Plataporma ng Pagbuo ng Bispecific Antibody

Ang Alpha Lifetech ay maaaring magbigay sa mga customer ng mga produkto at serbisyong may katiyakan sa kalidad ng pagtuklas ng antibody at recombinant protein. Maaari kaming maghanda ng mga antibody na may mataas na bisa, malakas na ispesipisidad, at mahusay na katatagan. Ang Alpha Lifetech ay may iba't ibang instrumento at kagamitan sa paglilinis ng antibody, na maaaring magbigay ng mga serbisyo sa paglilinis ng antibody mula sa iba't ibang mapagkukunan tulad ng mga monoclonal antibodies ng kuneho, tupa, manok, at daga, pati na rin ang mga serbisyo sa paglilinis ng Protein A/G affinity at mga serbisyo sa paghihiwalay at paglilinis ng antibody. Batay sa komprehensibong konstruksyon ng platform system ng antibody discovery platform, protein platform, atbp., sinasaklaw namin ang mga serbisyo sa upstream at downstream ng produksyon ng antibody, at maaaring magbigay ng mga teknikal na serbisyo mula sa paghahanda ng antibody, bispecific antibody purification at paghihiwalay at paglilinis ng antibody, antibody sequencing, antibody validation, atbp, na maaaring gamitin para sa bispecific antibody therapy.

Ang mga monoclonal antibodies ay tumutukoy sa mga immunoglobulin na ginawa ng isang B cell na may mataas na specificity para sa mga antigen o epitope. Ang produksyon ng mga monoclonal antibodies ay unang inihanda gamit ang teknolohiyang hybridoma upang makagawa ng mga antibodies sa daga. Sa partikular, sa pamamagitan ng pagsasama ng mga spleen cell mula sa mga nabakunahang daga na may mga myeloma cell mula sa mga tao o daga, nabubuo ang mga hybridoma cell, na naglalabas ng mga partikular na antibodies. Ang nabuo na mga monoclonal antibodies sa daga ay pangunahing ginagamit sa pananaliksik sa hayop at pagsusuri ng sakit pagkatapos ng mga serbisyo ng purification. Gayunpaman, ang katawan ng tao ay gagawa ng immune response sa mga dayuhang protina ng daga, kaya may mga makabuluhang limitasyon sa klinikal na aplikasyon ng produksyon ng mga monoclonal antibodies sa daga. Kalaunan, ginamit ng mga tao ang "humanization" upang maghanda ng mga monoclonal antibodies mula sa mga daga, at ginamit ang teknolohiyang genetic engineering upang baguhin ang mga antibodies sa daga upang magkaroon ng isang pare-parehong rehiyon ng human immunoglobulin upang mabawasan ang kanilang immunogenicity. Ang ganitong uri ng antibody ay kilala rin bilang humanized monoclonal antibody. Bilang karagdagan, ang paggamit ng mga selula ng tao upang makagawa ng mga monoclonal antibodies ay tinatawag na whole human monoclonal antibody preparation. Ang mga monoclonal antibodies ay malawakang ginagamit sa mga biomedical at klinikal na aplikasyon. Sa pananaliksik medikal, ang mga monoclonal antibodies ay maaaring gamitin bilang mga immunomodulator, ang mga therapeutic monoclonal antibodies ay maaaring gamitin para sa chemotherapy ng kanser at paggamot sa impeksyon ng virus, at ang pagbuo ng mga monoclonal antibody conjugates ay pangunahing ginagamit para sa paggamot ng kanser.

Panimula sa Bispecific Antibody

Noong 1960, iminungkahi ang konsepto ng bispecific antibodies. Ang mga bispecific antibodies, na kilala rin bilang bispecific monoclonal antibodies, ay mga artipisyal na na-synthesize na antibodies gamit ang genetic engineering technology. Bilang isang engineered artificial antibody, ang mga bispecific antibodies ay karaniwang kabilang sa IgG subclass at naglalaman ng isang antigen binding fragment na naka-target sa CD3 subunit. Ang mga bispecific antibodies ay may dalawang specific antigen binding sites na maaaring sabay na magbigkis at makilala ang dalawang magkaibang antigens, o dalawang magkaibang epitopes ng isang antigen. Kung ikukumpara sa mga monoclonal antibodies, ang mga bispecific antibodies ay may karagdagang specific antigen binding site, kaya nagtataglay ng mas malakas na specificity at kakayahan sa pag-target, na maaaring mas tumpak na mag-target sa mga tumor cells at mabawasan ang off-target toxicity. Ang mga bispecific antibodies ay maaaring sabay na magsagawa ng maraming biological function, tulad ng pagrerecruit ng mga immune cells, pagharang sa mga signaling pathway, at direktang pagpatay sa mga tumor cells. Ang mga unang bispecific antibodies ay pangunahing inihanda sa pamamagitan ng chemical conjugation o cell fusion, ngunit ang pamamaraang ito ay maaaring mabagal na umunlad dahil sa random na kumbinasyon at kahirapan sa paghihiwalay ng target na kumbinasyon. Kasabay ng patuloy na pag-unlad ng teknolohiya ng genetic engineering, maraming bagong plataporma ng teknolohiya ang nabuo, tulad ng mga knots in holes (KIH), CrossMab, DVD Ig, atbp. Ang mga platapormang ito ay epektibong lumulutas ng mga problema tulad ng mga heavy chain at light chain mismatches, at nagpapabuti sa pagkakapareho at ani ng mga bispecific antibodies.

