خېمىر يۈزى كۆرسىتىش كۇتۇپخانىسىنى تەكشۈرۈش مۇلازىمىتى

بىزنىڭ ئېچىتقۇ كۆرسىتىش كۇتۇپخانىلىرىمىز چوڭ سىغىمى ۋە كۆپ خىللىقى يۇقىرى بولۇپ، ئالاھىدە ئانتىتېلا تىزىملىكىنى ئۈنۈملۈك تەكشۈرۈش ئۈچۈن يۇقىرى ئاساس بىلەن تەمىنلەيدۇ.

بىز بىلەن ئالاقىلىشىڭ

خېمىر يۈزى كۆرسىتىش كۇتۇپخانىسىنى تەكشۈرۈش مۇلازىمىتى

Alpha Lifetech شىركىتى خېمىر كۆرسىتىش كۈتۈپخانىسى قۇرۇش ۋە ئانتىتېلا كۈتۈپخانىلىرىنى تەكشۈرۈشكە ئىختىساسلاشقان بولۇپ، دۇنيانىڭ ھەرقايسى جايلىرىدىكى خېرىدارلار ئۈچۈن ھەر خىل خېمىر كۈتۈپخانىلىرىنى ھاسىل قىلىش ۋە ئۇلارنىڭ يۇقىرى يېقىنلىق دەرىجىسى ۋە ئالاھىدە ئانتىتېلاسىنى تەكشۈرۈش ئىقتىدارىنى تەمىنلەيدۇ. مۇتەخەسسىس تەتقىقاتچىلار گۇرۇپپىسى، ئىلغار تېخنىكا ۋە ئۈسكۈنىلەر بىلەن، بىز كېسەللىككە مۇناسىۋەتلىك كەڭ دائىرىلىك ئاقسىللارنى نىشان قىلغان خېمىر كۈتۈپخانىلىرىنى قۇرالايمىز. بىز ئاقسىل خېمىر كۆرسىتىش، كىچىك مولېكۇلالىق خېمىر كۆرسىتىش، ئانتىتېلا خېمىر كۆرسىتىش قاتارلىق فاگ كۆرسىتىش ۋە خېمىر كۆرسىتىش تېخنىكىلىرى بىلەن تەمىنلىيەلەيمىز.

بىزنىڭ خېمىر كۆرسىتىش كۇتۇپخانىلىرىمىز چوڭ سىغىمى ۋە كۆپ خىللىقى يۇقىرى بولۇپ، ئالاھىدە ئانتىتېلا تىزىملىكىنى ئۈنۈملۈك تەكشۈرۈش ئۈچۈن يۇقىرى ئاساس بىلەن تەمىنلەيدۇ. بىز ئېھتىياجىڭىزغا ئاساسەن ھەر خىل شەكىلدىكى ئانتىتېلا كۆرسىتىش كۇتۇپخانىلىرىنى (IgG، scFv، VHH، Fab ئانتىتېلا كۇتۇپخانىلىرى)، ئاقسىل كۇتۇپخانىلىرى، پېپتىد كۇتۇپخانىلىرى، cDNA كۇتۇپخانىلىرى قاتارلىقلارنى قۇرالايمىز. بۇنىڭدىن باشقا، بىز يەنە ئىممۇنىتېت كۇتۇپخانىلىرى، تەبىئىي كۇتۇپخانىلار، سۈنئىي كۇتۇپخانىلار، يېرىم سۈنئىي كۇتۇپخانىلار ۋە كېسەللىك ئانتىتېلا كۇتۇپخانىلىرى قاتارلىق ھەر خىل خۇسۇسىيەتلەرگە ئىگە ئانتىتېلا كۇتۇپخانىلىرىنى تەرەققىي قىلدۇرالايمىز.

