Антителаларны ачыклау платформасы

Alpha Lifetech түбәндәге хезмәтләрне күрсәтә ала: VHH антитәнчекләрен ачыклау, scFv антитәнчекләрен ачыклау, Fab антитәнчекләрен ачыклау, фаг китапханәсен төзү хезмәте һәм башка хезмәтләр.

БЕЗНЕҢ БЕЛӘН ЭЛЕМТӘГӘ КЕРЕГЕЗ

Фаг дисплей хезмәте белән таныштыру

Фаг дисплейы, фаг ДНКсының генетик модификациясенә нигезләнгән молекуляр техника буларак, бу фрагментларны фаг өслегендә күрсәтү һәм шулай итеп күп санлы вариантлардан (китапханәләрдән) билгеле бер бәйләнеш үзлекләренә ия пептид/антитела фрагментларын сайлау юлы белән билгеле бер максатларга каршы молекуляр зондлар булдыру өчен молекуляр яктан көчле коралга әйләнде.

Alpha Lifetech фаг дисплей антитәнчекләрен эшләүдә ун еллык тәҗрибәгә ия һәм клиентларыбыз өчен профессиональ антитәнчек китапханәсен төзү һәм скрининг хезмәтен күрсәтә ала. Клиентларның ихтыяҗларына карап, без иммун китапханәләре, табигый китапханәләр, синтетик китапханәләр һәм ярымсинтетик китапханәләр кебек төрле антитәнчек китапханәләрен тәкъдим итә алабыз. Антитәнчек геннарын M13 кебек фаг каплавы аксымнары геннары белән берләштерә торган фаг дисплей китапханәсе технологиясе иң еш очрый торган рекомбинант антитәнчекләр әзерләү технологиясе булып тора һәм югары специфик антитәнчекләр эшләүдә киң кулланыла.

Alpha Lifetech альпака, лама, альпака һәм акула һ.б.ны иммунизацияләячәк, шуның белән аларның нәтиҗәлелеге 10^5кә җитәчәк. Мәгълүматларның дөреслеген һәм чынлыгын тәэмин итү өчен без нәтиҗәлелек сынау отчетын клиентка җибәрәчәкбез. Туган китапханәләр түбән токсиклык һәм түбән иммуногенлык өстенлекләренә ия. Alpha Lifetech компаниясенең күп санлы алдан ясалган туган антитәнчек китапханәләре бар, аларны хайваннарны иммунизацияләмичә турыдан-туры антитәнчекләрне тикшерү өчен кулланырга мөмкин, шуның белән проект вакытын кыскарта, клиентның сынау процессын тизләтә һәм антитәнчекнең функциональ бөтенлеген гарантияли.

1 нче рәсем: Фаг дисплей принцибы

Безнең Фаг Дисплей Системасы

M13/T4/T7 фаг дисплей системасы турында төп мәгълүмат 1 нче таблицада күрсәтелгән.

1 нче таблица Төрле фаг дисплейлы транспорт чаралары һәм аларның үзенчәлекләре
	M13	T4	T7
Геном зурлыгы	6407 б.п.	168895 б.п.	39937 б.п.
Протеинны күрсәтү	pVI, pIII һәм pVIII	SOC һәм HOC	gp10B
Дисплей зурлыгы	>110 кДа - pIII
Дисплей зурлыгы
Дисплей тыгызлыгы	pIII'та	SOC'та
Дисплей тыгызлыгы	VIII биттә	HOC'та
Тормыш циклы	Лизогения	Литик	Литик

Alpha Lfetech тәэмин итә ала

Фаг Дисплей генотип һәм фенотипны берләштерә, сайлап алучанлыкны һәм көчәйтүне көчле скрининг мөмкинлекләре белән берләштерә. Alpha Lifetech фаг дисплей антитәнчекләрен эшләү өчен киң хезмәтләр күрсәтә ала.
Төп хезмәтләргә түбәндәгеләр керә: VHH антитела китапханәсе платформасы, scFv антитела китапханәсе платформасы, Fab антитела китапханәсе платформасы, фаг китапханәсе төзү платформасы, фаг китапханәсен тикшерү платформасы һәм антителаларны гуманлаштыру хезмәте һәм башка хезмәтләр.

