Послуги з будівництва бібліотеки фагових дисплеїв

Alpha Lifetech має комплексну платформу фагового дисплея M13/T7 для забезпечення створення та виробництва бібліотек антитіл. Ми також можемо надати індивідуальні послуги, такі як виробництво антитіл scFv, щоб задовольнити ваші потреби.

ЗВ'ЯЖІТЬСЯ З НАМИ

Послуги з будівництва бібліотеки фагових дисплеїв

Компанія Alpha Lifetech вже багато років глибоко займається технологією фагового дисплея. Вона створила ідеальну стабільну платформу технології фагового дисплея, яка економить час на наукові дослідження або проектні дослідження та сприяє подальшому виробництву. Alpha Lifetech також може надавати клієнтам такі послуги, як виробництво антитіл VHH, виробництво антитіл ScFV та виробництво антитіл Fab.

Alpha Lifetech має комплексну платформу фагового дисплея M13/T7 для забезпечення створення та виробництва бібліотек антитіл. Ми також можемо надати індивідуальні послуги, такі як виробництво антитіл scFv та високопродуктивний скринінг антитіл, щоб задовольнити ваші потреби.

Вступ до фагового дисплею

Технологія фагового дисплею – це метод, який використовує фаги (віруси, що інфікують бактерії) для пошуку функціональних зв'язуючих молекул специфічних білків або пептидів. Методи побудови бібліотек фагових антитіл включають побудову бібліотек Fab-антитіл, побудову бібліотек scFv-антитіл, побудову бібліотек нанотіл тощо. За типами бактеріофагів їх можна розділити на системи M13, T7, T4, λ та інші. За типом бібліотеки її можна розділити на бібліотеку випадкових пептидів, бібліотеку кДНК, бібліотеку антитіл та бібліотеку білків. Технологія фагового дисплею проста в експлуатації та недорога у використанні. Однак цей метод обмежує різноманітність молекулярної генетики в бібліотеці, яка не може експресувати занадто довгі послідовності,

Наразі технологія фагового дисплею широко використовується. Серед них є значні досягнення в дослідженні та розробці нових вакцин (недорогі та ефективні синтетичні вакцини), розробці препаратів на основі антитіл (скринінг інгібіторів ферментів), передачі клітинних сигналів (скринінг модельованих епітопів) та дослідженні антигенних епітопів (отримання моноклональних антитіл).

Вступ до бактеріофага Т7

Бактеріофаг T7 — це дволанцюгова ДНК, довжина якої становить 40 кб, і вона загорнута в капсид діаметром 60 нм. З'єднувач між головкою та хвостом являє собою кільцеву структуру, що складається з кількох копій gp8. Головка та ядро бактеріофага t7 утворюють циліндричну структуру, яка зв'язується з gp8 та може з'єднувати головку та хвіст.

Рис. 1. Схематичне зображення бактеріофага Т7.(Посилання: Досягнення в системі фагового дисплею T7 (огляд))

Вступ до бактеріофага M13

Бактеріофаг M13 належить до групи ниткоподібних фагів, які разом називаються фагами Ff. Він має довжину 900 нм і ширину 6,5 нм. Він містить геном одноланцюгової ДНК (оцДНК) довжиною 6407 п.н., що складається з дев'яти генів, що кодують 11 різних білків. Серед них п'ять білків є білками оболонки, а шість білків беруть участь у реплікації та складанні фага. Найбільшу концентрацію білків оболонки має капсидний білок G8P, який складається приблизно з 2700 білкових одиниць і утворює оболонку навколо хромосоми.

Рис. 2. Схематичне зображення бактеріофага М13.(Посилання: Основи технології фагового дисплея антитіл)

Вступ до бібліотеки антитіл фагового дисплея

Відкриття антитіл стає дедалі важливішим у сучасній медицині. Існують різні підходи до виявлення антитіл, але бібліотека антитіл фагового дисплею більше використовується в медичній науці.

