ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு காட்சி நூலக திரையிடல் சேவை

எங்களுடைய ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே லைப்ரரிகள் பெரிய கொள்ளளவையும் உயர் பன்முகத்தன்மையையும் கொண்டுள்ளன, இவை குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடி வரிசைகளைத் திறம்படச் சோதிப்பதற்கு ஒரு வலுவான அடித்தளத்தை வழங்குகின்றன.

எங்களைத் தொடர்பு கொள்ளுங்கள்

ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு காட்சி நூலக திரையிடல் சேவை

ஆல்ஃபா லைஃப்டெக், ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே லைப்ரரி கட்டுமானம் மற்றும் ஆன்டிபாடி லைப்ரரிகளை ஸ்கிரீனிங் செய்வதில் நிபுணத்துவம் பெற்றுள்ளது. உலகெங்கிலும் உள்ள வாடிக்கையாளர்களுக்காக, பல்வேறு வகையான ஈஸ்ட் லைப்ரரிகளை உருவாக்கி, அதிக ஈர்ப்புத்திறன் மற்றும் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய அவற்றை ஸ்கிரீன் செய்யும் திறனை இது வழங்குகிறது. நிபுணத்துவம் வாய்ந்த ஆராய்ச்சியாளர்கள் குழு, மேம்பட்ட தொழில்நுட்பம் மற்றும் உபகரணங்களைக் கொண்டு, நோய் தொடர்பான பலதரப்பட்ட புரதங்களை இலக்காகக் கொண்ட ஈஸ்ட் லைப்ரரிகளை எங்களால் உருவாக்க முடியும். புரத ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே, சிறிய மூலக்கூறு ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே, ஆன்டிபாடி ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே போன்ற ஃபேஜ் டிஸ்ப்ளே மற்றும் ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே தொழில்நுட்பங்களை எங்களால் வழங்க முடியும்.

எங்களின் ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே லைப்ரரிகள் பெரிய கொள்ளளவையும் உயர் பன்முகத்தன்மையையும் கொண்டுள்ளன, இது குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடி வரிசைகளைத் திறம்படச் சோதிப்பதற்கு ஒரு வலுவான அடித்தளத்தை வழங்குகிறது. உங்கள் தேவைகளுக்கு ஏற்ப, நாங்கள் பல்வேறு வகையான ஆன்டிபாடி ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே லைப்ரரிகள் (IgG, scFv, VHH, Fab ஆன்டிபாடி லைப்ரரிகள்), புரத லைப்ரரிகள், பெப்டைட் லைப்ரரிகள், cDNA லைப்ரரிகள் போன்றவற்றை உருவாக்க முடியும். மேலும், இம்யூன் லைப்ரரிகள், நேச்சுரல் லைப்ரரிகள், சிந்தடிக் லைப்ரரிகள், செமி-சிந்தடிக் லைப்ரரிகள் மற்றும் டிசீஸ் ஆன்டிபாடி லைப்ரரிகள் உள்ளிட்ட பல்வேறு பண்புகளைக் கொண்ட ஆன்டிபாடி லைப்ரரிகளையும் எங்களால் உருவாக்க முடியும்.

ஈஸ்ட் காட்சி அமைப்புக்கான அறிமுகம்

ஈஸ்ட் மேற்பரப்புக் காட்சித் தொழில்நுட்பம் என்பது, மரபணு இணைவு மூலம் ஈஸ்டின் மேற்பரப்பில் மறுசேர்க்கைப் புரதங்களைக் காட்சிப்படுத்தும் ஒரு முறையாகும். மிகவும் பொதுவான ஈஸ்ட் காட்சி அமைப்பானது, ஆல்ஃபா லெக்டின் இனச்சேர்க்கைப் புரதத்தின் Aga2p துணை அலகின் C-முனையத்துடன் இணைக்கப்பட்ட இலக்குப் புரதத்தைப் பயன்படுத்துகிறது. இது முக்கியமாக இலக்குப் புரதத்தின் இருபுறமும் உள்ள எபிடோப் குறிப்பான்களைக் கொண்டுள்ளது: N-முனையத்தில் உள்ள 9-அமினோ அமில ஹெமாக்ளுட்டினின் (HA) குறிப்பான் மற்றும் C-முனையத்தில் உள்ள 10 அமினோ அமில c-myc குறிப்பான். 69 அமினோ அமிலங்களைக் கொண்ட Aga2p துணை அலகானது, 725 அமினோ அமிலங்களைக் கொண்ட ஆல்ஃபா லெக்டின் Aga1p துணை அலகுடன் இரண்டு டைசல்பைடு பிணைப்புகள் வழியாக இணைகிறது, மேலும் Aga1p ஆனது ஒரு β 1,6-குளுக்கான் சகப் பிணைப்பு வழியாக செல் சுவரில் நிலைநிறுத்தப்படுகிறது. எனவே, இலக்குப் புரதமானது ஈஸ்ட் செல்களின் மேற்பரப்பில் காட்சிப்படுத்தப்பட்டு, பின்னர் அதனுடன் தொடர்புடைய லிகண்டால் அடையாளம் காணப்படுகிறது. ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி திரையிடல் மூலம் நூலகங்களிலிருந்து செயல்பாட்டுப் புரதங்களைப் பிரித்தெடுக்கலாம்.