خېمىر كۆرسىتىش سىستېمىسىغا كىرىش

خېمىر يۈزى كۆرسىتىش تېخنىكىسى خېمىر يۈزىدە گېن بىرىكمىسى ئارقىلىق رېكومبىنات ئاقسىللارنى كۆرسىتىش ئۇسۇلى. ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان خېمىر كۆرسىتىش سىستېمىسى ئالفا لېكتىن جۈپلىشىش ئاقسىلىنىڭ Aga2p تارماق بىرلىكىنىڭ C ئۇچىغا قوشۇلغان نىشان ئاقسىلىنى ئىشلىتىدۇ، ئاساسلىقى نىشان ئاقسىلىنىڭ ئىككى تەرىپىدىكى ئېپىتوپ بەلگىلىرىدىن تەركىب تاپىدۇ: N ئۇچى 9-ئامىنو كىسلاتا گېماگلۇتىنىن (HA) بەلگىسى ۋە C ئۇچى 10-ئامىنو كىسلاتا c-myc بەلگىسى. 69-ئامىنو كىسلاتا Aga2p تارماق بىرلىكى ئىككى دىسۇلفىد باغلىنىشى ئارقىلىق 725-ئامىنو كىسلاتا ئالفا لېكتىن Aga1p تارماق بىرلىكىگە باغلىنىدۇ، Aga1p بولسا β 1،6-گلۇكان كوۋالېنت باغلىنىشى ئارقىلىق ھۈجەيرە تېمىغا چاپلىنىدۇ. شۇڭا، نىشان ئاقسىلى خېمىر ھۈجەيرىلىرىنىڭ يۈزىدە كۆرسىتىلىدۇ ۋە كېيىن ماس كېلىدىغان بىرىكمە تەرىپىدىن تونۇلىدۇ. ئېقىم سىتومېتىرىيەسىنى تەكشۈرۈش ئارقىلىق كۇتۇپخانىلاردىن ئىقتىدارلىق ئاقسىللارنى ئايرىڭ.

1-رەسىم: خېمىرنىڭ يۈزىنىڭ كۆرسىتىلىش پىرىنسىپى. (رەسىم مەنبەسى: ئاقسىل ئىنژېنېرلىقىدا خېمىر يۈزى كۆرسىتىشنىڭ قوللىنىلىشى.)

خېمىر يۈزى كۆرسىتىش كۇتۇپخانىسىغا كىرىش سۆز

خېمىرنى كۆرسىتىش تۈرگە ئايرىش خېمىرنىڭ يۈزى كۆرسىتىشىگە ئاساسلانغان بولۇپ، ئاساسلىقى ھۈجەيرە يۈزى ئاقسىللىرىنى نىشان قىلغان ئانتىتېلا كۈتۈپخانىلىرىنى تەكشۈرۈشكە ئىشلىتىلىدۇ. خېمىر ھۈجەيرىلىرى بىلەن باشقا ھۈجەيرە يۈزى ئوتتۇرىسىدىكى خاس بولمىغان باغلىنىشنىڭ تۆۋەن بولۇشى سەۋەبىدىن، خېمىرنىڭ بىئولوگىيىلىك تاللاش ئۇسۇلى چوڭ باغلىنىش كۈتۈپخانىلىرىنى تەكشۈرۈپ، ئاز ئۇچرايدىغان كىلونلارنى تاپالايدۇ.

