Платформа розробки аптамерів

Аптамери – це одноланцюгові олігонуклеотиди (ДНК, РНК або XNA) з властивістю високої спорідненості та високої специфічності, які специфічно зв'язуються з молекулами-мішенями, такими як антитіла, і вони широко використовуються для розробки біосенсорів, діагностики та терапії.

Платформа аптамерів, що надається Alpha Lifetech, включає дві категорії: платформу синтезу аптамерів, яка в основному включає сервіс синтезу бібліотеки аптамерів SELEX та сервіс розробки аптамерів (ДНК, РНК або XNA), а також платформу скринінгу аптамерів, включаючи сервіси скринінгу на основі технології SELEX для білків, пептидів, клітин, малих молекул, іонів металів та інших цільових молекул, а також сервіси оптимізації та ідентифікації аптамерів.

Платформа синтезу аптамерів

Сервіс синтезу бібліотеки аптамерів SELEX

Послуга синтезу бібліотек аптамерів SELEX в основному передбачає створення бібліотеки, що містить велику кількість випадкових одноланцюгових олігонуклеотидних послідовностей, шляхом хімічного синтезу in vitro відповідно до цільових молекул. Побудова бібліотеки є відправною точкою технології SELEX, яка забезпечує велику кількість послідовностей-кандидатів для подальшого процесу скринінгу шляхом створення величезних випадкових бібліотек та збільшує можливість скринінгу високоафінних аптамерів.

Синтез бібліотеки в основному поділяється на такі кроки:

Кроки	Технологічні деталі
Визначення молекул-мішеней	Визначте цільові молекули, які необхідно перевірити на наявність аптамерів, це можуть бути білки, нуклеїнові кислоти, малі молекули, іони металів тощо.
Дизайн випадкової послідовності	Довжина випадкової послідовності, склад основ та інші параметри були розроблені відповідно до характеристик цільових молекул та вимог скринінгу. Як правило, випадкові послідовності мають довжину від десятків до сотень основ.
Синтез фіксованих послідовностей	Олігонуклеотидні фрагменти з фіксованими послідовностями (такими як послідовності ПЛР-праймерів) на обох кінцях розроблені та синтезовані, які будуть використані в подальшому процесі ампліфікації та скринінгу.

Синтезовану бібліотеку все ще потребує подальшої обробки для контролю якості. Концентрацію бібліотеки було визначено для забезпечення її застосовності в подальшому процесі скринінгу. Різноманітність та точність випадкових послідовностей у бібліотеці були перевірені за допомогою секвенування та інших методів, щоб гарантувати, що якість бібліотеки відповідає вимогам скринінгу.

За допомогою вищезазначених кроків можна синтезувати високоякісну та дуже різноманітну бібліотеку аптамерів SELEX, яка може забезпечити велику кількість послідовностей-кандидатів для подальшого процесу скринінгу.

Послуги з розробки аптамерів (ДНК, РНК або КНК)

Аптамери зазвичай відносяться до аптамерів нуклеїнових кислот. Аптамери нуклеїнових кислот включають ДНК-аптамери, РНК-аптамери та XNA-аптамери, які є хімічно модифікованими аптамерами нуклеїнових кислот. Метод SELEX широко використовується для розробки аптамерів. Основний робочий процес розробки аптамерів включає створення бібліотеки, зв'язування з мішенню, виділення та очищення, ампліфікацію, кілька раундів скринінгу та ідентифікацію послідовностей. Протягом багатьох років ми зосереджуємося на створенні бібліотек та маємо багатий досвід у розробці аптамерів. Ми прагнемо надавати клієнтам кращі послуги.

Технологічний процес SELEX

Процес SELEX складається з кількох раундів, кожен з яких включає такі ключові кроки:

Бібліотека та зв'язування цілей

Сконструйовану бібліотеку нуклеїнових кислот змішують зі специфічними цільовими молекулами (такими як білки, низькомолекулярні сполуки тощо), щоб послідовності нуклеїнових кислот у бібліотеці мали можливість зв'язуватися з цільовими молекулами.