படம் 1: ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு வெளிப்பாட்டின் கொள்கை. (பட ஆதாரம்:) புரதப் பொறியியலுக்கான ஈஸ்ட் மேற்பரப்புக் காட்சிப்படுத்தலின் பயன்பாடுகள்.)

ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு காட்சி நூலகத்திற்கான அறிமுகம்

ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே வரிசைப்படுத்தல் என்பது ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு டிஸ்ப்ளேவை அடிப்படையாகக் கொண்டது, இது முக்கியமாக செல் மேற்பரப்பு புரதங்களை இலக்காகக் கொண்ட ஆன்டிபாடி நூலகங்களைச் சோதிக்கப் பயன்படுகிறது. ஈஸ்ட் செல்களுக்கும் மற்ற செல் மேற்பரப்புகளுக்கும் இடையே குறிப்பிட்ட பிணைப்பு அல்லாத பிணைப்பு குறைவாக இருப்பதால், ஈஸ்ட் உயிரியல் தேர்வு முறையானது பெரிய பிணைப்பு நூலகங்களைச் சோதித்து அரிதான குளோன்களைக் கண்டறிய உதவுகிறது.

ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு காட்சி நூலக திரையிடல் சேவை

பிளாஸ்மிடுகளைத் தயாரித்து ஈஸ்ட் செல்களை வளர்க்கவும், இலக்குப் புரதத்தைக் குறியிடும் டி.என்.ஏ-வை ஒருங்கிணைத்து, தூண்டக்கூடிய ஊக்குவிப்பிகள், சமிக்ஞை பெப்டைடுகள் மற்றும் மேற்பரப்புக் காட்சிப் புரதங்களுடன் (Aga2p போன்றவை) இணைக்கப்பட்ட இலக்கு மரபணுக்களைக் கொண்ட ஒரு ஈஸ்ட் வெளிப்பாட்டு வெக்டரில் அதனை நகலெடுக்கவும். இலக்குப் புரதத்தைக் குறியிடும் மரபணுவை, ஈஸ்ட் செல் சுவர் புரதத்தைக் (பொதுவாக Aga2p) குறியிடும் மரபணுவுடன் இணைக்கலாம், மேலும் இணைக்கப்பட்ட மரபணுவை எலக்ட்ரோபோரேஷன் மூலம் ஈஸ்ட் செல்களுக்குள் உருமாற்றலாம். உருமாற்றத்திற்குப் பிறகு, தங்கள் மேற்பரப்பில் ஆன்டிபாடி மரபணுக்களை வெளிப்படுத்தும் ஈஸ்ட் செல்கள் ஆன்டிஜன்-குறிப்பிட்ட திரையிடல் சோதனைகளுக்கு உட்படுத்தப்படலாம்: ஈஸ்ட் லைப்ரரி இலக்கு ஆன்டிஜனுடன் அடைகாக்கப்பட்டு, அதனுடன் குறிப்பாகப் பிணைக்கும் ஈஸ்ட் செல்கள் தேர்ந்தெடுக்கப்படுகின்றன. விரும்பிய பண்புகளுடன் கூடிய புரதங்களைக் காட்டும் ஈஸ்ட் செல்களைப் பிரித்தெடுக்க ஃப்ளோரசன்ஸ் ஆக்டிவேட்டட் செல் சார்ட்டிங் (FACS) முறையைப் பயன்படுத்தி, அதிகபட்சமாக ~10^8-10^9 ஈஸ்ட் செல்கள் கொண்ட லைப்ரரி அளவில் ஈஸ்ட் காட்சி லைப்ரரி திரையிடலைச் செய்ய முடியும். நேர்மறையான குளோன்களை மேலதிக பகுப்பாய்வு அல்லது பின்தொடர் பயன்பாடுகளுக்காகப் பிரித்தெடுக்கலாம். ஆன்டிபாடி நூலகத்திலிருந்து குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடி குளோன்கள் அடையாளம் காணப்பட்டவுடன், ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே ஸ்கிரீனிங் மற்றும் ஆன்டிபாடி உற்பத்தியின் முழு செயல்முறையையும் நிறைவு செய்வதற்காக, புரோட்டீன் A/G அஃபினிட்டி குரோமட்டோகிராஃபி போன்ற நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தி அவற்றை மேலும் பண்புப்படுத்தி, பெருமளவில் உற்பத்தி செய்து, தூய்மைப்படுத்தலாம்.

ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே லைப்ரரி ஸ்கிரீனிங் செயல்முறை

படம் 2. ஈஸ்ட் காட்சி நூலகத் திரையிடல் செயல்முறை

ஈஸ்ட் டிஸ்ப்ளே லைப்ரரி ஸ்கிரீனிங் சேவை பணிப்பாய்வு

படிகள்	சேவை உள்ளடக்கம்	காலவரிசை
ஆன்டிஜென் தயாரிப்பு	ஆன்டிஜென் வகை: வாடிக்கையாளர் ஆன்டிஜென்களை வழங்க முடிந்தால், அதற்கேற்ற மாதிரிகள் வகைக்கேற்ப வழங்கப்பட வேண்டும்: மறுசேர்க்கைப் புரதங்களுக்கு 3-3.5 மி.கி அளவும், 85%-க்கும் அதிகமான தூய்மைத் தேவையும், சிறிய மூலக்கூறுகளுக்கு 90%-க்கும் அதிகமான தூய்மைத் தேவையுடன் இணைக்கப்பட்ட மூலக்கூறுகளும், பெப்டைட் தொகுப்பிற்கு 90%-க்கும் அதிகமான தூய்மைத் தேவையுடன் இணைக்கப்பட்ட மூலக்கூறுகளும், வைரஸ்கள் போன்ற மாதிரி வகைகளுக்குச் செயலிழக்கச் செய்யப்பட்ட மாதிரிகளும், சிதைவைத் தடுக்க ஆர்.என்.ஏ-விற்குப் பரிசோதனையும் செய்யப்பட வேண்டும். மேலும், மேற்கூறிய ஆன்டிஜென் வகைகளைத் தொகுப்பிற்காகத் தனிப்பயனாக்கவும் முடியும்.	2-3 வாரங்கள்
விலங்கு நோய் எதிர்ப்பு சக்தி	விலங்குகளுக்கான நோய்த்தடுப்பு ஊசிகளின் எண்ணிக்கை 5 ஆகும், மேலும் சீரம் டைட்டர் பரிசோதனையின் அடிப்படையில் நோய்த்தடுப்பு ஊசிகளின் எண்ணிக்கையை அதிகரிக்க வேண்டுமா என்பதைத் தீர்மானிக்க வேண்டும். ஆன்டிஜென் நோயெதிர்ப்பு சக்தி: புரதம்/வைரஸ் ஆன்டிஜென் வீரியம் >10⁵; பெப்டைட்/சிறிய மூலக்கூறு ஆன்டிஜென் வீரியம் >10⁴.	5-6 வாரங்கள்
வார்ப்புரு cDNA தயாரிப்பு	பிளாஸ்மா PBMC-களைப் பிரித்து, மொத்த RNA-வைப் பிரித்தெடுத்து (RNA பிரித்தெடுக்கும் கருவி), அதை cDNA-வாக மாற்றவும்.	1 நாள்
நூலக கட்டுமானம்	நூலக cDNA-ஐ ஒரு வார்ப்புருவாகப் பயன்படுத்தி, VHH மரபணு இரண்டு சுற்று PCR மூலம் பெருக்கப்பட்டு, VHH மரபணு பிணைப்பு ஈஸ்ட் காட்சி வெக்டர் உருவாக்கப்பட்டது. ஒரு ஆன்டிபாடி நூலகத்தை உருவாக்குவதற்காக, அந்த வெக்டர் எலக்ட்ரோபோரேஷன் மூலம் ஈஸ்ட் செல்களுக்குள் மாற்றப்பட்டது. தோராயமாக 48 குளோன்களைத் தேர்ந்தெடுத்து, PCR முறையைப் பயன்படுத்தி நேர்மறை விகிதத்தை (>90%) கண்டறியவும்; நூலகத் திறனை (10^7-10^8) கணக்கிட்டு, சரியான நூலகச் செருகல் விகிதம் (>90%) மற்றும் நூலகப் பன்முகத்தன்மையைத் தீர்மானிக்க NGS வரிசைப்படுத்தல் செய்யப்பட்டது.	2 வாரங்கள்
நூலகத் திரையிடல்	இயல்புநிலை மூன்று சுற்றுப் பரிசோதனைகள்: முதல் சுற்றில், ஒளிர்வு குறியிடப்பட்ட புரத FACS பரிசோதனையும், அதைத் தொடர்ந்து மூன்றாவது சுற்றில் NGS வரிசைப்படுத்தலும் மேற்கொள்ளப்பட்டன. நேர்மறையான குளோன்கள், ஒற்றை கிராம் தூண்டல் வெளிப்பாடு மற்றும் ELISA கண்டறிதலுக்காகத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன. நேர்மறையான அனைத்து குளோன்களும் மரபணு வரிசைப்படுத்தலுக்காகத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு, வெவ்வேறு CDR பகுதி வரிசைகளும் தேர்வு செய்யப்பட்டன.	2-3 வாரங்கள்
ஆன்டிபாடி சரிபார்ப்பு	ஆன்டிபாடி வரிசைகளுக்கான பொருத்தமான வெளிப்பாட்டு வெக்டர்களை உருவாக்குவது, ஆன்டிபாடி வெளிப்பாடு, ஆன்டிபாடி சுத்திகரிப்பு, ஆன்டிபாடி ஈர்ப்பைச் சரிபார்க்க ELISA மற்றும் BLI மூலம் ஆன்டிபாடி ஆன்டிஜென் பிணைப்பைச் சரிபார்த்தல், மற்றும் செல் செயல்பாட்டைச் சரிபார்க்க ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி தடுப்பு ஆகியவற்றை எளிதாக்க உதவும்.	1 வாரம்

