Служба аналізу характеристики аптамерів

Компанія Alpha Lifetech вже багато років надає послуги, пов'язані з адаптерами, пропонуючи комплексні послуги з розробки та аналізу адаптерів.

ЗВ'ЯЖІТЬСЯ З НАМИ

Служба аналізу характеристики аптамерів

Компанія Alpha Lifetech вже багато років надає послуги, пов'язані з аптамерами, і наразі може запропонувати комплексні схеми розробки аптамерів, такі як синтез аптамерів, SELEX-скринінг, високопродуктивне секвенування, а також оптимізація та характеристика аптамерів. Ґрунтуючись на перевагах методу SELEX для скринінгу аптамерів, Alpha Lifetech розширила більше методів скринінгу аптамерів.

Вступ до аналізу характеристики аптамерів

Перевірка спорідненості

Оптимізовану спорідненість аптамерів було перевірено відповідними методами аналізу зв'язування аптамерів. Прикладами є ізотермічна титраційна калориметрія (ITC), проточна цитометрія (FCM) та поверхневий плазмонний резонанс (SPR), мікрофлюїдика тощо. Спорідненість аптамерів зазвичай виражається константою дисоціації (KD), фізичною величиною, яка використовується для кількісної оцінки ступеня молекулярної дисоціації в оборотній реакції. Чим менше значення KD, тим стабільніший комплекс, тобто тим сильніша спорідненість; навпаки, чим більше значення KD, тим нестабільніший комплекс і тим слабша спорідненість. Цей крок є ключем до визначення продуктивності аптамерів, забезпечення дозрівання спорідненості аптамерів та їхньої можливості зв'язуватися з цільовою молекулою з високою спорідненістю та селективністю в практичних застосуваннях.

Рис.1 Процес дозрівання спорідненості аптамерів. Джерело посилання:Кінгхорн, Альберта, Фрейзер, Луїзіана, 2017.

Перевірка функцій

Окрім перевірки спорідненості, необхідно перевірити функцію аптамера. Це включає перевірку стабільності, специфічності та взаємодії аптамера з іншими молекулами в певному середовищі. Результати перевірки функціональності безпосередньо впливатимуть на цінність аптамерів у наукових дослідженнях та промисловому застосуванні.

Конкретна перевірка

Конкурентний експеримент: Здатність аптамера зв'язуватися зі специфічною мішенню оцінюється у присутності інших подібних мішеней. Якщо аптамер може специфічно зв'язуватися з молекулою-мішенню без перешкод з боку інших молекул, це вказує на його високу специфічність.

Експеримент з перехресною реакцією: аптамер зв'язується з низкою споріднених або неспоріднених мішеней, щоб перевірити, чи зв'язується він лише з певною мішенню, з метою перевірки його специфічності.

Перевірка стабільності

Експеримент з деградації нуклеаз: Аптамери піддавали впливу різних концентрацій нуклеаз і спостерігали їхню деградацію. Порівнюючи ступінь деградації в різні моменти часу, можна оцінити здатність аптамерів до деградації антинуклеаз.

Експеримент зі стабільності температури та часу: Аптамер поміщали в різні температурні та часові умови для спостереження за його структурною та функціональною стабільністю. Це допомагає визначити оптимальні умови зберігання та використання аптамерів.

Ідентифікація біологічної активності

Відповідний метод зазвичай вибирається відповідно до конкретної мети застосування аптамера нуклеїнової кислоти.

(1) Молекулярне тестування: Використання методів молекулярної біології, таких як гель-електрофорез, вестерн-блот тощо, для виявлення комплексів, що утворюються після поєднання аптамера з цільовою молекулою, або виявлення змін рівня експресії цільової молекули, спричинених аптамером.

(2) Тестування на рівні клітин: За допомогою технології культивування клітин аптамери інкубують з клітинами-мішенями для спостереження за біологічними змінами, такими як морфологія клітин, проліферація та апоптоз, а також для оцінки біологічної активності аптамерів.

(3) Тестування на тваринних моделях: У відповідних тваринних моделях аптамери нуклеїнових кислот вводяться шляхом ін'єкції або введення ліків, а фізіологічні показники та патологічні зміни у тварин спостерігаються для оцінки біологічної активності та безпеки аптамерів in vivo.