Муҳандисии антитело чист?

Бо ёрии муҳандисии антитело, тағир додани андозаи молекулавӣ, фармакокинетика, иммуногенӣ, наздикии пайвастшавӣ, хосият ва вазифаи эффектории антитело имконпазир гардид. Пас аз синтези антителоҳо, пайвастшавии хоси антителоҳо онҳоро дар ташхиси клиникӣ ва табобат хеле арзишманд мегардонад. Тавассути муҳандисии антителоҳо, онҳо метавонанд ниёзҳои рушди барвақти доруворӣ ва ташхисиро қонеъ гардонанд.

Ҳадафи муҳандисии антитело тарҳрезӣ ва истеҳсоли функсияҳои хеле мушаххас ва устувор мебошад, ки антителоҳои табиӣ наметавонанд ба онҳо ноил шаванд ва заминаеро барои истеҳсоли антителоҳои терапевтӣ гузоранд.

Alpha Lifetech, бо таҷрибаи васеи лоиҳавии худ дар муҳандисии антитело, метавонад хидматҳои фармоишии антителоҳои моноклоналӣ ва поликлоналиро барои намудҳои гуногун, инчунин хидматҳои сохтани китобхонаи антителоҳои намоиши фаг ва скрининг пешниҳод кунад. Alpha Lifetech метавонад ба мизоҷон антителоҳои биосимилярӣ ва маҳсулоти сафедаи рекомбинантии босифат, инчунин хидматҳои мувофиқро барои истеҳсоли антителоҳои самаранок, хеле мушаххас ва устувор пешниҳод кунад. Бо истифода аз платформаҳои ҳамаҷонибаи антитело, сафеда ва системаҳои намоиши фаг, мо хидматҳоеро пешниҳод менамоем, ки боло ва поёни истеҳсоли антителоҳоро фаро мегиранд, аз ҷумла хидматҳои техникӣ ба монанди инсонкунонии антитело, тозакунии антитело, пайдарпайии антитело ва тасдиқи антитело.

Марҳилаи пешрави муҳандисии антитело бо ду технология алоқаманд аст:

- Технологияи рекомбинантии ДНК

--Технологияи гибридома

Рушди босуръати муҳандисии антитело бо се технологияи муҳим алоқаманд аст:

Технологияи клонкунии генҳо ва реаксияи занҷирии полимераза

--Ифодаи сафеда: Сафедаҳои рекомбинантӣ аз ҷониби системаҳои ифода ба монанди хамиртуруш, вирусҳои чӯбшакл ва растаниҳо истеҳсол мешаванд.

--Тарроҳии сохторӣ бо ёрии компютер

Насли аввали антителоҳо барои истеҳсоли антителоҳои химерӣ инсонӣ карда шуданд, ки дар он минтақаи тағйирёбандаи антителоҳои моноклоналии муш бо минтақаи доимии молекулаҳои IgG-и инсон пайваст карда шуд. Минтақаи пайвастшавии антиген (CDR)-и антителои моноклоналии муш насли дуюм ба IgG-и инсон интиқол дода шуд. Ба истиснои минтақаи CDR, ҳамаи антителоҳои дигар қариб антителоҳои инсонӣ мебошанд ва кӯшишҳо барои пешгирӣ аз вокунишҳои антителоҳои зидди мушҳои инсонӣ (HAMA) ҳангоми истифодаи антителоҳои клони муш барои табобати инсонӣ анҷом дода шуданд.

 

