லேசர் பிடிப்பு நுண்பிரிப்பு	உயர் நிலை துல்லியம் எளிய செயல்பாடு மாதிரியிலிருந்து ஒத்த செல்களைத் தேர்ந்தெடுத்து அசுத்தங்களை அகற்றவும்.	மாதிரி தயாரிப்பின் சிக்கலான செயல்முறை தானியக்கமாக்க இயலாமை
	ஃப்ளோரசன்ஸ்-செயல்படுத்தப்பட்ட செல் வரிசையாக்கம்	உயர் துல்லியம் மற்றும் செயல்திறன் அதிக அளவு ஆட்டோமேஷன் பரந்த பயன்பாடு	சிக்கலான செயல்பாடு அதிக உபகரணத் தேவைகள்
ஆன்டிஜென் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட தனிமைப்படுத்தல்	பல அளவுருக்கள் வழியாக ஃப்ளோரோக்ரோம் பெயரிடப்பட்ட ஆன்டிஜென்கள்	உயர் துல்லியம் மற்றும் செயல்திறன் அதிக அளவு ஆட்டோமேஷன் உயர் செயல்திறன் மற்றும் பல அளவுருக்கள் வெவ்வேறு நிலைகளில் B செல்களை தனிமைப்படுத்தும் திறன்	சிக்கலான செயல்பாடு அதிக உபகரணத் தேவைகள்
	ஆன்டிஜென் பூசப்பட்ட காந்த மணிகள்	எளிய செயல்பாடு அதிக மீண்டும் மீண்டும் செய்யக்கூடிய தன்மை இலக்கு B செல்களை வளப்படுத்த முடியும்	சிக்கலான செயல்பாடு காந்த மணிகள் செல்களின் உயிரியல் செயல்பாட்டை பாதிக்கின்றன மற்றும் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பிறகு கலாச்சாரம் மற்றும் செயல்பாட்டிற்கு உகந்தவை அல்ல.
	நுண் வேலைப்பாடு	அதிக செயல்திறன் அதிவேகம்	அதிக உபகரணத் தேவைகள் குறைந்த செயல்திறன்
	ஒரு சிப்பில் இம்யூனோஸ்பாட் வரிசை மதிப்பீடு	அதிக அளவு ஆட்டோமேஷன் உயர் துல்லியம் மற்றும் செயல்திறன்	சிக்கலான செயல்பாடு அதிக செலவு

ஒற்றை B செல் ஸ்கிரீனிங் ஆன்டிபாடி சேவை செயல்முறை

விலங்கு நோய்த்தடுப்பு

நோயெதிர்ப்புத் தூண்டுதலுக்காக சோதனை விலங்குகளுக்கு (எலிகள், முயல்கள் போன்றவை) பொருத்தமான ஆன்டிஜெனைத் தேர்ந்தெடுக்கவும், இதனால் அவை ஆன்டிஜெனுக்கு எதிராக குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்க முடியும்.

விலங்கு நோய்த்தடுப்பு என்பது ஆன்டிபாடி உருவாக்கத்தின் ஆரம்ப கட்டமாகும். விலங்கு நோய்த்தடுப்பு என்பது உயிரினத்தின் நகைச்சுவை நோயெதிர்ப்பு மறுமொழி பொறிமுறையைப் பயன்படுத்துவதாகும், ஆன்டிஜென்களின் தொடர்ச்சியான தூண்டுதலின் மூலம், விலங்குகள் ஒரு வலுவான நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியை உருவாக்குகின்றன, பின்னர் குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்களுக்கு எதிராக குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளை சுரக்கின்றன.

B செல்களை சேகரித்தல் மற்றும் செறிவூட்டுதல்

நோய் எதிர்ப்பு சக்தி கொண்ட விலங்குகளின் புற இரத்தம், மண்ணீரல் அல்லது நிணநீர் முனையங்களிலிருந்து B செல்கள் தனிமைப்படுத்தப்பட்டன. இந்த B செல்கள் குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்களுக்கு எதிராக ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்க நோயெதிர்ப்பு ரீதியாக தூண்டப்பட்டுள்ளன.

இயற்பியல் அல்லது வேதியியல் முறைகள் மூலம் (அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கு, காந்த மணி பிரிப்பு போன்றவை) B செல்களை செறிவூட்டுதல், அசுத்த செல்களை அகற்றுதல், B செல்களின் தூய்மையை மேம்படுத்துதல் மற்றும் அடுத்தடுத்த பிரிப்பின் செயல்திறனை மேம்படுத்துதல்.

படம்.1 முயல் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடியின் குளோனிங் மற்றும் தயாரிப்பு. குறிப்பு மூலம்:முயல் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளின் ஒற்றை B செல் குளோனிங் மற்றும் உற்பத்தி.)

