Муҳандисии антитело чист?

Бо ёрии муҳандисии антитело андозаи молекулавӣ, фармакокинетика, иммуногенӣ, наздикии ҳатмӣ, хосият ва функсияи эффектории антителоҳоро тағир додан мумкин аст. Пас аз синтез кардани антителоҳо, пайвастагии мушаххаси антителоҳо онҳоро дар ташхис ва табобати клиникӣ хеле арзишманд мегардонад. Тавассути муҳандисии антитело онҳо метавонанд эҳтиёҷоти рушди барвақти маводи мухаддир ва ташхисро қонеъ кунанд.

Мақсади муҳандисии антитело тарҳрезӣ ва тавлид кардани функсияҳои хеле мушаххас ва устувор, ки антителоҳои табиӣ наметавонанд ба он ноил шаванд ва барои тавлиди антителоҳои терапевтӣ замина гузоштанд.

Alpha Lifetech, бо таҷрибаи ғании лоиҳаи худ дар муҳандисии антитело, метавонад хидматҳои фармоишии антителоҳои моноклоналӣ ва поликлоналӣ барои намудҳои гуногун ва инчунин хидматҳои сохтани китобхонаи антителоҳои фагро пешниҳод кунад. Alpha Lifetech метавонад ба мизоҷон антителоҳои босифати биосимилярӣ ва маҳсулоти сафедаи рекомбинантӣ, инчунин хидматҳои мувофиқро барои истеҳсоли антителоҳои муассир, хеле мушаххас ва устувор таъмин намояд. Бо истифода аз ҳамаҷонибаи антитело, платформаҳои сафеда ва системаҳои намоиши фагҳо, мо хидматҳои фарогирандаи боло ва поёни истеҳсоли антитело, аз ҷумла хидматҳои техникӣ ба монанди гуманизатсияи антитело, тозакунии антитело, пайдарпайии антитело ва тасдиқи антитело пешниҳод менамоем.

Марҳилаи пешқадами муҳандисии антитело бо ду технология алоқаманд аст:

--Технологияи рекомбинатии ДНК

--Технологияи гибридома

Рушди босуръати муҳандисии антитело бо се технологияи муҳим алоқаманд аст:

--Технологияи клонкунии ген ва реаксияи занҷири полимераз

--Ифодаи протеин: Протеинҳои рекомбинантӣ тавассути системаҳои экспрессионалӣ ба монанди хамиртуруш, вирусҳои асошакл ва растаниҳо истеҳсол карда мешаванд

--Тарҳрезии сохторӣ бо ёрии компютер

Насли якуми антителоҳо барои тавлиди антителоҳои химерӣ гуманизатсия карда шуданд, ки дар он минтақаи тағирёбандаи антителоҳои моноклоналии муш ба минтақаи доимии молекулаҳои IgG инсон пайваст карда шудааст. Минтақаи ҳатмии антиген (CDR)-и насли дуюми антиденои моноклоналии муш ба IgG инсон интиқол дода шуд. Ба истиснои минтақаи CDR, ҳама антителоҳои дигар тақрибан антителоҳои инсонӣ мебошанд ва барои пешгирӣ кардани аксуламалҳои антителоҳои зидди муш (HAMA) ҳангоми истифодаи антителоҳои клони муш барои табобати инсон кӯшишҳо анҷом дода шуданд.

 