خېمىر يۈزى كۆرسىتىش كۇتۇپخانىسىنى تەكشۈرۈش مۇلازىمىتى

پلازمىد ۋە ئېچىتقۇ ھۈجەيرىلىرىنى يېتىشتۈرۈش، نىشان ئاقسىلنى كودلايدىغان DNA نى سىنتېزلاش ۋە ئۇنى ئىندۇكسىيەلىك ئىلگىرى سۈرگۈچىلەر، سىگنال پېپتىدلىرى ۋە يۈزەكى كۆرسىتىش ئاقسىللىرىغا (مەسىلەن، Aga2p) قوشۇلغان نىشان گېنلارنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېچىتقۇ ئىپادىلەش ۋېكتورىغا كىلونلاش. نىشان ئاقسىلنى كودلايدىغان گېننى ئېچىتقۇ ھۈجەيرە تام ئاقسىلىنى كودلايدىغان گېن (ئادەتتە Aga2p) بىلەن بىرلەشتۈرۈشكە بولىدۇ، ھەمدە قوشۇلغان گېننى ئېلېكتروپوراتسىيە ئارقىلىق ئېچىتقۇ ھۈجەيرىلىرىگە ئايلاندۇرغىلى بولىدۇ. ئۆزگەرتىشتىن كېيىن، يۈزىدە ئانتىتېلا گېنىنى ئىپادىلەيدىغان ئېچىتقۇ ھۈجەيرىلىرى ئانتىگېنغا خاس تەكشۈرۈش سىنىقىدىن ئۆتەلەيدۇ: ئېچىتقۇ كۈتۈپخانىسى نىشان ئانتىگېن بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىنىدۇ ۋە ئۇنىڭغا ئالاھىدە باغلىنىدىغان ئېچىتقۇ ھۈجەيرىلىرى تاللىنىدۇ. فلۇئورېسسېنسىيە ئاكتىپلاشتۇرۇلغان ھۈجەيرە تۈرگە ئايرىش (FACS) ئارقىلىق، ئېھتىياجلىق ئالاھىدىلىكلەرگە ئىگە ئاقسىللارنى كۆرسىتىدىغان ئېچىتقۇ ھۈجەيرىلىرىنى ئايرىپ، ئېچىتقۇ كۆرسىتىش كۈتۈپخانىسىنى تەكشۈرۈش ئەڭ چوڭ كۈتۈپخانا چوڭلۇقى ~10 ^ 8-10 ^ 9 ئېچىتقۇ ھۈجەيرىسى بىلەن ئېلىپ بېرىلسا بولىدۇ. ئاندىن مۇسبەت كىلونلارنى تېخىمۇ تەھلىل قىلىش ياكى كېيىنكى قوللىنىش ئۈچۈن ئايرىپ ئېلىشقا بولىدۇ. ئانتىتېلا كۈتۈپخانىسىدىن ئالاھىدە ئانتىتېلا كىلونلىرى بايقالغاندىن كېيىن، ئۇلارنى تېخىمۇ ئېنىقلىغىلى ۋە كۆپ مىقداردا ئىشلەپچىقىرغىلى، ھەمدە ئاقسىل A/G يېقىنلىق خروماتوگرافىيەسى قاتارلىق تېخنىكىلار ئارقىلىق ساپلاشتۇرۇپ، خېمىرنى كۆرسىتىش ۋە ئانتىتېلا ئىشلەپچىقىرىشنىڭ پۈتۈن جەريانىنى تاماملىغىلى بولىدۇ.