2 нче рәсем: Фаг дисплейларын эшләү хезмәте процессы

Фаг-дисплей антитәнчекләрен үстерү процессы

Без хайваннарны лабораториябездә экспрессияләнгән яки клиентларыбыз тарафыннан бирелгән аксымнар, шул исәптән төрле макромолекуляр аксымнар, пептидлар һәм мембрана аксымнары белән иммунизацияли алабыз. ELISA нәтиҗәлелеген сынау аша безнең тикшеренүчеләр альпакаларның каныннан PBMC изоляциясен һәм РНК экстракциясен иң яхшы иммунизация нәтиҗәләре белән башкардылар. Кире транскрипция һәм ген амплификациясе ярдәмендә без генны pMESC, pComb3XSS яки pCANTAB 5E фаг векторларында төзедек. TG1 E. coli компетентлы күзәнәкләрен электротрансформацияләү ярдәмендә китапханә сыйдырышлыгы 10^9 дан артык булган фаг антитела китапханәләре алырга мөмкин. Зур китапханә сыйдырышлыгы булган антитела китапханәләре яхшы төрлелеккә ия һәм аффинитетлы антителаларны табарга ярдәм итә. Антитела китапханәсенең сыйфатын тәэмин итү өчен, без китапханә сыйдырышлыгын һәм китапханә кертү тизлеген характерлыйбыз. Ниһаять, без клиентларыбызга кирәкле 30-50 эзлеклелекне тәэмин итү өчен китапханәләрне эзлеклелеккә куябыз. Аннары без фаг дисплей китапханәсен скрининглыйбыз. Башта антиген полипропилен микропластиналарында иммобилизацияләнә, һәм скринингның 3-5 этабы аша көчсез бәйләнеш сәләтенә ия фаг-антителалар бетерелә, һәм антигенга бәйләнгән специфик клоннар саклана. Фаг дисплейы өчен ELISA ысулы уңай клон алу өчен кулланыла, ә чүпрә дисплейы өчен FACS ысулы күзәнәкләрнең маркировкаланган антигеннар ярдәмендә рекомбинант антитела фрагментларын күрсәтүен тәэмин итү өчен кулланыла. Скрининг аша без югары сизгерлеккә, спецификлыкка һәм югары аффинлыкка ия антителалар әзерлибез.

3 нче рәсем. Фаг дисплейлы антитәнчекләр синтезы процессы

Хезмәт күрсәтү өстенлекләре
ХЕЗМӘТ КҮРСӘТҮ өстенлекләре

Alpha Lifetech фаг дисплей технологиясенә тирәнтен бирелгән һәм клиентларга киңрәк һәм яхшырак фаг хезмәтләре күрсәтә ала.

Вакыт аралыгы һәм югары нәтиҗәлелек

Безнең компания кыска вакыт эчендә канәгатьләнерлек антитәнчекләр эзли ала; без клиентларның ихтыяҗларына туры китереп төрле антитәнчекләрне тикшерү экспериментларын үткәрә алабыз.

Югары сыйфатлы продукт

Безнең компания клиентларга югары спецификалылык һәм тотрыклылык белән антитәнчекләр әзерләүдә ярдәм итә, фәнни тикшеренү нәтиҗәләренең күләмен арттыра.

Төрле сайлау мөмкинлекләрен тәкъдим итегез

Безнең компания күп төрле (кеше, тычкан, куян, альпака һ.б.) антитәнчек китапханәләрен һәм төрле төрдәге (scfv, Fab, VHH һ.б.) антитәнчек китапханәләрен төзи ала.