Барои сохтани китобхонаи намоиши фагҳо, қадами аввал ин ба даст овардани генҳои рамзгузори антитело мебошад, ки онҳоро аз ҳуҷайраҳои В-и ҳайвоноти иммунизатсияшуда ҷудо кардан мумкин аст (сохтмони китобхонаи иммунӣ), мустақиман аз ҳайвоноти эмнашуда (сохтмони китобхонаи табиӣ) истихроҷ карда мешавад ё ҳатто дар vitro бо порчаҳои генҳои антитело (сохтмони китобхонаи синтетикӣ). Сипас, генҳо тавассути ПЗР тақвият дода, ба плазмидҳо ворид карда мешаванд ва дар системаҳои мувофиқи мизбон ифода карда мешаванд (ифодаи хамиртуруш (одатан Pichia pastoris), ифодаи прокариотӣ (одатан E. coli), ифодаи ҳуҷайраҳои ширхӯрон, ифодаи ҳуҷайраҳои растанӣ ва ифодаи ҳуҷайраҳои ҳашарот, ки бо вирусҳои асо мубтало шудаанд). Аз ҳама маъмул системаи ифодаи E. coli мебошад, ки пайдарпаии мушаххаси антителоҳои рамзгузориро ба фаг муттаҳид мекунад ва яке аз сафедаҳои қабати фагро (pIII ё pVIII) рамзгузорӣ мекунад. Омехтаи ген аз, Ва дар рӯи бактериофагҳо намоиш дода мешавад. Асоси ин технология сохтани китобхонаи намоишии фагҳо мебошад, ки бартарият аз китобхонаҳои табиӣ дар он аст, ки он метавонад ҳатмии мушаххас дошта бошад. Минбаъд, антителоҳои дорои хусусияти антиген тавассути раванди интихоби биологӣ тафтиш карда мешаванд, антигенҳои мақсаднок собит карда мешаванд, фагҳои пайвастнашуда такроран шуста мешаванд ва фагҳои пайвастшуда барои ғанисозии минбаъда шуста мешаванд. Пас аз се ё зиёда даври такрор, антителоҳои баланд ва наздикии баланд ҷудо карда мешаванд.

Расми 3: Сохтмон ва таҳқиқи китобхонаи антитело

Технологияи рекомбинантии ДНК метавонад барои тавлиди порчаҳои антитело истифода шавад. Антиденоҳои Fab дар аввал танҳо тавассути протеазаи меъда метавонанд гидролиз карда шаванд, то порчаҳои (Fab') 2 тавлид шаванд, ки баъдан аз ҷониби папаин ҳазм карда мешаванд, то порчаҳои инфиродии Fab тавлид шаванд. Порчаи Fv аз VH ва VL иборат аст, ки аз сабаби набудани пайвандҳои дисульфидӣ устувории суст доранд. Аз ин рӯ, VH ва VL тавассути пептидҳои кӯтоҳи 15-20 аминокислотаҳо бо ҳам пайваст мешаванд, то як порчаи тағирёбандаи занҷирро (scFv) бо вазни молекулавии тақрибан 25KDa ташкил кунанд.

Омӯзиши сохтори антитело дар Camelidae (Camel, LIama ва Alpaca) муайян кард, ки антителоҳо танҳо занҷирҳои вазнин доранд ва занҷирҳои сабук надоранд, аз ин рӯ онҳоро антителоҳои занҷири вазнин (hcAb) меноманд. Домени тағирёбандаи антителоҳои занҷири вазнин антителоҳои домени ягона ё нанободиҳо ё VHH номида мешаванд, ки андозаи 12-15 кДа мебошад. Ҳамчун мономерҳо, онҳо пайвандҳои дисульфидӣ надоранд ва хеле устувор буда, ба антигенҳо наздикии хеле баланд доранд.

Расми 5: Антиденои занҷири вазнин ва VHH/ Nanobody

Ифодаи озоди ҳуҷайра ифодаи ДНК-и табиӣ ё синтетикиро барои ноил шудан ба синтези сафеда дар vitro, маъмулан бо истифода аз системаи ифодаи E. coli истифода мебарад. Он сафедаҳоро зуд тавлид мекунад ва ҳангоми тавлиди миқдори зиёди сафедаҳои рекомбинантӣ дар vivo аз бори метаболикӣ ва ситотоксикии ҳуҷайраҳо канорагирӣ мекунад. Он инчунин метавонад сафедаҳое тавлид кунад, ки синтез кардан душвор аст, ба монанди онҳое, ки пас аз тарҷума тағир додан ё синтез кардани сафедаҳои мембрана душвор аст.