خېمىر كۆرسىتىش كۇتۇپخانىسىنى تەكشۈرۈش جەريانى

2-رەسىم، خېمىر كۆرسىتىش كۈتۈپخانىسىنى تەكشۈرۈش جەريانى

خېمىر كۆرسىتىش كۇتۇپخانىسىنى تەكشۈرۈش خىزمىتىنىڭ ئىش جەريانى

قەدەملەر	مۇلازىمەت مەزمۇنى	ۋاقىت جەدۋىلى
ئانتىگېن تەييارلاش	ئانتىگېن تىپى: ئەگەر خېرىدار ئانتىگېن بىلەن تەمىنلىيەلىسە، تىپىغا ئاساسەن ماس كېلىدىغان ئەۋرىشكىلەرنى يەتكۈزۈش كېرەك: رېكومبىنات ئاقسىللار 3-3.5 مىللىگرام تەلەپ قىلىدۇ، ساپلىق تەلىپى 85% تىن يۇقىرى، كىچىك مولېكۇلا 90% تىن يۇقىرى ساپلىق تەلىپى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈشى، پېپتىد بىرىكمىسى 90% تىن يۇقىرى ساپلىق تەلىپى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈشى، ۋىرۇس قاتارلىق ئەۋرىشكىلەر ئاكتىپسىزلاندۇرۇلۇشى، پارچىلىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن RNA تەكشۈرۈلۈشى، يۇقىرىدىكى ئانتىگېن تىپلىرىنىمۇ بىرىكتۈرۈش ئۈچۈن خاسلاشتۇرغىلى بولىدۇ.	2-3 ھەپتە
ھايۋانلارنىڭ ئىممۇنىتېت سىستېمىسى	ھايۋاناتلارغا ئىممۇنىتېت بېرىش سانى 5 بولۇپ، قان زەردابى تىترى سىنىقىغا ئاساسەن ئىممۇنىتېت بېرىش سانىنى كۆپەيتىش كېرەكمۇ يوق دېگەننى بېكىتىش كېرەك. ئانتىگېن ئىممۇنىتېت كۈچى: ئاقسىل/ۋىرۇس ئانتىگېنىنىڭ كۈچى >105؛ پېپتىد/كىچىك مولېكۇلا ئانتىگېنىنىڭ كۈچى >10^4.	5-6 ھەپتە
قېلىپ cDNA تەييارلاش	پلازما PBMC لىرىنى ئايرىڭ، ئومۇمىي RNA (RNA ئايرىش ئۈسكۈنىسى) نى ئايرىڭ ۋە cDNA غا ئايلاندۇرۇڭ.	1 كۈن
كۇتۇپخانا قۇرۇلۇشى	كۇتۇپخانا cDNA نى قېلىپ قىلىپ ئىشلىتىپ، VHH گېنى ئىككى قېتىملىق PCR ئارقىلىق كۈچەيتىلدى، ھەمدە VHH گېنىنى ئۇلاش خېمىر كۆرسىتىش ۋېكتورى قۇرۇلدى. ۋېكتور ئېلېكتروپوراتسىيە ئارقىلىق خېمىر ھۈجەيرىلىرىگە ئۆزگەرتىلىپ، ئانتىتېلا كۇتۇپخانىسى قۇرۇلدى. تاسادىپىي ھالدا 48 كىلوننى تاللاپ، PCR ئۇسۇلى ئارقىلىق مۇسبەت نىسبىتىنى (>90%) ئېنىقلاڭ؛ كۇتۇپخانا سىغىمىنى (10^7-10^8)، NGS تەرتىپىنى ھېسابلاپ، كۇتۇپخانا كىرگۈزۈش نىسبىتىنى (>90%) ۋە كۇتۇپخانا كۆپ خىللىقىنى ئېنىقلاڭ.	2 ھەپتە
كۇتۇپخانا تەكشۈرۈشى	ئۈچ قېتىملىق تەكشۈرۈش: فلۇئورېسسېنسىيە بەلگىسى قويۇلغان ئاقسىل FACS تەكشۈرۈشى، ئۈچىنچى قېتىملىق تەكشۈرۈشتە NGS تەرتىپ بويىچە تەكشۈرۈش ئېلىپ بېرىلدى. مۇسبەت كىلونلار يەككە گرام ئىندۇكسىيە ئىپادىسى ۋە ELISA تەكشۈرۈشى ئۈچۈن تاللاندى. بارلىق مۇسبەت كىلونلار گېن تەرتىپ بويىچە تەكشۈرۈش ئۈچۈن تاللاندى، ھەمدە ئوخشىمىغان CDR رايون تەرتىپلىرى تاللاندى.	2-3 ھەپتە
ئانتىتېلا تەكشۈرۈش	ئانتىتېلا تىزىملىكى ئۈچۈن مۇۋاپىق ئىپادىلەش ۋېكتورلىرىنى قۇرۇش ئانتىتېلا ئىپادىلىنىشى، ئانتىتېلانى تازىلاش، ئانتىتېلا ئانتىگېنىنىڭ باغلىنىشىنى ELISA ۋە BLI ئارقىلىق تەكشۈرۈش ئارقىلىق ئانتىتېلانىڭ يېقىنلىقىنى جەزملەشتۈرۈش ۋە ھۈجەيرە ئىقتىدارىنى جەزملەشتۈرۈش ئۈچۈن ئېقىم سىتومېتىرىيەسىنى توسۇش قاتارلىق ئىشلارنى ئاسانلاشتۇرالايدۇ.	1 ھەپتە

ئېچىتقۇ يۈزى كۆرسىتىش كۈتۈپخانىسىنى تەكشۈرۈش ئەھۋالى

خېمىر يۈزى كۆرسىتىش سۇپىسى ئەدەبىياتىدا، ئاپتورلار خېمىر يۈزى كۆرسىتىشكە ئاساسلانغان تولۇق سىناق نەيچىسىدىكى خېمىر يۈزى كۆرسىتىش سۇپىسىنى قۇرغان. ئالدى بىلەن، تۆگە گېنىدىن باشلاپ سۈنئىي خېمىر كۈتۈپخانىسى لايىھەلەنگەن. D رەسىمدە، خېمىرنىڭ كاربون ئۇچىدا HA بەلگىسى بار، ئاندىن خېمىر ھۈجەيرە تېمىغا كوۋالېنتلىق شەكىلدە ئورنىتىلغانلىقى كۆرسىتىلگەن. E رەسىمدە خېمىرنىڭ ئانتىگېنغا يېقىنلىقى بار خېمىرنىڭ نانو تېنى ئايرىۋېلىنغان، كۈچەيتىلگەن ۋە FACS ئارقىلىق قايتا-قايتا ئانتىتېلا تاللانغان. ئاپتورلار بۇ سۇپا ئارقىلىق ئىككى خىل ئىنسان GPCR نى نىشان قىلغان كونفورماسىيەلىك تاللاش خاراكتېرلىك نانو تېنىنى بايقىغان.