Зур сыйдырышлылык

Безнең антитәнчекләр китапханәсенең зур сыйдырышлыгы 10^9 дан артык антитәнчекне тәшкил итә

Еш бирелә торган сораулар - Фаг дисплейының гомуми проблемалары

фаг дисплей сораулары ◢

С.
Фаг дисплей технологиясе нәрсә ул?

А.
Фаг дисплей технологиясе чит максатлы генны фаг капсиды аксымының билгеле бер урынына кертү һәм фагның нормаль функциясенә тәэсир итмичә, чит генны фаг өслегендә экспрессияләүдән гыйбарәт. Берничә тапкыр тикшерүдән соң, көчле спецификалы һәм югары биологик активлыкка ия максатлы аксым алынды.
С.
Фаг дисплей технологиясенең өстенлекләре нинди?

А.
Бу технология ярдәмендә югары сыйдырышлы антитәнчек китапханәләрен булдырырга мөмкин. Скрининг циклы кыска, операцион процесс гади, һәм куллану диапазоны киң, бу максатчан пептидлар яки аксымнар өчен оптималь эзлеклелекне ачыкларга мөмкинлек бирә. Вирус белән бәйле кушымталарда тикшеренүчеләр зур антитәнчек китапханәләрен скрининглау юлы белән мөһим вирус эпитопларына бәйләнгән антитәнчекләрне ачыклый алалар. Бу процесс вирусларның керүенә, репликациясенә яки иммун качу механизмнарына комачаулый ала, шуның белән авыруларны дәвалау өчен нигез булдыра ала.
С.
Гибридома технологиясе белән фаг технологиясе арасында нинди аерма бар?

А.
Фаг-дисплей технологиясе гибридома технологиясенә караганда киңрәк кулланыла, ул билгеле бер иммуногеннарга каршы аз күләмдә антитәнчекләр җитештерү белән чикләнә. Киресенчә, фаг-дисплей технологиясе төрле иммун төрләреннән алынган тулы антитәнчекләр китапханәсен тәкъдим итә ала.
С.
Фаг дисплей технологиясенең кулланылыш өлкәләре нинди?

А.
Фаг-дисплей технологиясенең кулланылыш даирәләре киң, шул исәптән патоген микроорганизмнар рецепторларын тикшерү, аксымнарның үзара бәйләнешен өйрәнү, күзәнәкләр арасында сигнал тапшыруын күзәтү, хайваннар авыруларын диагностикалау һәм вакциналар эшләү, башка өлкәләр арасында.
С.
Фаг дисплей технологиясенең перспективалары?

А.
Фаг дисплей технологиясе күпсанлы өстенлекләр бирә һәм төрле өлкәләрдә кулланылырга мөмкин. Ләкин, фаг дисплей ысулын кулланып рекомбинант антитәнчекләр эшләүдәге төп кыенлык - процессның катлаулылыгы һәм бәясе. Бу алым молекуляр биология ысулларын, шул исәптән мутация, клонлаштыру һәм экспрессияне, шулай ук иммунологик, биохимик һәм биофизик анализларны интеграцияләүне таләп итә, бу теләгән антитәнчекләрне ачыклау һәм характерлау өчен кулланыла.

Антигенга бәйле сораулар ◢

С.
Антиген презентациясенең нинди ысуллары бар?

А.
Антиген презентациясе бик мөһим звено. Антиген презентациясе ысулларына, нигездә, турыдан-туры капланган антиген презентациясе, туры булмаган капланган антиген презентациясе, бөтен күзәнәк скринингы аша антиген презентациясе, липосомалар, нано-фосфолипид дисклары һәм VLPлар аша антиген презентациясе керә.
С.
Антиген презентациясенең төрле төрләре арасында нинди аермалар бар?

