Платформа для розробки біспецифічних антитіл

Alpha Lifetech може забезпечити клієнтів якісними продуктами та послугами з виявлення антитіл та рекомбінантних білків гарантованої якості.

ЗВ'ЯЖІТЬСЯ З НАМИ

Платформа для розробки біспецифічних антитіл

Компанія «Альфа Лайфтех» може забезпечити клієнтів якісними продуктами та послугами з виявлення антитіл та рекомбінантних білків. Ми можемо готувати антитіла з високою ефективністю, високою специфічністю та гарною стабільністю. «Альфа Лайфтех» має різноманітні інструменти та обладнання для очищення антитіл, які можуть надавати послуги з очищення антитіл з різних джерел, таких як моноклональні антитіла кроликів, овець, курей та мишей, а також послуги з афінного очищення білків A/G та послуги з розділення та очищення антитіл. Ґрунтуючись на комплексній системі платформи для виявлення антитіл, білкової платформи тощо, ми охоплюємо послуги з виробництва антитіл вище та нижче, а також можемо надавати технічні послуги з підготовки антитіл, очищення біспецифічних антитіл та їх розділення та очищення, секвенування антитіл, валідації антитіл тощо, які можуть бути використані для терапії біспецифічними антитілами.

Моноклональні антитіла відносяться до імуноглобулінів, що продукуються однією B-клітиною та мають високу специфічність до антигенів або епітопів. Спочатку моноклональні антитіла готувалися за допомогою гібридомної технології для отримання мишачих антитіл. Зокрема, шляхом злиття клітин селезінки імунізованих мишей з клітинами мієломи людей або мишей утворюються гібридомні клітини, які секретують специфічні антитіла. Отримані мишачі моноклональні антитіла після очищення в основному використовуються в дослідженнях на тваринах та діагностиці захворювань. Однак організм людини виробляє імунну відповідь на чужорідні мишачі білки, тому існують значні обмеження в клінічному застосуванні виробництва мишачих моноклональних антитіл. Пізніше люди використовували «гуманізацію» для отримання моноклональних антитіл з мишей та використовували технологію генної інженерії для модифікації мишачих антитіл, щоб мати константну область людського імуноглобуліну для зменшення їхньої імуногенності. Цей тип антитіл також відомий як гуманізовані моноклональні антитіла. Крім того, використання людських клітин для отримання моноклональних антитіл називається приготуванням цілих людських моноклональних антитіл. Моноклональні антитіла широко використовуються в біомедичних та клінічних застосуваннях. У медичних дослідженнях моноклональні антитіла можуть використовуватися як імуномодулятори, терапевтичні моноклональні антитіла можуть використовуватися для хіміотерапії раку та лікування вірусних інфекцій, а розробка кон'югатів моноклональних антитіл використовується переважно для лікування раку.

Вступ до біспецифічних антитіл

У 1960 році було запропоновано концепцію біспецифічних антитіл. Біспецифічні антитіла, також відомі як біспецифічні моноклональні антитіла, – це штучно синтезовані антитіла за допомогою технології генної інженерії. Як штучно створені антитіла, біспецифічні антитіла зазвичай належать до підкласу IgG та містять фрагмент зв'язування антигену, спрямований на субодиницю CD3. Біспецифічні антитіла мають два специфічні сайти зв'язування антигену, які можуть одночасно зв'язуватися та розпізнавати два різні антигени або два різні епітопи антигену. Порівняно з моноклональними антитілами, біспецифічні антитіла мають додатковий специфічний сайт зв'язування антигену, таким чином володіючи сильнішою специфічністю та здатністю до націлювання, що дозволяє точніше націлюватися на пухлинні клітини та зменшувати токсичність поза цільовою зоною. Біспецифічні антитіла можуть одночасно виконувати кілька біологічних функцій, таких як залучення імунних клітин, блокування сигнальних шляхів та безпосереднє знищення пухлинних клітин. Ранні біспецифічні антитіла в основному готувалися шляхом хімічної кон'югації або злиття клітин, але цей метод, можливо, розвивався повільно через випадкове поєднання та труднощі з виділенням цільової комбінації. З постійним розвитком технологій генної інженерії було розроблено багато нових технологічних платформ, таких як вузли в отворах (KIH), CrossMab, DVD Ig тощо. Ці платформи ефективно вирішують такі проблеми, як невідповідність важких і легких ланцюгів, а також покращують однорідність і вихід біспецифічних антитіл.

