Платформа імунізації тварин

Платформа імунізації тварин переважно імунізує тварин родини верблюдових (альпака, ліама та верблюди), закладаючи основу для виробництва нанотіл.

ЗВ'ЯЖІТЬСЯ З НАМИ

Платформа імунізації тварин

Тваринні джерела Alpha Lifetech прозорі, з дозволами на інспекцію та карантин, чітким генетичним фоном, чіткою частотою імунізації та детальними записами інтервалів імунізації, що забезпечує зручні послуги для виробництва антитіл. В основному, компанія імунізує тварин родини Camelidae (альпака ліама та верблюди), закладаючи основу для виробництва нанотіл. Крім того, вона також може імунізувати звичайних тварин (таких як новозеландські білі кролики, миші та інші тварини) відповідно до необхідної частоти імунізації та вимог до імуногенності клієнтів, екстрагувати та ізолювати їх у PBMC, а потім використовувати для подальших експериментів (таких як розробка моноклональних антитіл, поліклональних антитіл тощо). Клієнти можуть надавати власні імуногени, і ми проводитимемо суворий контроль їх якості. Якщо клієнти надають вірусні імуногени, їх необхідно інактивувати, і ми проведемо тестування на інактивацію для забезпечення безпеки. Водночас ми також можемо налаштувати відповідні імуногени відповідно до потреб клієнтів.

Вступ до імунізації тварин

Під час виробництва антитіл тваринного походження, таких як моноклональні антитіла, поліклональні антитіла та нанотіла, першим кроком є імунізація тварин та отримання відповідних B-клітин, антитіл або PBMC для підготовки до подальшого виробництва антитіл, сприяння фундаментальним науковим дослідженням, розробки клінічних діагностичних інструментів та сприяння відкриттю та розробці нових ліків. Верблюди, альпаки, ліами та інші верблюди родини Camelidae можуть виробляти бібліотеки нанотіл (однодоменних антитіл) шляхом збору імунної крові та екстракції PBMC. Кролики та інші тварини можуть бути імунізовані, а антитіла можуть бути вилучені з їхніх тіл. Після очищення їх можна використовувати для виробництва поліклональних антитіл. Мишей, щурів тощо можна використовувати для виробництва моноклональних антитіл шляхом злиття імуноекстрактованих B-клітин з клітинами мієломи. Перед імунізацією слід звернути увагу на принципи 3R (заміна, зменшення, удосконалення), які можуть значно зменшити кількість використовуваних тварин до необхідного мінімуму, покращити експериментальні процедури та мінімізувати страждання тварин. Також необхідно дотримуватися належного планування експерименту, вибору відповідних антитіл та суворих процедур валідації.

Класифікація імуногенів - виробництво нанотіл

Типи імуногенів	Приклад	Приготування імуногену	Нотатки
Білкові імуногени	Ферменти, білки, бактеріальні токсини та інші речовини	Оберіть різні системи експресії білків: E. coli, дріжджі, клітини комах, клітини ссавців та безклітинну систему	Звертайте увагу на такі фактори, як температура, час, pH та тільця включення, які впливають на експресію білка
Імуногени нуклеїнових кислот	ДНК, РНК	ДНК-імуноген: конструювання плазмідної ДНК, клонування відповідних векторів експресії для цільових генів, культивування клітин для ампліфікації плазмідної ДНК та екстракція плазмідної ДНК високої чистоти РНК-імуноген: необхідно додати структуру капелюха та поліА-хвіст для запобігання деградації	Під час приготування ДНК-імуногенів слід звертати увагу на відповідні клітини-хазяїни, а під час приготування РНК-імуногенів – на запобігання деградації РНК.
Вірусні імуногени	Інактивована цільна вірусна вакцина, субодинична вакцина, векторна вірусна вакцина (аденовірус, лентивірус тощо), mRAN вакцина.	Під час приготування інактивованої вакцини з цілим вірусом вірус спочатку інактивують для підвищення безпеки. Тестування на токсичність використовується для визначення повноти інактивації. Субодиничні вакцини потребують лише поверхневих білків вірусу як антигенів і повинні враховувати ефективність імунної системи.	Для забезпечення імунної дії необхідно додавати ад'юванти, слід звертати увагу на вірус, який потрібно інактивувати, для забезпечення імунної дії потрібні відповідні титри вірусу, а безпека процесу приготування повинна суворо контролюватися.