А.
Турыдан-туры каплау ысулы чагыштырмача гади, ләкин антиген конформациясен үзгәртү җиңел, ә туры булмаган каплау операциясе катлаулы, ләкин ул антиген конформациясен саклап кала һәм презентация нәтиҗәлелеген яхшырта ала. Күзәнәк скринингы in vivo чын күренешне симуляцияли ала, ләкин специфик булмаган бәйләнеш проблемасы бар. Нано-фосфолипид диск кечкенә зурлыкта, югары тапшыру нәтиҗәлелегенә һәм яхшы тотрыклылыкка ия; VLP антиген белән кушыла яки антиген белән төрелә, бу югары иммуногенлыкка һәм яхшы куркынычсызлыкка ия, һәм көчле иммун җавапны кузгата ала.
С.
Фаг дисплей технологиясенең скрининг нәтиҗәләренә антиген концентрациясенең йогынтысы нинди?

А.
Әгәр концентрация бик түбән булса, фаг белән бәйләнеш ихтималы кими, нәтиҗәдә скрининг нәтиҗәлелеге кими. Киресенчә, артык югары концентрация специфик булмаган бәйләнеш ихтималын арттырырга, фон сигналын күтәрергә һәм уңай клоннарны ачыклауга комачауларга мөмкин.
С.
Скрининг процессында антигенның табигый конформациясен ничек саклап калуын тәэмин итәргә?

А.
Югары температура, көчле кислота һәм селте йогынтысыннан саклану өчен йомшак фиксацияләү ысулы кулланылырга мөмкин. Антиген структурасына зыянны киметү өчен туры булмаган каплау ысулы һәм биотин-стрептавидин системасы кулланылды. Әгәр антиген мембрана аксымы булса, ул бөтен күзәнәкләр өслегендә күрсәтелергә яки мембрана мохитен, мәсәлән, нано-дискны, аның табигый мембрана аксымы конформациясен саклап калу өчен симуляцияләү өчен кулланылырга мөмкин.
С.
Фаг-дисплей технологиясе ярдәмендә тикшерелгән антитәнчекләрнең антигеннарга бәйләнеш спецификасын ничек тикшерергә?

А.
ELISA, Вестерн-блоттинг (WB) һәм Иммунофлуоресценция (IF) кебек гадәти экспериментлардан тыш, антитәнчекләр һәм антигеннарның бәйләнеш һәм диссоциация процессларын реаль вакыт режимында күзәтү өчен өслек плазмон резонансы (SPR) һәм биокатлам интерферометриясе (BLI) детекторлау ысуллары кулланылырга мөмкин, бу аффинитет һәм кинетик параметрларны билгеләргә мөмкинлек бирә.

Иммунитетка кагылышлы сораулар ◢

С.
Фаг дисплей технологиясендә хайваннарның гомуми иммун җаваплары нинди?

А.
Фаг дисплейы төрле төрләр өчен, шул исәптән кешеләр, тычканнар, күселәр, куяннар, тавыклар, дөяләр, альпакалар, сыерлар, этләр, сарыклар, маймыллар һәм акулалар өчен югары бәйләнешле моноклональ антитәнчекләр булдыру өчен кулланылырга мөмкин.
С.
Фаг дисплей технологиясендә төрле хайван төрләреннән алынган антитәнчек китапханәләренең үзенчәлекләре һәм кулланыла торган сценарийлары нинди?

А.
Тычкан антитела китапханәләрен төзү технологиясе яхшы билгеле, чыгымнар ягыннан отышлы һәм эксперименталь вакыты кыска, бу аны алдан антителаларны тикшерү һәм төп тикшеренүләр өчен яраклы итә. Куян антителалары көчле аффинитет һәм спецификлык күрсәтә, тычкан антителалары белән чагыштырганда эпитопларны тану диапазоны киңрәк. Кеше антителаларын турыдан-туры кеше антитела китапханәләреннән алырга мөмкин, шуның белән кеше организмына гетерологик антителалар кертелгәндә барлыкка килергә мөмкин булган иммун реакцияләрдән качарга мөмкин. Бу алым даруларны тикшерү һәм эшләүдә, бигрәк тә терапевтик антителалар булдыруда зур әһәмияткә ия.
С.
Фаг дисплей технологиясендә кулланыла торган гомуми хайван иммуногены нәрсә ул?

