Антитело инженериясе нәрсә ул?

Антитело инженериясе ярдәмендә молекуляр зурлыкны, фармакокинетиканы, иммуногенитетны, бәйләнешле якынлыкны, антителаларның үзенчәлеген һәм эффектор функциясен үзгәртергә мөмкин булды. Антитело синтезлаганнан соң, антителаларның конкрет бәйләнеше аларны клиник диагностикада һәм дәвалауда бик кыйммәтле итә. Антитело инженериясе ярдәмендә алар наркотиклар һәм диагностик иртә үсеш ихтыяҗларын канәгатьләндерә алалар.

Антитело инженериясенең максаты - терапевтик антителалар җитештерүгә нигез салып, табигый антителалар ирешә алмаган югары конкрет, тотрыклы функцияләрне проектлау һәм җитештерү.

Альфа Лифетех, антитела инженериясе өлкәсендәге зур тәҗрибәсе белән, берничә төр өчен махсуслаштырылган моноклональ һәм поликлональ антитела хезмәтләрен күрсәтә ала, шулай ук ​​фейдж дисплей антителасы китапханә төзелеше һәм скринка хезмәтләрен күрсәтә ала. Альфа Лифетех клиентларга сыйфатлы биосимилар антителалар һәм рекомбинант белок продуктлары, шулай ук ​​тиешле хезмәтләр күрсәтә ала, нәтиҗәле, югары конкрет һәм тотрыклы антителалар җитештерә ала. Антителон, протеин платформалары һәм фаг дисплей системаларын кулланып, без антитела җитештерүнең югары һәм аскы агымын үз эченә алган хезмәтләр күрсәтәбез, антитела гуманизациясе, антитела чистарту, антитела эзләү, антитела тикшерү кебек техник хезмәтләр.

Антитело инженериясенең пионер этабы ике технология белән бәйле:

- Рекомбинант ДНК технологиясе

- Гибридома технологиясе

Антитело инженериясенең тиз үсеше өч мөһим технология белән бәйле:

- Ген клонлау технологиясе һәм полимераз чылбыр реакциясе

- Протеин экспрессиясе: Рекомбинант протеиннар чүпрә, таяк формасындагы вируслар һәм үсемлекләр кебек экспресс системалары белән җитештерелә.

- Компьютер ярдәмендә структур дизайн

Беренче буын антителалар химерик антителалар җитештерү өчен гуманизацияләнде, монда тычкан моноклоналы антителаларның үзгәрүчән өлкәсе кеше IgG молекулаларының даими өлкәсе белән бәйләнгән иде. Икенче буын тычкан моноклональ антителаның антиген бәйләүче өлкәсе (CDR) кеше IgG-ка күчерелде. CDR өлкәсеннән кала, бүтән антителалар диярлек кеше антителалары, һәм кеше дәвалау өчен тычкан клон антителаларын кулланганда кеше тычканына каршы антитела (HAMA) җавапларын булдырмаска тырыштылар.

 

Фейдж дисплей китапханәсен төзү өчен, беренче адым - иммунизацияләнгән хайваннарның В күзәнәкләреннән (иммун китапханә төзелеше) изоляцияләнә торган, иммунизацияләнмәгән хайваннардан (табигый китапханә төзелеше) алынган, хәтта антителла ген фрагментлары белән синтезланган антителалар геннар алу. Аннары, геннар PCR белән көчәйтелә, плазмидларга кертелә һәм тиешле хуҗа системаларда күрсәтелә (чүпрә экспрессиясе (гадәттә Пичия пасторисы), прокариотик экспресс (гадәттә Э. coli), имезүчеләрнең күзәнәк чагылышы, үсемлек күзәнәкләре һәм таяк формасындагы вируслар белән зарарланган бөҗәк күзәнәкләре). Иң еш очрый торган E. coli экспрессия системасы, ул билгеле бер кодлау антителасы эзлеклелеген фейга берләштерә һәм фаз кабыгы белгечләренең берсен кодлый (pIII яки pVIII). Ген кушылуы, һәм бактериофаглар өслегендә күрсәтелә. Бу технологиянең асылы - табигый китапханәләргә караганда өстенлеге булган фаз дисплей китапханәсен төзү. Соңыннан, антиген спецификасы булган антителалар биологик сайлау процессы аша тикшерелә, максатлы антигеннар тоташтырыла, чикләнмәгән этаплар кат-кат юыла, бәйләнгән этаплар алга таба баету өчен юыла. Өч яки күбрәк раунд кабатланганнан соң, югары үзенчәлек һәм югары якынлыклы антителалар изоляцияләнә.

3 нче рәсем: Антитело китапханәсе төзелеше һәм скринкасы

Рекомбинант ДНК технологиясе антитела фрагментларын булдыру өчен кулланылырга мөмкин. Фаб антителалары башта ашказаны протеазы белән гидролизацияләнергә мөмкин (Fab ') 2 фрагмент, аннары папаин белән ашатыла, аерым Fab фрагментлары. Fv фрагменты VH һәм VLдан тора, алар диффид бәйләнешләре булмаганлыктан начар тотрыклылыкка ия. Шуңа күрә, VH һәм VL кыска пептид аша 15-20 аминокислоталар белән бәйләнгәннәр, молекуляр авырлыгы якынча 25КДа булган бер чылбырлы үзгәрүчән фрагмент (scFv) антителасы барлыкка китерәләр.

Камелидадагы антитела структурасын өйрәнү (Дөя, LIama, һәм Альпака) антителаларның авыр чылбырлар һәм җиңел чылбырлар булмавын аңлатты, шуңа күрә алар авыр чылбырлы антителалар (hcAb) дип атала. Авыр чылбырлы антителаларның үзгәрүчән домены бер домен антителалары яки нанободияләр яки VHH дип атала, зурлыгы 12-15 kDa. Мономерлар буларак, аларның диффид бәйләнешләре юк һәм бик тотрыклы, антигеннәргә бик якын.

5 нче рәсем: Авыр чылбырлы антитела һәм VHH / Нанободи

Күзәнәк ирекле белдерү табигый яки синтетик ДНК экспрессиясен куллана, витро белок синтезына ирешү өчен, гадәттә E. coli экспрессия системасын кулланып. Ул аксымнарны тиз җитештерә һәм вивода күп күләмдә рекомбинант белок җитештергәндә күзәнәкләргә метаболик һәм цитотоксик йөкләрдән саклый. Ул шулай ук ​​синтезлау авыр булган протеиннар җитештерә ала, мәсәлән, мембрана протеиннарын тәрҗемә итү яки синтезлаудан соң үзгәртү авыр.