Serbisyo sa Pagsusuri ng Karakterisasyon ng Aptamer

Matagal nang nagbibigay ang Alpha Lifetech ng mga serbisyong may kaugnayan sa aptamer, at sa kasalukuyan ay nakakapagbigay ng komprehensibong mga iskema sa pagbuo ng aptamer tulad ng aptamer synthesis, SELEX screening, high-throughput sequencing, at aptamer optimization at characterization. Batay sa mga bentahe ng pamamaraan ng SELEX para sa screening ng mga aptamer, pinalawak ng Alpha Lifetech ang mas maraming pamamaraan para sa screening ng mga aptamer.

Panimula sa Pagsusuri ng Karakterisasyon ng Aptamer

Pag-verify ng affinity

Ang na-optimize na affinity ng aptamer ay napatunayan gamit ang mga kaugnay na pamamaraan ng aptamer binding assay. Kabilang sa mga halimbawa ang Isothermal Titration Calorimetry (ITC), Flow Cytometry (FCM), at Surface Plasmon Resonance (SPR), Microfluidics, atbp. Ang affinity ng aptamer ay karaniwang ipinapahayag ng dissociation constant (KD), isang pisikal na dami na ginagamit upang masukat ang antas ng molecular dissociation sa isang reversible reaction. Kung mas maliit ang halaga ng KD, mas matatag ang complex, ibig sabihin, mas malakas ang affinity; sa kabaligtaran, kung mas malaki ang halaga ng KD, mas hindi matatag ang complex at mas mahina ang affinity. Ang hakbang na ito ang susi sa pagtukoy ng performance ng aptamer, tinitiyak ang maturation ng aptamer affinity at maaaring magbigkis sa target na molekula na may mataas na affinity at selectivity sa mga praktikal na aplikasyon.

Fig.1 Proseso ng pagkahinog ng affinity ng aptamer. Pinagmulan ng sanggunian:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Pag-verify ng tungkulin

Bukod sa pag-verify ng affinity, kailangang mapatunayan din ang tungkulin ng aptamer. Kabilang dito ang pag-verify ng katatagan, ispesipisidad, at interaksyon ng aptamer sa iba pang mga molekula sa isang partikular na kapaligiran. Ang mga resulta ng functional verification ay direktang makakaapekto sa halaga ng mga aptamer sa siyentipikong pananaliksik at mga aplikasyon sa industriya.

Tiyak na Pag-verify

Kompetitibong eksperimento: Ang kakayahan ng aptamer na magbigkis sa isang partikular na target ay sinusuri sa presensya ng iba pang katulad na target. Kung ang aptamer ay maaaring partikular na magbigkis sa target na molekula nang walang panghihimasok mula sa ibang mga molekula, ipinapahiwatig nito na ito ay may mataas na espesipisidad.

Eksperimento sa cross reaction: Ang aptamer ay nakatali sa isang serye ng mga kaugnay o hindi kaugnay na target upang makita kung ito ay nagbibigkis lamang sa isang partikular na target, upang mapatunayan ang pagiging tiyak nito.

Pag-verify ng katatagan

Eksperimento sa degradasyon ng nuclease: Ang mga aptamer ay inilantad sa iba't ibang konsentrasyon ng mga nuclease at naobserbahan ang kanilang degradasyon. Sa pamamagitan ng paghahambing ng antas ng degradasyon sa iba't ibang oras, maaaring masuri ang kakayahan ng aptamer na anti-nuclease degradation.

Eksperimento sa katatagan ng temperatura at oras: Ang aptamer ay inilagay sa ilalim ng iba't ibang kondisyon ng temperatura at oras upang maobserbahan ang katatagan nito sa istruktura at paggana. Nakakatulong ito upang matukoy ang pinakamainam na mga kondisyon ng pag-iimbak at paggamit para sa mga aptamer.

Pagtukoy sa biyolohikal na aktibidad

Ang naaangkop na pamamaraan ay karaniwang pinipili ayon sa partikular na layunin ng aplikasyon ng nucleic acid aptamer.

(1) Pagsusuri sa antas ng molekula: Gamit ang mga pamamaraan ng molecular biology, tulad ng gel electrophoresis, Western blot, atbp., upang matukoy ang mga complex na nabuo pagkatapos magsama ang aptamer sa target na molekula, o matukoy ang mga pagbabago sa antas ng ekspresyon ng target na molekula na dulot ng aptamer.

(2) Pagsusuri sa antas ng selula: Gamit ang teknolohiya ng cell culture, ang mga aptamer ay ini-incubate kasama ng mga target na selula upang obserbahan ang mga biyolohikal na pagbabago tulad ng morpolohiya ng selula, paglaganap at apoptosis, at suriin ang biyolohikal na aktibidad ng mga aptamer.

(3) Pagsusuri sa modelo ng hayop: Sa mga angkop na modelo ng hayop, ang mga nucleic acid aptamer ay ibinibigay sa pamamagitan ng iniksyon o pagbibigay ng gamot, at ang mga pisyolohikal na indikasyon at mga pagbabago sa patolohiya ng mga hayop ay inoobserbahan upang suriin ang biyolohikal na aktibidad at kaligtasan ng mga aptamer in vivo.