А.
Хайваннар иммуногеннары, гадәттә, аксым антигенына, полипептид антигенына, нуклеин кислотасы антигенына һәм патогенга бәйле антигенга бүленә, алар арасында патогенга бәйле антигенга вирус антигены (тулы вирус кисәкчәсе, вирус аксымы, вирус структурасыз аксымы һ.б.), бактериаль антиген (тулы бактерия экстракты, күзәнәк тышчасы компоненты, бүленеп чыгарылган аксым, токсин һ.б.) һәм паразит антигены керә.
С.
Иммун җавап вакытында хайваннарда иммун толерантлык мәсьәләсен ничек хәл итәргә мөмкин?

А.
Иммун антигеннарын рекомбинант аксымнар белән алыштыру һәм янгын сүндерүче вирус кисәкчәләрен вирусларның структура аксымнары белән алыштыру юлы белән иммуногеннарны көйләгез. Эксперименталь дизайнны көйләгез һәм иммун дозасын үзгәртегез.
С.
Фаг дисплей технологиясендә иммуногеннарның иммуногенлыгын ничек яхшыртырга мөмкин?

А.
Иммуногенлыкны антигеннарны сыер кан сарысуы альбумины кебек ташучы аксымнар белән берләштерү аша көчәйтергә мөмкин. Моннан тыш, иммун адъювантлары, шул исәптән Фройнд адъюванты һәм алюминий адъювантлары, in vivo яшәү вакытын озайту һәм иммун күзәнәкләренең активлашуын һәм пролиферациясен стимуллаштыру өчен кулланылырга мөмкин, шуның белән иммуногенлыкны яхшырта.

Китапханә төзелеше буенча сораулар ◢

С.
Фаг антителалары китапханәсе нәрсә ул?

А.
Фаг антителалары китапханәсе - төрле фаг антителалары җыелмасы, алар антителалардан фаг векторларына үзгәрүчән өлкә геннарының тулы җыелмасын җыю һәм аларны фаглар өслекләрендә экспрессияләү юлы белән булдырыла. Бу процесс фаг антителалары китапханәсе формалашуга китерә.
С.
Фаг антителалары китапханәсен төзү процессы

А.
Фаг дисплейының гомуми процессы берничә төп адымны үз эченә ала: иммунизацияләнгән хайваннардан периферик кан мононуклеар күзәнәкләрен (PBMC) аерып алу, гомуми РНКны аерып алу һәм аны комплементар ДНКга (cDNA) күчерү, полимераз чылбыр реакциясе (ПЦР) технологиясен кулланып максатлы генны көчәйтү, максатлы генны фаг векторына клонлаштыру һәм векторны экспрессия өчен хуҗа күзәнәккә әйләндерү. Бу процесс югары аффинитетлы антитәнчекләрне тиз ачыклый алырлык фаг дисплей китапханәсен төзүгә китерә. Нәтиҗәдә, бу китапханә вакциналар, терапевтик препаратлар һәм диагностик реагентлар эшләү өчен кыйммәтле ресурс булып хезмәт итә ала.
С.
Югары сыйфатлы китапханә төзүнең төп моментлары нинди?

А.

ПБМКның гомуми саны җитәрлек булуын тәэмин итегез. РНК сыйфатын таркалмыйча тәэмин итегез.

Трансформацияләүчеләрнең гомуми санын тәэмин итү өчен, китапханә сыйдырышлыгы, гадәттә, теоретик төрлелекнең 10-100 тапкыры булырга тиеш.
С.
Фаг антителалары китапханәсенең классификацияләре нинди?

А.
Антитәнчекләр китапханәсе чыганагы буенча, фаг антитәнчекләр китапханәләрен иммун фаг антитәнчекләр китапханәләре һәм табигый фаг антитәнчекләр китапханәләре дип бүлеп карарга мөмкин. Бу ике төр арасындагы төп аерма хайваннарга вакцинация ясалганмы-юкмы икәнендә. Моннан тыш, табигый антитәнчекләр китапханәләрен ярымсинтез яки синтез аша булдырырга мөмкин.
С.
Фаг антителалары китапханәсенең сыйфатын ничек бәяләргә мөмкин?