B செல் வரிசைப்படுத்தல்

ஃப்ளோரசன்ஸ்-ஆக்டிவேட்டட் செல் வரிசைப்படுத்தல் (FACS), காந்த செல் பிரிப்பு (MACS), மைக்ரோஃப்ளூயடிக் செல் வரிசைப்படுத்தி (MCS) அல்லது பிற உயர்-செயல்திறன் ஸ்கிரீனிங் நுட்பங்கள், ஆன்டிஜென்-குறிப்பிட்ட லேபிளிங்குடன் இணைந்து, செறிவூட்டப்பட்ட B செல்களிலிருந்து தனிப்பட்ட B செல்களைத் திரையிட்டு இலக்கு வைக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளை உருவாக்கப் பயன்படுத்தலாம்.

ஒரு கலப்பு B செல் மக்கள்தொகையிலிருந்து ஒரு ஒற்றை B செல் தனிமைப்படுத்தப்படும்போது, அதன் ஆன்டிபாடி மரபணுக்களை ஒற்றை செல் வரிசைமுறை தொழில்நுட்பத்தால் வரிசைப்படுத்தி, கனமான சங்கிலி மாறி பகுதி (VH) மற்றும் ஒளி சங்கிலி மாறி பகுதி (VL) ஆகியவற்றின் DNA வரிசைத் தகவலைப் பெற பகுப்பாய்வு செய்ய வேண்டும். ஒற்றை செல் வரிசைமுறை தொழில்நுட்பத்தில் முக்கியமாக மூன்று படிகள் உள்ளன: ஒற்றை செல் தனிமைப்படுத்தல், உள்செல்லுலார் நியூக்ளிக் அமில பெருக்கம் மற்றும் வரிசைமுறை பகுப்பாய்வு. உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறைக்கு அதிக கவரேஜுடன் முழுமையான மரபணு அல்லது டிரான்ஸ்கிரிப்டோமைப் பெற, தனிமைப்படுத்தப்பட்ட ஒற்றை செல்களின் முழு மரபணு DNA அல்லது RNA ஐ பெருக்குவதே ஒற்றை செல் வரிசைமுறையின் கொள்கையாகும்.

உயர்-செயல்திறன் திரையிடல் மூலம், ஆயிரக்கணக்கான B செல்களின் ஆன்டிபாடி மரபணு வரிசைகளை ஒரே நேரத்தில் பெற முடியும், இது ஆன்டிபாடி கண்டுபிடிப்பின் வேகத்தை பெரிதும் துரிதப்படுத்துகிறது. இந்த வரிசைத் தகவல்களை ஆன்டிபாடி நூலக கட்டுமானம் மற்றும் திரையிடலுக்கு மேலும் பயன்படுத்தலாம்.

படம்.2 ஒற்றை B செல் பிடிப்பு, நூலக கட்டுமானம், உயர்-செயல்திறன் திரையிடல் மற்றும் வரிசைமுறை ஆகியவற்றின் திட்ட வரைபடம்.(குறிப்பு மூலம்: பாரிய இணையான ஒற்றை-செல் பி-செல் ஏற்பி வரிசைமுறை மாறுபட்ட ஆன்டிஜென்-எதிர்வினை ஆன்டிபாடிகளை விரைவாகக் கண்டறிய உதவுகிறது..)

ஆன்டிபாடி மரபணு பெருக்கம்

ஒரு ஒற்றை B செல் பிளவுபட்டு mRNA ஐ வெளியிடப்படுகிறது. பின்னர், கனமான சங்கிலி மாறி பகுதி (VH) மற்றும் ஒளி சங்கிலி மாறி பகுதி (VL) ஆகியவற்றின் cDNA வரிசைகள் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்-பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (RT-PCR) மூலம் பெருக்கப்பட்டன.

ஆன்டிபாடி வெளிப்பாடு மற்றும் சுத்திகரிப்பு

மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடி வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட்டைக் கட்டமைக்க, பெருக்கப்பட்ட மாறி மண்டல மரபணு, நிலையான மண்டல மரபணுவுடன் திசையன் பிளாஸ்மிட்டில் செருகப்பட்டது. பின்னர், பொருத்தமான வெளிப்பாடு அமைப்பு (CHO செல்கள் போன்ற யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு அமைப்பு அல்லது எஸ்கெரிச்சியா கோலி போன்ற புரோகாரியோடிக் வெளிப்பாடு அமைப்பு) வெளிப்பாட்டிற்குத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு, உயிரியல் செயல்பாடுகளுடன் கூடிய மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடி பெறப்படுகிறது. செல் கலாச்சாரத்திலிருந்து வெளிப்படுத்தப்பட்ட ஆன்டிபாடிகளைப் பிரித்தெடுத்து சுத்திகரிக்கவும், உயர்தர மறுசீரமைப்பு மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பெறவும் புரதம் A அஃபினிட்டி குரோமடோகிராபி பயன்படுத்தப்பட்டது.

ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்பு

ஆன்டிபாடி செயல்திறன் எதிர்பார்ப்புகளை பூர்த்தி செய்வதை உறுதி செய்வதற்காக, ELISA, வெஸ்டர்ன் ப்ளாட், ஃப்ளோ அனாலிசிஸ் மற்றும் இம்யூனோகோப்ரெசிபிட்டேஷன் மூலம் தனித்தன்மை, தொடர்பு மற்றும் உயிரியல் செயல்பாட்டின் ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்பு. ஆன்டிபாடிகளின் தரம் மற்றும் நம்பகத்தன்மையை உறுதி செய்வதில் ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்பு ஒரு முக்கிய படியாகும்.

நோயெதிர்ப்புத் தேவைகள்

(1) மறுசீரமைப்பு புரதம்: ≥2.5 மி.கி, புரதத் தூய்மை >85%, புரத மூலக்கூறு எடை 10 kDa க்கும் அதிகமாக, கரையக்கூடிய புரதச் செறிவு 0.5 முதல் 5 மி.கி/மி.லி. வரை. ஆன்டிஜென் அஃபினிட்டி சுத்திகரிப்பு தேவைப்பட்டால், கூடுதலாக 10 மி.கி மறுசீரமைப்பு புரதம் தேவைப்படுகிறது.

(2) பாலிபெப்டைடுகள் மற்றும் சிறிய மூலக்கூறுகள்: வெற்று பெப்டைடு ≥10 மி.கி, பெப்டைடு தூய்மை >90%, 10 AA க்கும் குறையாதது, KLH/BSA/OVA அல்லது பிற கேரியர் புரதங்களை இணைத்தல்; சிறிய மூலக்கூறுகளுக்கு முன்கூட்டியே கட்டமைப்பு மதிப்பீடு தேவைப்படுகிறது.

ஒற்றை B செல் வரிசைப்படுத்தும் சேவை பணிப்பாய்வு

படிகள்	சேவை உள்ளடக்கம்	காலவரிசை
படி 1: விலங்கு நோய்த்தடுப்பு மற்றும் ELISA கண்டறிதல்	(1) விலங்குகளுக்கு 4-5 முறை நோய்த்தடுப்பு ஊசி போடப்பட்டது, 4வது டோஸிலிருந்து தொடங்கி, ஆன்டிபாடி டைட்டரை ELISA கண்டறிவதற்காக சீரம் சேகரிக்கப்பட்டது (புரத ஆன்டிஜென் ELISA சீரம் டைட்டர் >10^5; பெப்டைட் ஆன்டிஜென் ELISA சீரம் டைட்டர் >10^4). அதே நேரத்தில், 0.1 மில்லி தடுப்பூசிக்கு முந்தைய மற்றும் தடுப்பூசிக்குப் பிந்தைய சீரம் வாடிக்கையாளர்களுக்கு சோதனைக்காக அனுப்பப்படுகிறது; டைட்டர் தகுதி பெறவில்லை என்றால், தடுப்பூசி தொடரும் அல்லது வாடிக்கையாளர் திட்டத்தை முடிக்கக் கோருவார், மேலும் தடுப்பூசி பகுதிக்கு மட்டுமே கட்டணம் வசூலிக்கப்படும்; (2) டைட்டர் தகுதி பெற்றிருந்தால், PBMC செல்கள் முழு இரத்தத்திலிருந்தும் தனிமைப்படுத்தப்பட்டன.	10-12 வாரங்கள்
படி 2: ஒற்றை B செல் வரிசைப்படுத்தல்	(1) மண்ணீரல் சேகரிக்கப்பட்டது, ஒற்றை B செல் இடைநீக்கம் தயாரிக்கப்பட்டது, புற இரத்தம் சேகரிக்கப்பட்டது, மற்றும் PBMC செல்கள் தனிமைப்படுத்தப்பட்டன. (2) இம்யூனோஆன்டிஜென் குறிப்பான்கள் FITC மற்றும் AF648. (3) இரட்டை ஒளிரும் ஓட்ட வரிசைப்படுத்தல் + ஒற்றை பி செல் குளோன் கலாச்சாரம். (4)ELISA அடையாளம் + நேர்மறை குளோன்களின் வரிசைமுறை.	2-3 வாரங்கள்
படி 3: ஆன்டிபாடி வெளிப்பாடு மற்றும் சரிபார்ப்பு	(1) 6-10 வரிசை மரபணு தொகுப்பு + பாலூட்டி வெளிப்பாடு சோதனை சரிபார்ப்பு. (2) ELISA அடையாளம்.	3-4 வாரங்கள்
படி 4: டெலிவரி	(1) ஆன்டிபாடி வரிசைகள்: 4-6 ஆன்டிபாடி வரிசைகள் (வெளிப்படுத்தப்படாத வரிசைகள் ஒன்றாக வழங்கப்படுகின்றன). (2) ஒவ்வொரு வெளிப்படுத்தப்பட்ட வரிசையும் 0.2 மி.கி ஆன்டிபாடியை வழங்கியது. (3) பரிசோதனை அறிக்கை.	1 வாரம்