Рис. 1. Спрощений схематичний огляд запропонованих механізмів дії біспецифічних антитіл (bsAbs) у клінічних випробуваннях для онкології.(Джерело рисунка: Огляд біспецифічних антитіл та конструкцій антитіл в онкології та клінічних проблемах - ScienceDirect)

Технологія виробництва біспецифічних антитіл

Основні методи виробництва біспецифічних антитіл включають хімічне з'єднання, чотириджерельну гібридому та генно-інженерну підготовку антитіл. Серед них метод хімічного з'єднання поєднує два інтактні IgG або два фрагменти антитіл F(ab')2 у біспецифічні антитіла за допомогою хімічних з'єднувальних агентів, таких як фталімід та дитіоацилбензойна кислота. Цей метод простий та легкий у використанні, але він може пошкодити сайт зв'язування антигену, знизити активність антитіл, а сам з'єднувальний агент також має певний ступінь канцерогенності. Метод чотириджерельних гібридом базується на злитті соматичних клітин з двох різних ліній гібридомних клітин для експресії відповідного мишачого IgG. За допомогою технології генної інженерії антитіла можна генетично модифікувати для утворення біспецифічних антитіл. Були сконструйовані два різні моноклональні антитіла, а Fab-фрагменти або варіабельні області важкого та легкого ланцюгів двох антитіл розщеплювали окремо. За допомогою реакції зшивання або технології ланцюгової рекомбінації два фрагменти об'єднували для утворення біспецифічного антитіла. Хоча складність технології генної інженерії є відносно високою, наразі вона є найпоширенішим методом виробництва біспецифічних антитіл для коригування структури та функції антитіл. Під час проведення дизайну біспецифічних антитіл можна використовувати принцип перехресної реактивності антитіл, але перехресна реактивність антитіл може спричиняти неспецифічні реакції, тому це буде ретельно враховано при практичному застосуванні дизайну біспецифічних антитіл, такого як терапія біспецифічними антитілами.

Очищення біспецифічних антитіл

Очищення біспецифічних антитіл – це процес виділення та очищення високочистих цільових антитіл. Для видалення деяких розчинних домішок використовуються два методи: центрифугування та глибока фільтрація. Цільове біспецифічне антитіло спочатку захоплюється за допомогою афінної хроматографії. Для біспецифічних антитіл, подібних до IgG, використовується афінна хроматографія на білку А, тоді як для біспецифічних антитіл, не подібних до IgG, може бути використана афінна хроматографія на основі легких ланцюгів. Після цього антитіло інкубують в умовах низького pH протягом певного періоду часу, що призводить до порушення структури білка на поверхні вірусної оболонки, тим самим втрачаючи здатність інфікувати клітини. Проміжна глибока фільтрація проводиться для подальшого видалення домішок, таких як білки клітини-господаря (HCP). Чистота антитіл покращується за допомогою таких методів, як іонообмінна хроматографія, а будь-які залишкові віруси видаляються за допомогою методів нанофільтрації або ультрафільтрації. Нарешті, зразок концентрується та замінюється відповідним буфером для рецептури.

Робочий процес служби виробництва біспецифічних антитіл

Кроки	Зміст послуги	Хронологія
Синтез генів	Генерація до 3 різних схем дизайну послідовностей, de novo генерація рекомбінантних плазмід ДНК антитіл	2-3 тижні
Випробування малого масштабу	Продукція біспецифічних білків антитіл → Експресія в малих масштабах у клітинних лініях ссавців → Валідація за допомогою SDS-PAGE → Аналіз зв'язування з рекомбінантними білковими антигенами за допомогою ELISA → Порівняння клонів з батьківськими антитілами	5-6 тижнів
Ідентифікувати	Експресія перших двох повнорозмірних біспецифічних антитіл → Аналіз зв'язування за допомогою ELISA → Оцінка ELISA антитіл, що розпізнаються антимишачими антитілами	1 тиждень
Виробництво антитіл	Виробництво антитіл у великих масштабах	3-4 тижні

Наші переваги

Ми охоплюємо послуги з виробництва антитіл, як початкового, так і наступного етапу, і можемо надавати технічні послуги з підготовки антитіл, очищення біспецифічних антитіл, їх розділення та очищення, секвенування антитіл, валідації антитіл тощо, які можуть бути використані для терапії біспецифічними антитілами.

Висока експресія

Висока експресія білка в клітинах CHO.
Стабільне зберігання

>2 тижні в сироватці крові при 37 °C.
Немає проблем з розчинністю

>30 мг/мл
Стабільні клітинні лінії

Для валідації багатьох біспецифічних антитіл було розроблено багато стабільних клітинних ліній з пухлинними антигенами.