Процес або хронологія імунізації тварин

Відбір тварин та підготовка антигенів

Відбір тварин: Відбирайте альпак потрібного віку та здорової статури зі здорових груп, а також проводите аналіз крові та скринінг на хвороби, щоб переконатися у відсутності інфекційних захворювань чи інших проблем зі здоров'ям.

Підготовка імуногену: Імуногени є ключем до індукції імунних відповідей і вимагають вибору відповідних білків, пептидів або інших відповідних речовин на основі вимог до цільового антитіла.

Альпаку можна імунізувати 1-3 антигенами одночасно, із загальною кількістю антигену 1-2 мг на імунізацію та об'ємом менше 2 мл. Перед імунізацією антиген та ад'ювант емульгують у співвідношенні 1:1 для утворення однорідної суміші, яку зберігають при температурі 4 ℃.

Імунологічна альпака

Запишіть номер порожнього вуха альпаки та розпочніть експеримент з імунізації. Введіть препарат у лімфатичні вузли біля шиї альпаки з обох боків, по 2 точки з кожного боку, та введіть приблизно 0,4 мл емульгованого антигену в кожну точку. Після імунізації спостерігайте протягом півгодини, щоб переконатися, що альпака не має симптомів дискомфорту. Імунізацію слід проводити кожні 2 тижні, щонайменше 4 рази.

Збір крові

Після 4 імунізацій протягом 5-7 днів, зберіть 50 мл крові з шийної вени альпаки.

Відділення сироватки

Зразки крові для імунної оцінки збирають перед кожною імунізацією антигеном, при цьому кожного разу береться 5 мл крові; того ж дня кров центрифугують при 400 x g протягом 30 хвилин за допомогою попередньо охолодженої центрифуги до 25 ℃. Верхній шар сироватки відокремлюють та зберігають для подальшого тестування титру антитіл.

Окремі лімфоцити

Спочатку додайте 15 мл розчину для розділення клітин, потім повільно додайте 15 мл крові до центрифужної пробірки об'ємом 50 мл. Будьте обережні та повільні під час додавання крові, щоб запобігти змішуванню крові та розчину для розділення. Попередньо охолодіть центрифугу при 25 ℃, центрифугуйте при 400 x g протягом 30 хвилин та зберігайте верхню сироватку в новій центрифужній пробірці при -80 ℃; за допомогою піпетки відберіть середні ватно-подібні імунні клітини верхнього шару в нову центрифужну пробірку об'ємом 50 мл. Додайте 10 мл буфера PBS кімнатної температури до кожної пробірки, центрифугуйте при 25 ℃ та 400 x g протягом 20 хвилин. Видаліть супернатант, додайте 5 мл буфера PBS кімнатної температури до кожної пробірки, обережно перемішайте, обчисліть кількість клітин за допомогою гемоцитометра, а потім центрифугуйте при 25 ℃ та 400 x g протягом 20 хвилин. Видаліть супернатант та розчиніть лімфоцити, отримані за допомогою RNAiso Plus, виходячи з кількості клітин, щоб отримати клітинний лізат 10^7/мл, який зберігається при температурі -80 ℃.

Рис. 1: Схематичне зображення різних стратегій виявлення антитіл та експериментальних етапів, які вони включають. (Джерело рисунка: Лаустсен, Андреас Х. та ін.)

Клієнти забезпечують імуногени – суворий контроль якості

Типи імуногенів	Вимога	Метод контролю якості
Зразки пептидів / малих молекул	Умови розчинення (головним чином залежно від того, чи інактивують вони фаги), молекулярна структура/пептидна послідовність, звіт про синтез (ВЕРХ/МС/ЯМР)	ВЕРХ/МС-детектор
Зразки білка	SDS-PAGE/WB, умови відновлення, буфер, інформація на етикетці, загальна кількість (20-50 мкг), концентрація, чистота тощо	SDS-PAGE/WB
Зразки клітин	Тип клітин (первинні клітини/генно відредаговані клітини), форма клітин (свіжі/заморожені розморожені), тип росту (адгезивні/суспендовані), вимоги до культурального середовища, кількість наданих клітин, кількість наданих клітин, генно відредаговані клітини для забезпечення стабільної експресії скринінгових мішеней (відповідне первинне антитіло клієнта), заморожені розморожені клітини для визначення коефіцієнта відновлення	В основному, таргетування генно-редагованих клітин, використання первинних антитіл, що надаються замовником, для ELISA-ідентифікації експресії мішеней (наша компанія надає вторинні антитіла до HRP), детекції проточною цитометрією (наша компанія може надати флуоресцентні вторинні антитіла).

Які застосування має імунітет тварин?