ஈஸ்ட் மேற்பரப்பு காட்சி நூலக திரையிடல் வழக்கு

வடிவமைப்புத் தேர்வுக்குரிய நானோபாடிகளை விரைவாகக் கண்டறிவதற்கான ஈஸ்ட் மேற்பரப்புக் காட்சித் தளத்தின் ஆய்வுகளில், ஆசிரியர்கள் ஈஸ்ட் மேற்பரப்புக் காட்சியை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு முழுமையான இன் விட்ரோ நானோபாடி கண்டறிதல் தளத்தை நிறுவியுள்ளனர். முதலில், ஒட்டக மரபணுக்களிலிருந்து தொடங்கி ஒரு செயற்கை நானோபாடி நூலகம் வடிவமைக்கப்பட்டது. படம் D, நானோபாடியின் கார்பாக்சில் முனையில் ஒரு HA குறிச்சொல் இருப்பதையும், பின்னர் அந்த நானோபாடி ஈஸ்ட் செல் சுவரில் சகப்பிணைப்பு மூலம் நிலைநிறுத்தப்படுவதையும் காட்டுகிறது. படம் E, நானோபாடி திரையிடல் செயல்முறையைக் காட்டுகிறது. ஆன்டிஜென் ஈர்ப்பு நானோபாடிகளைக் கொண்ட ஈஸ்ட் தனிமைப்படுத்தப்பட்டு, பெருக்கப்பட்டு, FACS மூலம் ஆன்டிபாடிகளுக்காக மீண்டும் மீண்டும் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது. இந்தத் தளத்தின் மூலம், இரண்டு வெவ்வேறு மனித GPCR-களை இலக்காகக் கொண்ட வடிவமைப்புத் தேர்வுக்குரிய நானோபாடிகளை ஆசிரியர்கள் கண்டறிந்தனர்.