З 1990 року для конструювання фагових бібліотек використовуються різні формати антитіл, включаючи VH, VHH, scFv, діатіла та Fab-антитіла. scFv, що складаються зі структурних доменів VH та VL, є одноланцюговими антитілами, що використовуються для конструювання бібліотек антитіл scFv. scFv характеризується коротким періодом напіврозпаду та низькою імуногенністю. Бібліотека Fab-антитіл складається з VH, VL, CL та CH1, які можуть швидко виявляти ідеальні антитіла з високою спорідненістю. Найменша одиниця, яка може зв'язуватися з цільовим антигеном - VHH, наразі становить бібліотеку нанотіл. VHH має переваги простої структури, малого об'єму, високої розчинності, хорошої стабільності, а також легкого приготування та експресії. Бібліотеки синтетичних нанотіл (Nb) стають привабливою альтернативою імунізації тварин для стабільних, високоафінних синтетичних нанотіл. Зазвичай ці фрагменти антитіл зливаються з G3P фага M13, і шляхом клонування великої кількості генів, що кодують фрагмент антитіла, можна створити великі бібліотеки антитіл для фагового дисплею, з яких можна вибрати багато різноманітних антитіл.

Процес побудови фагової бібліотеки

Процес побудови фагової бібліотеки виглядає наступним чином: для ПЛР-ампліфікації розробляються специфічні праймери, в результаті чого отримують продукти, які ферментативно лігуються з фаговим вектором T7/M13, і рекомбінантна фагова плазміда успішно конструюється. Рекомбінантну фагову плазміду трансформують у клітини рецептора TG1, потім наносять на середовище, що містить відповідні антибіотики, і після скринінгу трансформаторів проводять розширене культивування. Після кількох циклів культивування фаг повторює час реплікації в бактеріях та успішно експресує цільовий білок або поліпептид. Потім фагова бібліотека очищається для видалення деяких домішок та незв'язаних фагів.

Варіабельні області (VH та VL) корелювали з різноманітністю антитіл, і VH та VL були вставлені у фаговий вектор разом із послідовністю, що кодує фаговий білок PIII. Після складання фагова частинка експонується та зливається з N-кінцем мінорного білка оболонки III для утворення функціонального фрагмента антитіла, отримуючи бібліотеку, що містить послідовність ДНК антитіла.

Після завершення імунізації визначали титр, а після визначення титру у тварин брали кров. З крові виділяли лімфоцити, екстрагували РНК, за допомогою ПЛР у реальному часі ампліфікували цільовий фрагмент та отримали фрагмент гена V-регіону. Ген V ампліфікували за допомогою специфічного праймера.

Створені природні бібліотеки містять слабкі імуногенні антитіла у тварин, які можуть впливати на будь-яку мішень. Фагові антитіла, що специфічно зв'язуються з антигеном, можна зібрати за допомогою методів скринінгу, які фіксують або мітять антиген.

Цільовий антиген фіксується на твердому носії, такому як лунка мікропланшета, або з'єднується з магнітною кулькою. Потім додається бібліотека фагових антитіл для зв'язування його з антигеном. Після багаторазового елюювання фаги з низькою афінністю або неспецифічні фаги змиваються, а ті, що демонструють специфічні антитіла, залишаються.

Застосування фагового дисплея

*Відкриття антитіл стає дедалі важливішим у сучасній медицині. Існують різні підходи до виявлення антитіл, але технологія фагового дисплею більше використовується в медичній науці. З 1990 року для створення фагових бібліотек використовуються різні формати антитіл, включаючи VH, VHH, scFv, діатіла та Fab-антитіла.
*Бібліотеки фагових пептидів дозволяють швидко визначати послідовність білкових епітопів і стали потужним інструментом для дослідження взаємодії між епітопами та антигенними рецепторами.
*Фрагменти антитіл зливаються з G3P фага M13, і шляхом клонування великої кількості генів, що кодують фрагмент антитіла, можна створити великі бібліотеки антитіл для фагового дисплею, з яких можна відібрати багато різноманітних антитіл.
*Система фагового дисплею T7 має багато переваг, включаючи простоту, високу безпеку, стабільність, легкість зберігання та транспортування, тому система використовується в профілактичних та терапевтичних вакцинах.
*Система фагового дисплею T7 може виявляти різні антигени, такі як поверхневі антигени патогенних мікроорганізмів та ракові антигени.

Фаг