Барои сохтани китобхонаи намоиши фагҳо, қадами аввал ба даст овардани генҳое мебошад, ки антителоҳоро рамзгузорӣ мекунанд, ки онҳоро аз ҳуҷайраҳои В-и ҳайвоноти эмгузаронидашуда ҷудо кардан мумкин аст (сохтори китобхонаи иммунӣ), мустақиман аз ҳайвоноти эмгузарониданашуда истихроҷ кардан мумкин аст (сохтори китобхонаи табиӣ) ё ҳатто бо пораҳои гени антитело дар in vitro ҷамъ кардан мумкин аст (сохтори китобхонаи синтетикӣ). Сипас, генҳо тавассути PCR тақвият дода мешаванд, ба плазмидҳо ворид карда мешаванд ва дар системаҳои мувофиқи мизбон (ифодаи хамиртуруш (одатан Pichia pastoris), ифодаи прокариотӣ (одатан E. coli), ифодаи ҳуҷайраҳои ширхӯрон, ифодаи ҳуҷайраҳои растанӣ ва ифодаи ҳуҷайраҳои ҳашарот, ки бо вирусҳои чӯбшакл сироят ёфтаанд) ифода карда мешаванд. Маъмултарин системаи ифодаи E. coli мебошад, ки пайдарпайии мушаххаси антителоҳои рамзгузориро ба фаг муттаҳид мекунад ва яке аз сафедаҳои пӯсти фагро (pIII ё pVIII) рамзгузорӣ мекунад. Омезиши генҳои , Ва дар сатҳи бактериофагҳо намоиш дода мешавад. Асоси ин технология сохтани китобхонаи намоиши фагҳо мебошад, ки нисбат ба китобхонаҳои табиӣ бартарӣ дорад, зеро он метавонад пайванди мушаххас дошта бошад. Баъдан, антителоҳо бо хосияти антиген тавассути раванди интихоби биологӣ скрининг карда мешаванд, антигенҳои мақсаднок фиксатсия карда мешаванд, фагҳои пайвастнашуда такроран шуста мешаванд ва фагҳои пайвастшуда барои ғанӣ гардонидани минбаъда шуста мешаванд. Пас аз се ё зиёда даври такрор, антителоҳои хосияти баланд ва аффинии баланд ҷудо карда мешаванд.

Расми 3: Сохтмон ва скрининги китобхонаи антителоҳо

Технологияи ДНК-и рекомбинантӣ метавонад барои тавлиди пораҳои антитело истифода шавад. Антителоҳои Fab дар аввал танҳо аз ҷониби протеазаи меъда гидролиз карда мешаванд, то пораҳои (Fab') 2-ро ба вуҷуд оранд, ки сипас аз ҷониби папаин ҳазм карда мешаванд, то пораҳои алоҳидаи Fab ба вуҷуд оянд. Фрагменти Fv аз VH ва VL иборат аст, ки аз сабаби набудани пайвандҳои дисульфидӣ устувории заиф доранд. Аз ин рӯ, VH ва VL тавассути пептиди кӯтоҳи 15-20 аминокислота ба ҳам пайваст мешаванд, то антителои як занҷири порчаи тағйирёбанда (scFv)-ро бо вазни молекулавии тақрибан 25KDa ташкил диҳанд.

Таҳқиқоти сохтори антитело дар Camelidae (Camel, LIama ва Alpaca) нишон дод, ки антителоҳо танҳо занҷирҳои вазнин доранд ва занҷирҳои сабук надоранд, аз ин рӯ, онҳоро антителоҳои занҷири вазнин (hcAb) меноманд. Домени тағйирёбандаи антителоҳои занҷири вазнин антителоҳои домени якка ё наноҷисмҳо ё VHH номида мешавад, ки андозаи онҳо 12-15 кДа аст. Ҳамчун мономерҳо, онҳо пайвандҳои дисульфидӣ надоранд ва хеле устувор буда, ба антигенҳо майли хеле баланд доранд.

Расми 5: Антителои занҷири вазнин ва VHH/Нанободи

Ифодаи озоди ҳуҷайра барои ноил шудан ба синтези сафедаҳои in vitro аз ифодаи ДНК-и табиӣ ё синтетикӣ истифода мебарад, ки одатан системаи ифодаи E. coli-ро истифода мебарад. Он сафедаҳоро зуд истеҳсол мекунад ва ҳангоми истеҳсоли миқдори зиёди сафедаҳои рекомбинантӣ in vivo аз бори метаболикӣ ва ситотоксикӣ ба ҳуҷайраҳо канорагирӣ мекунад. Он инчунин метавонад сафедаҳоеро истеҳсол кунад, ки синтезашон душвор аст, ба монанди онҳое, ки пас аз тарҷума ё синтези сафедаҳои мембранӣ тағир доданашон душвор аст.