แพลตฟอร์มการพัฒนาแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก

บริษัท Alpha Lifetech สามารถจัดหาผลิตภัณฑ์และบริการด้านการค้นพบแอนติบอดีและโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่มีคุณภาพให้แก่ลูกค้าได้

แพลตฟอร์มการพัฒนาแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก

บริษัท Alpha Lifetech สามารถจัดหาผลิตภัณฑ์และบริการด้านการค้นพบแอนติบอดีและโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่ได้รับการรับรองคุณภาพให้แก่ลูกค้าได้ เราสามารถเตรียมแอนติบอดีที่มีประสิทธิภาพสูง มีความจำเพาะสูง และมีความเสถียรดี Alpha Lifetech มีเครื่องมือและอุปกรณ์การทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดีที่หลากหลาย ซึ่งสามารถให้บริการการทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดีจากแหล่งต่างๆ เช่น แอนติบอดีโมโนโคลนอลจากกระต่าย แกะ ไก่ และหนู รวมถึงบริการการทำให้บริสุทธิ์ด้วยวิธี Protein A/G affinity purification และบริการการแยกและทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดี โดยอาศัยการสร้างระบบแพลตฟอร์มแบบครบวงจร เช่น แพลตฟอร์มการค้นพบแอนติบอดี แพลตฟอร์มโปรตีน เป็นต้น เราครอบคลุมบริการต้นน้ำและปลายน้ำของการผลิตแอนติบอดี และสามารถให้บริการทางเทคนิคตั้งแต่การเตรียมแอนติบอดี การทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดีแบบสองเป้าหมาย การแยกและทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดี การจัดลำดับแอนติบอดี การตรวจสอบความถูกต้องของแอนติบอดี เป็นต้น ซึ่งสามารถนำไปใช้ในการบำบัดด้วยแอนติบอดีแบบสองเป้าหมายได้

แอนติบอดีโมโนโคลนอล หมายถึง อิมมูโนโกลบูลินที่ผลิตโดยเซลล์บีเพียงเซลล์เดียว ซึ่งมีความจำเพาะสูงต่อแอนติเจนหรืออีพิโทป การผลิตแอนติบอดีโมโนโคลนอลในระยะแรกนั้นใช้เทคโนโลยีไฮบริดโดมาในการผลิตแอนติบอดีจากหนู โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การรวมเซลล์ม้ามจากหนูที่ได้รับการกระตุ้นภูมิคุ้มกันเข้ากับเซลล์ไมอีโลมาจากมนุษย์หรือหนู ทำให้เกิดเซลล์ไฮบริดโดมาซึ่งสามารถหลั่งแอนติบอดีจำเพาะได้ แอนติบอดีโมโนโคลนอลจากหนูที่ผลิตได้ส่วนใหญ่ใช้ในการวิจัยสัตว์และการวินิจฉัยโรคหลังจากผ่านกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ อย่างไรก็ตาม ร่างกายมนุษย์จะสร้างภูมิคุ้มกันต่อโปรตีนแปลกปลอมจากหนู ดังนั้นจึงมีข้อจำกัดอย่างมากในการนำแอนติบอดีโมโนโคลนอลจากหนูไปใช้ในทางคลินิก ต่อมาจึงมีการใช้ "การทำให้เป็นมนุษย์" เพื่อเตรียมแอนติบอดีโมโนโคลนอลจากหนู โดยใช้เทคโนโลยีวิศวกรรมพันธุกรรมเพื่อดัดแปลงแอนติบอดีจากหนูให้มีส่วนของอิมมูโนโกลบูลินของมนุษย์ที่คงที่เพื่อลดภูมิคุ้มกัน แอนติบอดีชนิดนี้เรียกว่าแอนติบอดีโมโนโคลนอลที่ทำให้เป็นมนุษย์ นอกจากนี้ การใช้เซลล์มนุษย์ในการผลิตแอนติบอดีโมโนโคลนอลเรียกว่าการเตรียมแอนติบอดีโมโนโคลนอลจากมนุษย์ทั้งตัว แอนติบอดีโมโนโคลนอลถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านชีวการแพทย์และการใช้งานทางคลินิก ในการวิจัยทางการแพทย์ แอนติบอดีโมโนโคลนอลสามารถใช้เป็นสารปรับภูมิคุ้มกัน แอนติบอดีโมโนโคลนอลเชิงบำบัดสามารถใช้ในการรักษามะเร็งด้วยเคมีบำบัดและการรักษาการติดเชื้อไวรัส และการพัฒนาแอนติบอดีโมโนโคลนอลแบบคอนจูเกตส่วนใหญ่ใช้ในการรักษามะเร็ง

