Антитела инженериясе нәрсә ул?

Антитәнчекләр инженериясе ярдәмендә антитәнчекләрнең молекуляр зурлыгын, фармакокинетикасын, иммуногенлыгын, бәйләнеш аффинитетын, спецификлыгын һәм эффектор функциясен үзгәртү мөмкин булды. Антитәнчекләрне синтезлаганнан соң, антитәнчекләрнең специфик бәйләнеше аларны клиник диагностика һәм дәвалауда бик кыйммәтле итә. Антитәнчекләр инженериясе ярдәмендә алар дару һәм диагностик иртә үсеш ихтыяҗларын канәгатьләндерә ала.

Антитәнчекләр инженериясенең максаты - табигый антитәнчекләр башкара алмаган югары специфик, тотрыклы функцияләрне эшләү һәм җитештерү, терапевтик антитәнчекләр җитештерү өчен нигез салу.

Антитела инженериясе өлкәсендә зур проект тәҗрибәсенә ия булган Alpha Lifetech компаниясе күп төрләр өчен моноклональ һәм поликлональ антитела хезмәтләрен, шулай ук ​​фаг дисплей антитела китапханәсен төзү һәм скрининг хезмәтләрен күрсәтә ала. Alpha Lifetech компаниясе клиентларга сыйфатлы биосимиляр антителалар һәм рекомбинант аксым продуктлары, шулай ук ​​​​тиешле хезмәтләр күрсәтә ала, алар нәтиҗәле, югары спецификалы һәм тотрыклы антителалар җитештерү өчен кулланыла. Комплекслы антитела, аксым платформалары һәм фаг дисплей системаларын кулланып, без антитела җитештерүнең югары һәм түбән агымын үз эченә алган хезмәтләр күрсәтәбез, шул исәптән антителаларны гуманлаштыру, антителаларны чистарту, антителаларны секвенирлау һәм антителаларны валидацияләү кебек техник хезмәтләр.

Антитела инженериясенең алдынгы этабы ике технология белән бәйле:

--Рекомбинант ДНК технологиясе

--Гибридома технологиясе

Антитела инженериясенең тиз үсеше өч мөһим технология белән бәйле:

--Геннарны клонлаштыру технологиясе һәм полимераз чылбыр реакциясе

--Аксым экспрессиясе: Рекомбинант аксымнар чүпрә, таякчыксыман вируслар һәм үсемлекләр кебек экспрессия системалары тарафыннан җитештерелә.

--Компьютер ярдәмендә структура проектлау

Беренче буын антитәнчекләр химер антитәнчекләр җитештерү өчен гуманлаштырылды, анда тычкан моноклональ антитәнчекләренең үзгәрүчән өлкәсе кеше IgG молекулаларының даими өлкәсе белән бәйләнгән иде. Икенче буын тычкан моноклональ антитәнчегенең антиген бәйләү өлкәсе (CDR) кеше IgG-сына күчерелде. CDR өлкәсеннән кала, башка барлык антитәнчекләр дә диярлек кеше антитәнчекләре, һәм кешеләрне дәвалау өчен тычкан клон антитәнчекләрен кулланганда кеше антитәнчекләренә (HAMA) каршы җавапларны китереп чыгармаска тырышылды.

 

Фаг дисплей китапханәсен төзү өчен, беренче адым - антитәнчекләрне кодлаучы геннарны алу, аларны иммунизацияләнгән хайваннарның В күзәнәкләреннән аерып алырга (иммун китапханә төзелеше), иммунизацияләнмәгән хайваннардан турыдан-туры алырга (табигый китапханә төзелеше), хәтта in vitro антитәнчек ген фрагментлары белән җыярга мөмкин (синтетик китапханә төзелеше). Аннары геннар ПЦР ярдәмендә көчәйтелә, плазмидларга кертелә һәм яраклы хуҗа системаларында (чүпрә экспрессиясе (гадәттә Pichia pastoris), прокариот экспрессиясе (гадәттә E. coli), имезүчеләр күзәнәк экспрессиясе, үсемлек күзәнәк экспрессиясе һәм таякчыксыман вируслар белән зарарланган бөҗәк күзәнәк экспрессиясе) экспрессияләнә. Иң еш очрый торганы - E. coli экспрессия системасы, ул фагка билгеле бер кодлаучы антитәнчек эзлеклелеген интеграцияли һәм фаг кабыгы аксымнарының берсен (pIII яки pVIII) кодлый. Бактериофаглар өслегендә , And геннарының кушылуы. Бу технологиянең төп максаты - фаг дисплей китапханәсен төзү, ул табигый китапханәләргә караганда үзенчәлекле бәйләнешкә ия була алуы белән өстенлеккә ия. Аннары, антигенга спецификалы антитәнчекләр биологик сайлап алу процессы аша тикшерелә, максатлы антигендер фиксацияләнә, бәйләнмәгән фаглар кат-кат юыла, ә бәйләнгән фаглар тагын да баету өчен юыла. Өч яки аннан да күбрәк кабатлау раундыннан соң, югары спецификалы һәм югары аффинлы ​​антитәнчекләр аерып алына.

3 нче рәсем: Антитела китапханәсен төзү һәм тикшерү

Рекомбинант ДНК технологиясе антитәнчек фрагментларын булдыру өчен кулланылырга мөмкин. Fab антитәнчекләре башта ашказаны протеазасы белән генә гидролизланып (Fab') 2 фрагментларын җитештерергә мөмкин, аннары алар папаин тарафыннан эшкәртелә һәм аерым Fab фрагментларын барлыкка китерә. Fv фрагменты VH һәм VLдан тора, алар дисульфид бәйләнешләре булмау сәбәпле начар тотрыклылыкка ия. Шуңа күрә VH һәм VL якынча 25KDa молекуляр авырлыктагы бер чылбырлы үзгәрүчән фрагмент (scFv) антитәнчеген барлыкка китерү өчен 15-20 аминокислотадан торган кыска пептид аша берләшә.

Камелидаларда (Camel, LIama һәм Alpaca) антитәнчекләр структурасын өйрәнү антитәнчекләрнең авыр чылбырлары гына булуын һәм җиңел чылбырлары булмавын ачыклады, шуңа күрә алар авыр чылбырлы антитәнчекләр (hcAb) дип атала. Авыр чылбырлы антитәнчекләрнең үзгәрүчән өлкәсе 12-15 кДа зурлыктагы бер доменлы антитәнчекләр яки нанотәнчекләр яки VHH дип атала. Мономерлар буларак, аларның дисульфид бәйләнешләре юк һәм алар бик тотрыклы, антигеннарга бик югары бәйләнешле.

5 нче рәсем: Авыр чылбырлы антитәнчек һәм VHH/нанотәнчек

Күзәнәкнең ирекле экспрессиясе in vitro аксым синтезына ирешү өчен табигый яки синтетик ДНК экспрессиясен куллана, гадәттә E. coli экспрессия системасын куллана. Ул аксымнарны тиз җитештерә һәм in vivo рекомбинант аксымнарын күп күләмдә җитештергәндә күзәнәкләргә метаболик һәм цитотоксик йөкләнештән кача. Ул шулай ук ​​синтезлау авыр булган аксымнарны, мәсәлән, трансляциядән яки мембрана аксымнарын синтезлаганнан соң үзгәртү авыр булган аксымнарны да җитештерә ала.