А.
Антитәнчекләр китапханәсе сыйфатын бәяләү өчен ике төп күрсәткеч бар: саклау сыйдырышлыгы һәм төрлелек. Зур саклау сыйдырышлыгы, югары төрлелек белән берлектә, югары аффинитетлы һәм спецификалы антитәнчекләрне нәтиҗәле тикшерүне тәэмин итә.

Китапханә өчен тикшерү сораулары ◢

С.
Фаг антителалары китапханәсен тикшерү процессы нинди?

А.
Биологик элютриация процессында дисплей китапханәсе билгеләнгән максатлар белән инкубацияләнә, аннары реактив булмаган фагларны бетерү өчен җентекләп юыла. Конъюгатлар гадәттә кислоталы яки югары тозлы эремә ярдәмендә элюцияләнә һәм аннары баету өчен яраклы хуҗа күзәнәкләрендә көчәйтелә. 3-5 тур скринингтан соң югары аффинитетлы антитәнчекләр алына.
С.
Фаг антитела китапханәләрен тикшерү өчен нинди ысуллар кулланыла?

А.
Фаг скринингы ысулларына, нигездә, каты фазалы скрининг, сыек фазалы скрининг һәм күзәнәк нигезендә скрининг керә. Тиешле скрининг ысулын сайлау максатчан молекулаларның үзенчәлекләрен, скрининг процессының максатларын һәм лаборатория мохитен исәпкә алырга тиеш.
С.
Фагларның уңай һәм тискәре скрининглары нинди?

А.
Максатлы аксымнарга бәйләнгән фаг антитәнчекләрен тикшерүнең иң төп ысулы - позитив скрининг. Негатив скрининг специфик булмаган антитәнчекләрне бетерүгә хезмәт итә. Фаг антитәнчекләрен тикшерү процессы барышында, максатлы антиген этикеткасыннан, материаллардан яки максатлы антигенга структурасы охшаш булган башка антигеннардан комачаулау аркасында специфик булмаган антитәнчекләр ачыкланырга мөмкин. Мондый очракларда, негатив скрининг скрининг процессының нәтиҗәлелеген арттыра ала.
С.
Специфик булмаган антитәнчекләрне ничек тикшермәскә?

А.

Төрле маркерлар белән билгеләнгән антигеннарга башлангыч скрининг өчен өстенлек бирергә мөмкин, яисә специфик булмаган антитәнчекләр өлешен киметү өчен тискәре скрининг кулланылырга мөмкин.

Бу хәлне булдырмас өчен, сез тиешле герметик сыеклыкны алыштырырга яки чиратлашып төрле герметик сыеклыклар кулланырга сайлый аласыз. Әгәр фон күзәнәк линиясен (CHO яки HEK293) таный торган антитәнчек тикшерелсә, скрининг яки тискәре скрининг максатларында сез төрле фон күзәнәк линияләрен алыштыра аласыз.
С.
Алынган антитәнчекләрне ничек тикшерергә һәм анализларга мөмкин?

А.
Антитәнчекләрне тикшерү ысулларына гадәттә ELISA, Вестерн-блоттинг (WB), агым цитометриясе, иммунопреципитация (IP), иммунофлуоресценция (IF), иммуногистохимия һәм башка төрле эксперименталь техникалар керә. Alpha Lifetech антитәнчекләрне ачыклауда зур тәҗрибәгә ия һәм профессиональ эксперименталь командага ия, бу исә аннан соңгы экспериментларда антитәнчекләрнең нәтиҗәлелеген тәэмин итә.

Сорауларыгыз булса, теләсә кайсы вакытта безнең белән элемтәгә керергә курыкмагыз.

Leave Your Message

Күрсәтелгән хезмәт