บทนำเกี่ยวกับแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก

ในปี 1960 แนวคิดเรื่องแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกได้รับการเสนอขึ้น แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก หรือที่รู้จักกันในชื่อแอนติบอดีโมโนโคลนอลแบบไบสเปซิฟิก คือแอนติบอดีที่สังเคราะห์ขึ้นโดยใช้เทคโนโลยีทางพันธุวิศวกรรม ในฐานะแอนติบอดีสังเคราะห์ที่ถูกสร้างขึ้น แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกมักอยู่ในกลุ่มย่อย IgG และมีส่วนประกอบที่จับกับแอนติเจนโดยมีเป้าหมายที่หน่วยย่อย CD3 แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกมีตำแหน่งจับกับแอนติเจนจำเพาะสองตำแหน่งที่สามารถจับและจดจำแอนติเจนที่แตกต่างกันสองชนิด หรืออีพิโทปที่แตกต่างกันสองตำแหน่งของแอนติเจนได้พร้อมกัน เมื่อเปรียบเทียบกับแอนติบอดีโมโนโคลนอล แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกมีตำแหน่งจับกับแอนติเจนจำเพาะเพิ่มเติม จึงมีความจำเพาะและประสิทธิภาพในการกำหนดเป้าหมายที่แข็งแกร่งกว่า ซึ่งสามารถกำหนดเป้าหมายเซลล์มะเร็งได้อย่างแม่นยำยิ่งขึ้นและลดความเป็นพิษต่อเป้าหมายที่ไม่ต้องการ แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกสามารถทำหน้าที่ทางชีวภาพหลายอย่างพร้อมกัน เช่น การดึงดูดเซลล์ภูมิคุ้มกัน การปิดกั้นเส้นทางการส่งสัญญาณ และการฆ่าเซลล์มะเร็งโดยตรง แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกในยุคแรกส่วนใหญ่เตรียมได้โดยวิธีการเชื่อมต่อทางเคมีหรือการหลอมรวมเซลล์ แต่กระบวนการนี้อาจพัฒนาไปได้ช้าเนื่องจากการรวมกันแบบสุ่มและความยากลำบากในการแยกคู่เป้าหมาย ด้วยการพัฒนาอย่างต่อเนื่องของเทคโนโลยีวิศวกรรมพันธุกรรม ทำให้มีการพัฒนาแพลตฟอร์มเทคโนโลยีใหม่ๆ มากมาย เช่น knots in holes (KIH), CrossMab, DVD Ig เป็นต้น แพลตฟอร์มเหล่านี้ช่วยแก้ปัญหาต่างๆ ได้อย่างมีประสิทธิภาพ เช่น ความไม่ตรงกันของสายโซ่หนักและสายโซ่เบา และช่วยปรับปรุงความสม่ำเสมอและผลผลิตของแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกให้ดียิ่งขึ้น

รูปที่ 1 แผนภาพแสดงภาพรวมอย่างง่ายของกลไกการออกฤทธิ์ที่เสนอสำหรับแอนติบอดีแบบสองเป้าหมาย (bsAbs) ในการทดลองทางคลินิกสำหรับโรคมะเร็ง(ที่มาของภาพ: บทวิจารณ์เกี่ยวกับแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกและโครงสร้างแอนติบอดีในด้านมะเร็งวิทยาและความท้าทายทางคลินิก - ScienceDirect)

เทคโนโลยีการผลิตแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก

วิธีการหลักในการผลิตแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก ได้แก่ การเชื่อมต่อทางเคมี ไฮบริดโดมาจากสี่แหล่ง และการเตรียมแอนติบอดีโดยวิศวกรรมพันธุกรรม ในบรรดาวิธีเหล่านี้ วิธีการเชื่อมต่อทางเคมีจะเชื่อมต่อ IgG ที่สมบูรณ์สองตัวหรือชิ้นส่วนแอนติบอดี F(ab')2 สองชิ้นเข้าด้วยกันเพื่อสร้างแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกโดยใช้สารเคมีเชื่อมต่อ เช่น ฟทาลิไมด์และไดไทโออะซิลเบนโซอิกแอซิด วิธีนี้ง่ายและใช้งานง่าย แต่Hอาจทำให้บริเวณจับแอนติเจนเสียหาย ลดประสิทธิภาพของแอนติบอดี และสารเคมีเชื่อมต่อเองก็มีฤทธิ์ก่อมะเร็งในระดับหนึ่ง วิธีไฮบริดโดมาจากสี่แหล่งนั้นอาศัยการรวมตัวของเซลล์ร่างกายจากเซลล์ไฮบริดโดมาสองสายพันธุ์ที่แตกต่างกันเพื่อแสดงออก IgG ของหนูที่สอดคล้องกัน โดยผ่านเทคโนโลยีวิศวกรรมพันธุกรรม แอนติบอดีสามารถถูกดัดแปลงทางพันธุกรรมเพื่อสร้างแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกได้ มีการสร้างแอนติบอดีโมโนโคลนอลที่แตกต่างกันสองชนิด และชิ้นส่วน Fab หรือบริเวณตัวแปรของสายหนักและสายเบาของแอนติบอดีทั้งสองจะถูกตัดแยกกัน ผ่านปฏิกิริยาเชื่อมโยงหรือเทคโนโลยีการรวมสายโซ่ ชิ้นส่วนทั้งสองจะถูกรวมเข้าด้วยกันเพื่อสร้างแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก แม้ว่าเทคโนโลยีวิศวกรรมพันธุกรรมจะมีความซับซ้อนค่อนข้างสูง แต่ปัจจุบันเป็นวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดในการผลิตแอนติบอดีแบบสองเป้าหมายเพื่อปรับโครงสร้างและหน้าที่ของแอนติบอดี ในการออกแบบแอนติบอดีแบบสองเป้าหมายนั้น อาจใช้หลักการของปฏิกิริยาข้ามเป้าหมายของแอนติบอดีได้ แต่ปฏิกิริยาข้ามเป้าหมายของแอนติบอดีอาจทำให้เกิดปฏิกิริยาที่ไม่จำเพาะเจาะจง ดังนั้นจึงต้องพิจารณาอย่างรอบคอบในการนำไปใช้จริงในการออกแบบแอนติบอดีแบบสองเป้าหมาย เช่น การรักษาด้วยแอนติบอดีแบบสองเป้าหมาย

การทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก

การทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก คือกระบวนการแยกและทำให้แอนติบอดีเป้าหมายที่มีความบริสุทธิ์สูง โดยใช้สองวิธี ได้แก่ การเหวี่ยงแยกและการกรองอย่างละเอียด เพื่อกำจัดสิ่งเจือปนที่ละลายน้ำได้ ในขั้นต้น แอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกเป้าหมายจะถูกจับโดยโครมาโทกราฟีแบบแอฟฟินิตี สำหรับแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกชนิด IgG จะใช้โครมาโทกราฟีแบบแอฟฟินิตีโปรตีน A ในขณะที่สำหรับแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกที่ไม่ใช่ชนิด IgG สามารถใช้โครมาโทกราฟีแบบแอฟฟินิตีที่ใช้สายโซ่เบาได้ หลังจากนั้น แอนติบอดีจะถูกบ่มภายใต้สภาวะ pH ต่ำเป็นระยะเวลาหนึ่ง ทำให้โครงสร้างโปรตีนบนพื้นผิวของเปลือกไวรัสถูกทำลาย ส่งผลให้สูญเสียความสามารถในการติดเชื้อเซลล์ ขั้นตอนการกรองอย่างละเอียดจะดำเนินการเพื่อกำจัดสิ่งเจือปนเพิ่มเติม เช่น โปรตีนของเซลล์เจ้าบ้าน (HCP) ความบริสุทธิ์ของแอนติบอดีจะได้รับการปรับปรุงโดยวิธีการต่างๆ เช่น โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน และไวรัสที่ตกค้างจะถูกกำจัดออกโดยเทคนิคการกรองระดับนาโนหรืออัลตราฟิลเตรชัน สุดท้าย ตัวอย่างจะถูกทำให้เข้มข้นและแทนที่ด้วยบัฟเฟอร์สูตรที่เหมาะสม

ขั้นตอนการทำงานของบริการผลิตแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิก

ขั้นตอน	เนื้อหาบริการ	ไทม์ไลน์
การสังเคราะห์ยีน	การสร้างรูปแบบการออกแบบลำดับได้มากถึง 3 รูปแบบที่แตกต่างกัน การสร้างพลาสมิดดีเอ็นเอแอนติบอดีลูกผสมขึ้นใหม่	2-3 สัปดาห์
การทดสอบขนาดเล็ก	การผลิตโปรตีนแอนติบอดีแบบสองเป้าหมาย → การแสดงออกในระดับเล็กในเซลล์ไลน์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม → การตรวจสอบความถูกต้องโดย SDS-PAGE → การวิเคราะห์การจับกับแอนติเจนโปรตีนรีคอมบิแนนท์โดย ELISA → การเปรียบเทียบโคลนกับแอนติบอดีต้นแบบ	5-6 สัปดาห์
แยกแยะ	การแสดงออกของแอนติบอดีแบบไบสเปซิฟิกเต็มความยาวสองชนิดแรก → การวิเคราะห์การจับโดย ELISA → การประเมินแอนติบอดีที่รู้จักโดยแอนติบอดีต่อต้านเมาส์โดย ELISA	1 สัปดาห์
การผลิตแอนติบอดี	การผลิตแอนติบอดีในปริมาณมาก	3-4 สัปดาห์

ข้อได้เปรียบของเรา

เราให้บริการครบวงจรทั้งต้นน้ำและปลายน้ำในกระบวนการผลิตแอนติบอดี และสามารถให้บริการทางเทคนิคตั้งแต่การเตรียมแอนติบอดี การทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดีแบบสองเป้าหมาย การแยกและทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดี การจัดลำดับแอนติบอดี การตรวจสอบความถูกต้องของแอนติบอดี ฯลฯ ซึ่งสามารถนำไปใช้ในการบำบัดด้วยแอนติบอดีแบบสองเป้าหมายได้

การแสดงออกสูง

มีการแสดงออกของโปรตีนในระดับสูงในเซลล์ CHO
การจัดเก็บที่เสถียร

แช่ในซีรัมที่อุณหภูมิ 37 °C นานกว่า 2 สัปดาห์
ไม่มีปัญหาเรื่องการละลาย

>30 มก./มล.
เซลล์ที่เสถียร Lnes

มีการพัฒนาเซลล์ไลน์ที่มีแอนติเจนของเนื้องอกที่มีเสถียรภาพจำนวนมาก เพื่อใช้ในการตรวจสอบความถูกต้องของแอนติบอดีแบบสองเป้าหมายหลายชนิด