Fig. 1 Pinasimpleng eskematiko na pangkalahatang-ideya ng mga iminungkahing mekanismo ng pagkilos para sa mga bispecific antibodies (bsAbs) sa mga klinikal na pagsubok para sa oncology.(Pinagmulan ng larawan: Isang pagsusuri ng mga bispecific antibodies at antibody constructs sa oncology at mga klinikal na hamon - ScienceDirect)

Teknolohiya ng Produksyon ng Bispecific Antibodies

Ang mga pangunahing pamamaraan para sa paggawa ng bispecific antibody ay kinabibilangan ng chemical coupling, four source hybridoma, at genetic engineering antibody preparation. Kabilang sa mga ito, ang chemical coupling method ay pinagsasama ang dalawang buo na IgG o dalawang F(ab')2 antibody fragment sa bispecific antibodies gamit ang mga chemical coupling agent tulad ng phthalimide at dithioacylbenzoic acid. Ang pamamaraang ito ay simple at madaling gamitin, ngunit maaari nitong masira ang antigen binding site, mabawasan ang aktibidad ng antibody, at ang coupling agent mismo ay mayroon ding isang tiyak na antas ng carcinogenicity. Ang four source hybridoma method ay batay sa pagsasanib ng mga somatic cell mula sa dalawang magkaibang hybridoma cell lines upang ipahayag ang kaukulang mouse IgG. Sa pamamagitan ng genetic engineering technology, ang mga antibodies ay maaaring genetically modified upang bumuo ng mga bispecific antibodies. Dalawang magkaibang monoclonal antibodies ang binuo, at ang mga Fab fragment o heavy chain at light chain variable regions ng dalawang antibodies ay pinaghiwalay nang hiwalay. Sa pamamagitan ng cross-linking reaction o chain recombination technology, ang dalawang fragment ay pinagsama upang bumuo ng isang bispecific antibody. Bagama't medyo mataas ang complexity ng genetic engineering technology, ito ang kasalukuyang pinakakaraniwang ginagamit na pamamaraan para sa paggawa ng bispecific antibody upang ayusin ang istruktura at tungkulin ng mga antibodies. Kapag nagsasagawa ng bispecific antibody design, maaaring gamitin ang prinsipyo ng antibody cross reactivity, ngunit ang antibody cross reactivity ay maaaring magdulot ng mga di-specific na reaksyon, kaya maingat itong isasaalang-alang sa praktikal na aplikasyon ng bispecific antibody design, tulad ng bispecific antibody therapy.

Paglilinis ng Bispecific Antibodies

Ang bispecific antibody purification ay ang proseso ng paghihiwalay at pagdalisay ng mga high-purity target antibodies. Dalawang pamamaraan, ang centrifugation at deep filtration, ang ginagamit upang alisin ang ilang soluble impurities. Ang target bispecific antibody ay unang kinukuha sa pamamagitan ng affinity chromatography. Para sa mga bispecific antibodies na tulad ng IgG, ginagamit ang protein A affinity chromatography, habang para sa mga bispecific antibodies na hindi tulad ng IgG, maaaring gamitin ang light chain based affinity chromatography. Pagkatapos, ang antibody ay ini-incubate sa ilalim ng mababang pH na kondisyon sa loob ng isang tiyak na tagal ng panahon, na nagiging sanhi ng pagkasira ng istruktura ng protina sa ibabaw ng virus envelope, kaya nawawala ang kakayahang makahawa sa mga cell. Isinasagawa ang intermediate deep filtration upang higit pang alisin ang mga impurities tulad ng host cell proteins (HCP). Ang kadalisayan ng mga antibodies ay pinapabuti sa pamamagitan ng mga pamamaraan tulad ng ion exchange chromatography, at ang anumang natitirang mga virus ay inaalis sa pamamagitan ng nanofiltration o ultrafiltration techniques. Panghuli, ang sample ay kino-concentrate at pinapalitan ng angkop na formulation buffer.

Daloy ng Trabaho sa Serbisyo ng Produksyon ng Bispecific Antibodies

Mga Hakbang	Nilalaman ng Serbisyo	Takdang Panahon
Sintesis ng Gene	Pagbuo ng hanggang 3 magkakaibang iskema ng disenyo ng mga sequence, de novo na pagbuo ng mga recombinant antibody DNA plasmid	2-3 linggo
Maliit na Pagsubok	Produksyon ng mga bispecific antibody protein → Maliit na antas ng ekspresyon sa mga mammalian cell lines → Pagpapatunay sa pamamagitan ng SDS-PAGE → Pagsusuri ng pagbubuklod gamit ang mga recombinant protein antigen sa pamamagitan ng ELISA → Paghahambing ng mga clone na may mga parental antibodies	5-6 na linggo
Tukuyin	Ekspresyon ng unang dalawang full-length bispecific antibodies → Pagsusuri ng pagbubuklod gamit ang ELISA → Pagsusuri ng ELISA ng mga antibodies na kinikilala ng mga anti-mouse antibodies	1 linggo
Produksyon ng Antibody	Malaking produksyon ng antibody	3-4 na linggo

Ang Aming Mga Kalamangan

Sakop namin ang mga serbisyong upstream at downstream ng produksyon ng antibody, at maaaring magbigay ng mga teknikal na serbisyo mula sa paghahanda ng antibody, bispecific antibody purification at antibody separation and purification, antibody sequencing, antibody validation, atbp., na maaaring gamitin para sa bispecific antibody therapy.

Mataas na Ekspresyon

Mataas na ekspresyon ng protina sa mga selula ng CHO.
Matatag na Imbakan

>2 linggo sa serum sa 37 °C.
Walang Isyu sa Pagkatunaw

>30 mg/ml
Mga Matatag na Cell Line

Maraming matatag na linya ng selula na may mga antigen ng tumor ang nabuo upang mapatunayan ang maraming bispecific antibodies.