Aptamer häsiýetnama analiz hyzmaty

“Alpha Lifetech” köp ýyllaryň dowamynda aptamer bilen baglanyşykly hyzmatlary hödürleýär we häzirki wagtda aptamer sintezi, SELEX skriningi, ýokary öndürijilikli yzygiderlik we aptamer optimizasiýasy we häsiýetlendirmesi ýaly toplumlaýyn aptamer işläp düzmek shemalaryny hödürläp bilýär. SELEX usulynyň aptamerleri skrining etmek üçin artykmaçlyklaryna esaslanyp, “Alpha Lifetech” aptamerleri skrining etmek üçin has köp usullary giňeltdi.

Aptameriň häsiýetnama analizine giriş

Ýakynlyk barlagy

Optimallaşdyrylan aptamer ýakynlygy aptamer baglanyş synagynyň degişli usullary bilen tassyklanyldy. Mysallar hökmünde izotermik titrleme kalorimetriýasy (ITC), akym sitometriýasy (FCM) we ýüzleý plazmon rezonansy (SPR), mikrofluidika we ş.m. girýär. Aptamer ýakynlygy adatça dissosiasiýa konstantasy (KD) bilen beýan edilýär, bu fiziki mukdar yzyna gaýtýan reaksiýada molekulýar dissosiasiýa derejesini kesgitlemek üçin ulanylýar. KD gymmaty näçe kiçi bolsa, kompleks şonça durnukly, ýagny ýakynlyk şonça güýçli bolýar; Tersine, KD gymmaty näçe uly bolsa, kompleks şonça durnuksyz we ýakynlyk şonça gowşak bolýar. Bu ädim aptameriň işini kesgitlemegiň açary bolup, aptamer ýakynlygynyň ýetişmegini üpjün edýär we amaly ulanylyşlarda ýokary ýakynlyk we selektiwlik bilen maksatly molekula baglanyp bilýär.

Şekil 1 Aptamer affinitetiniň ýetişme prosesi. Salgylanma çeşmesi:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funksiýany tassyklamak

Affinlik barlagyndan başga-da, aptameriň funksiýasyny barlamak gerek. Bu aptameriň durnuklylygyny, spesifikasiýasyny we belli bir gurşawda beýleki molekulalar bilen özara täsirini barlamagy öz içine alýar. Funksional barlagyň netijeleri ylmy barlaglarda we senagat ulanylyşlarynda aptamerleriň gymmatyna gönüden-göni täsir eder.

Ýörite tassyklama

Bäsdeşlikli tejribe: Aptameriň belli bir nyşana baglanmak ukyby beýleki meňzeş nyşanalaryň gatnaşmagynda bahalandyrylýar. Eger aptamer beýleki molekulalaryň päsgelçiligi bolmazdan nyşana molekulasyna aýratyn baglanyp bilse, bu onuň ýokary spesifikasiýa eýedigini görkezýär.

Çarpaz reaksiýa tejribesi: Aptamer diňe belli bir nyşana baglanýandygyny ýa-da baglanmaýandygyny görmek üçin, onuň aýratynlygyny barlamak üçin birnäçe baglanyşykly ýa-da baglanyşykly däl nyşanalara baglanýar.

Durnuklylygyň barlanmagy

Nukleazanyň dargamagy boýunça tejribe: Aptamerler dürli konsentrasiýadaky nukleazalara sezewar edildi we olaryň dargamagy syn edildi. Dürli wagt nokatlarynda dargamagyň derejesini deňeşdirmek arkaly aptameriň antinukleaza dargamagy ukybyny bahalandyryp bolýar.

Temperatura we wagt durnuklylygy boýunça synag: Aptamer gurluş we funksional durnuklylygyny synlamak üçin dürli temperatura we wagt şertlerinde ýerleşdirildi. Bu bolsa aptamerler üçin iň gowy saklamak we ulanmak şertlerini kesgitlemäge kömek edýär.

Biologiki işjeňligiň identifikasiýa edilmegi

Degişli usul, adatça, nuklein kislotasy aptameriniň anyk ulanylyş maksadyna laýyklykda saýlanýar.

(1) Molekulýar derejeli synag: Aptamer nyşana molekula bilen birleşenden soň emele gelen kompleksleri ýüze çykarmak ýa-da aptamer sebäpli nyşana molekulasynyň ekspresiýa derejesindeki üýtgeşmeleri ýüze çykarmak üçin gel elektroforez, Western blot we ş.m. ýaly molekulýar biologiýa usullaryny ulanmak.

(2) Öýjük derejesindäki synag: Öýjük medeniýet tehnologiýasyny ulanmak arkaly, aptamerler öýjük morfologiýasy, köpelmegi we apoptozy ýaly biologik üýtgeşmeleri synlamak we aptamerleriň biologik işjeňligini bahalandyrmak üçin nyşana öýjükler bilen inkubasiýa edilýär.

(3) Haýwan modelleriniň synagy: Degişli haýwan modellerinde nuklein kislotasynyň aptamerleri inýeksiýa ýa-da derman bermek arkaly berilýär we aptamerleriň biologik işjeňligini we howpsuzlygyny in vivo bahalandyrmak üçin haýwanlaryň fiziologiki görkezijileri we patologiki üýtgeşmeleri syn edilýär.