Виділення незв'язаних молекул

Послідовності нуклеїнових кислот, які не зв'язані з цільовою молекулою, відокремлюються від суміші специфічними методами, такими як афінна хроматографія, магнітне розділення кульок тощо.

Ампліфікація зв'язуючих молекул

Послідовність нуклеїнової кислоти, зв'язана з цільовою молекулою, ампліфікується, зазвичай за допомогою технології полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Для наступного етапу скринінгу ампліфіковані послідовності будуть використані як вихідна бібліотека.

Рис. 1: Процес скринінгу SELEX

Платформа скринінгу аптамерів

Служба скринінгу аптамерів

Alpha Lifetech пропонує широкий спектр спеціалізованих послуг зі скринінгу аптамерів, застосовуючи різні методології SELEX для різних типів ваших молекул:

Типи цілей	Технічні деталі
Скринінг білкових аптамерів за допомогою SELEX	Головною метою скринінгу білкових аптамерів є скринінг аптамерів, які можуть специфічно зв'язуватися з цільовими молекулами білка. Ці аптамери простіші в синтезі, стабільніші та менш схильні до впливу факторів навколишнього середовища.
Скринінг пептидних аптамерів за допомогою SELEX	Пептидні аптамери – це клас коротких пептидних послідовностей з високою специфічністю та спорідненістю, які можуть специфічно зв'язуватися з цільовими речовинами та демонструють широкий спектр застосування в біомедичній галузі. За допомогою спеціального процесу скринінгу пептидні аптамери, які можуть специфічно зв'язуватися з цільовими молекулами, відбираються з великої кількості бібліотек випадкових пептидних послідовностей.
Скринінг клітинно-специфічних аптамерів (Cell-SELEX)	Як мішені готують клітини-мішені або специфічні молекули на поверхні клітин. Мішенями можуть бути цілі клітини, рецептори на клітинній мембрані, білки або інші малі молекули.
Скринінг аптамерів малих молекул за допомогою Capture SELEX	Захоплення SELEX – це метод скринінгу in vitro для скринінгу аптамерів низьких молекул, що є варіантом SELEX. Захоплення SELEX особливо добре підходить для скринінгу аптамерів низькомолекулярних мішеней, які зазвичай мають менше функціональних груп і їх важко іммобілізувати безпосередньо на твердофазних носіях.
Послуги SELEX на основі живих тварин	Скринінг на живих тваринах – це експериментальний метод, що широко використовується в галузях біологічної науки, медицини та біотехнології, який використовує живих тварин як експериментальні моделі для скринінгу та оцінки певних молекул, лікарських засобів, терапевтичних засобів або біологічних процесів. Ці послуги розроблені для моделювання фізіологічного середовища в організмі людини, щоб точніше прогнозувати та оцінювати ефективність і безпеку експериментальних результатів в організмі людини.

Сервіс оптимізації аптамерів

Гідрофільність, висока втрата спорідненості під час виробництва та швидке виведення аптамерів обмежують їхнє застосування. Наразі досліджується різноманітні методи оптимізації для підвищення продуктивності аптамерів.

Ми також маємо різноманітні способи оптимізації аптамерів, що включають усічення, модифікації, кон'югацію з відповідною групою (тіолова, карбокси, амінна, флуорофорна тощо).

Сервіс аналізу характеристики аптамерів

Послуга аналізу характеристики аптамерів стосується професійної послуги з оцінки ефективності, розділення структури та функціональної перевірки отриманого аптамера, щоб переконатися, що аптамер відповідає вимогам щодо специфічної зв'язувальної здатності, стабільності та специфічності. Вона головним чином включає аналіз спорідненості та специфічності, оцінку стабільності та перевірку біологічної функції.

Синтез аптамерів

Скринінг аптамерів

Оптимізація аптамерів

Аналіз аптамерів

Дослідження аптамерів

Якщо у вас виникнуть будь-які питання, будь ласка, звертайтеся до нас у будь-який час.