+

Поліклональні антитіла можна отримати шляхом імунізації тварин, моноклональні антитіла можна отримати шляхом злиття B-клітин з клітинами мієломи, а PBMC можна екстрагувати з верблюжих джерел (альпака, верблюд, альпака тощо) для отримання різних форм фрагментів антитіл, таких як нанотіла, Fab-фрагменти, фрагменти антитіл scFv тощо.
Які запобіжні заходи для імунітету тварин?

+

Для отримання наноантитіл для тварин, отриманих з верблюдів, потрібно 5-6 імунізацій. Зразки крові слід зібрати як контроль перед імунізацією, з інтервалом 2 тижні між кожною імунізацією. Після четвертої імунізації слід зібрати позитивну кров та неімунізовану негативну кров для ІФА, щоб визначити титр. Якщо титр нижче 10^6, кількість імунізацій слід збільшувати, доки титр не досягне відповідного рівня. Для інших імунізацій тварин, таких як імунізація кроликів (оптимальний або загальний рівень білкового антигену для імунізації кроликів становить 50-1000 мкг), імунізація мишей (оптимальний або загальний рівень білкового антигену для імунізації мишей становить 5-50 мкг, що вимагає 10^6 клітин, якщо це клітина, та 10-50 мкг для нуклеїнової кислоти або вуглеводів), імунізація кіз (оптимальний або загальний рівень білкового антигену для імунізації кіз становить 250-5000 мкг) тощо, слід звертати увагу на дозування, безпеку та ефективність імуногенів.
Як вибрати імунних тварин?

+

Залежно від типу антитіл, необхідних замовнику, якщо вам потрібно виробляти нанотіла або інші фрагменти антитіл, ви можете вибрати тварин верблюдового походження (верблюдів, альпак, альпак) для імунізації. Якщо вам потрібно виробляти моноклональні або поліклональні антитіла, вам потрібно вибрати відповідний вид на основі кількості сироватки, антигену та джерела антигену. Максимальна кількість сироватки для кроликів становить 500 мл, що вимагає невеликої кількості антигену та є основним вибором для виробництва поліклональних антитіл. Максимальна кількість сироватки для мишей становить 2 мл, а для щурів – 20 мл, що зазвичай є оптимальним вибором для моноклональних антитіл. Антитіла, вироблені з кіз, мають високу спорідненість, і Alpha Lifetech може розробити для вас ексклюзивний план імунізації відповідно до ваших вимог.
Чи потрібно використовувати антигени разом з ад'ювантами? Як вибрати?

+

Існує два типи ад'ювантів: на масляній основі та на водній основі. Розумне використання ад'ювантів має вирішальне значення для індукції сильної антитільної відповіді на розчинні антигени. Пролонговане вивільнення ад'ювантів означає, що можна використовувати менше доз антигенів, а антитільні відповіді є більш тривалими. Першу ін'єкцію слід використовувати в поєднанні з ад'ювантом. Зазвичай рекомендується використовувати ад'ювант Фрейнда, коли кількість імуногену невелика.
Запобіжні заходи щодо імунізації альпаки?

+

(1) Вибір альпаки та антигену імунітету є ключем до успішної імунізації. Вибір верблюда з хорошими пропорціями не рекомендується. Чистота та правильна конформація імунних антигенів мають вирішальне значення для скринінгу відповідних антитіл для подальшого застосування після імунізації альпаками. Чистота білкових антигенів зазвичай становить не менше 90%.

(2) Відділення лімфоцитів: Своєчасне відділення клітин може ефективно запобігти гемолізу після забору крові для досягнення найкращого ефекту розділення.

(3) Імунний цикл може впливати на імунну відповідь: імунний інтервал тривалістю 1-2 тижні дозволяє альпакам мати хорошу імунну відповідь на більшість антигенів.

незалежно розроблений ад'ювант

Наша унікальна формула ад'юванта оптимізована для імунної системи альпаки, забезпечуючи вищу ефективність та специфічність, ніж традиційні ад'юванти.

Проведення імунізації
стандарт

Ми обіцяємо завершити імунізацію у встановлений термін, надати сироватку з високим титром та зафіксувати кожен крок у детальних звітах.

Контроль якості проекту

Кожен проєкт проходить суворі процеси контролю якості, щоб забезпечити клієнтам постачання антитіл, що відповідають високим стандартам.

чіткоАльпакаПередісторія

У нас здорова популяція альпак, яка забезпечує підтримку різних програм імунізації.

Якщо у вас виникнуть будь-які питання, будь ласка, звертайтеся до нас у будь-який час.