Служба розробки моноклональних антитіл

Компанія «Альфа Лайфтех»може забезпечити прогнозування епітопів, синтез пептидів, експресію білків, продукцію поліклональних або моноклональних антитіл, а також очищення антитіл з клітинної культури, асцитної рідини або цільної сироватки.

Компанія «Альфа Лайфтех»має досвід у наданні клієнтам різних послуг зі стабільних клітинних ліній, включаючи гібридомні клітини, клітинні лінії редагування геному, клітинні лінії з нокдауном та клітинні лінії з надмірною експресією. Ми намагаємося пропонувати кожному клієнту передові послуги зі створення індивідуальних клітинних ліній, і наші послуги перевірені та надійні.

Стратегія розробки антитіл

1. Дизайн та підготовка антигену
Ці антигени можуть бути білками, пептидами або іншими молекулами. Розробка імуногенів вимагає комплексного підходу, який інтегрує знання про структуру антигену, імунологію та системи доставки. Alpha Lifetech має технологію розробки антигенів, яка може створювати імуногени для клієнтів, які цього потребують.
Компанія Alpha Lifetech пропонує клієнтам продукти рекомбінантного білка на вибір. Ми пропонуємо різноманітні системи експресії білків, такі як система експресії E. coli, система експресії дріжджів, система експресії бакуловірусу-комах, система експресії ссавців тощо, для виробництва рекомбінантних білків, необхідних для досліджень.

2. Імунізація тварин
Alpha Lifetech може постачати імуногени клієнтам, а також ви можете обрати тварин з імунітетом, таких як миші, кролики, вівці, альпаки, морські свинки, хом'яки тощо.

3. Методи виробництва моноклональних антитіл

●Виробництво моноклональних антитіл (МАТ) за допомогою гібридомної технології
Гібридома – це гібридна клітина, що утворюється шляхом злиття двох видів клітин, а саме: лінії клітин мієломи миші та плазматичних клітин (лімфоцит B), у яких гетерозиготна клітина може безперервно виробляти антитіла проти антигену, що цікавить, in vitro. Виробництво лінії клітин гібридоми складається з трьох частин: дизайн антигену (гаптени, малі молекули та пептиди), імунізація тварин, злиття клітин та скринінг позитивних клонів. Використовуючи унікальні методології імунізації, ми отримуємо винятково високу ефективність злиття клітин (1-10 гібридом на тисячу B-клітин) та високі титри антитіл, що максимізує наш рівень успіху в подальших аналітичних тестах, що включають біохімічний скринінг, клітинні аналізи in vitro та дослідження на тваринах.

●Виробництво моноклональних антитіл за допомогою технології фагового дисплею
Фаговий дисплей пропонує ще один метод генерації моноклональних антитіл. B-лімфоцити виділяють з крові тварин, а їх мРНК екстрагують. За допомогою ПЛР ця мРНК перетворюється на кДНК, яка ампліфікує всі сегменти VH та VL. Потім ці сегменти клонують у вектор, зазвичай у вигляді одноланцюгових варіабельних фрагментів (scFv), разом з білком PIII бактеріофага. Згодом ця конструкція використовується для інфікування E. coli, що призводить до створення бібліотеки, що містить приблизно 10^10 клітин, шляхом інокуляції фагом-хелпером. Після цього E. coli здатна секретувати бактеріофаг, що містить сегменти VH та VL як частину своєї оболонки. Після цього можна вибрати специфічні сегменти VH та VL, спрямовані на антиген, що цікавить, та використовувати їх для повторної інокуляції E. coli бактеріофагом. Потім клітини, що містять плазміду, виділяють та секвенують.

4. Скринінг злиття

●Злиття та відбір клітин
Потім зібрані B-клітини зливають з клітинами мієломи, які є раковими клітинами, що можуть необмежено розмножуватися в культурі. Злиття зазвичай досягається за допомогою такої методики, як злиття з поліетиленгліколем (ПЕГ).
Після злиття клітини гібридоми культивують у селективному середовищі, яке дозволяє виживати лише гібридомам. Середовище зазвичай містить аміноптерин, який запобігає росту незлитих клітин мієломи.

●Скринінг та клонування
Отримані гібридомні клітини піддаються скринінгу на продукцію антитіл, специфічних до цільового антигену. Зазвичай це робиться за допомогою таких методів, як імуноферментний аналіз (ІФА), вестерн-блот, імунопреципітація та проточна цитометрія.

Після ідентифікації гібридомних клітин, що продукують антитіло, їх клонують для створення популяції ідентичних клітин. Це гарантує, що антитіло, що продукується кожною гібридомною клітиною, є ідентичним.

5. Перевірка функціональності антитіл
Alpha Lifetech проводить функціональну валідацію антитіл, таку як вестерн-блоттинг, імуногістохімія або функціональні аналізи, для характеристики моноклональних антитіл та підтвердження специфічності, афінності та функціональності антитіл.

6. Оптимізація антитіл
Очищення антитіл з культурального супернатанту за допомогою таких методів, як афінна хроматографія з білком А або білком G, а також Alpha Lifetech може запропонувати методи модифікації антитіл для покращення афінності антитіл.

7. Виробництво антитіл
Alpha Lifetech може оцінювати кандидатні антитіла для високопродуктивного скринінгу та великомасштабного виробництва.