Служба скринінгу бібліотеки фагового дисплея

Технологія скринінгу фагового дисплея застосовується в таких галузях, як трансдукція клітинних сигналів, сайти розпізнавання білків та розробка ліків, крім вивчення антигенних епітопів.

ЗВ'ЯЖІТЬСЯ З НАМИ

Служба скринінгу бібліотеки фагового дисплея

Компанія Alpha Lifetech вже багато років глибоко займається технологією фагового дисплея. Вона створила ідеальну стабільну платформу технології фагового дисплея, яка економить час на наукові дослідження або проектні дослідження та сприяє подальшому виробництву. Alpha Lifetech також може надавати клієнтам такі послуги, як виробництво антитіл VHH, виробництво антитіл ScFV та виробництво антитіл Fab.

Alpha Lifetech має комплексну платформу фагового дисплея M13/T7 для забезпечення створення та виробництва бібліотек антитіл. Ми також можемо надати індивідуальні послуги, такі як виробництво антитіл scFv та високопродуктивний скринінг антитіл, щоб задовольнити ваші потреби.

Процес створення бібліотеки фагового дисплея

Процес побудови фагової бібліотеки виглядає наступним чином: для ПЛР-ампліфікації розробляються специфічні праймери, в результаті чого отримують продукти, які ферментативно лігуються з фаговим вектором T7/M13, і рекомбінантна фагова плазміда успішно конструюється. Рекомбінантну фагову плазміду трансформують у клітини рецептора TG1, потім наносять на середовище, що містить відповідні антибіотики, і після скринінгу трансформаторів проводять розширене культивування. Після кількох циклів культивування фаг повторює час реплікації в бактеріях та успішно експресує цільовий білок або поліпептид. Потім фагова бібліотека очищається для видалення деяких домішок та незв'язаних фагів.

Методи скринінгу бібліотеки фагового дисплея

Успіх виробництва антитіл фагового дисплея головним чином залежить від бібліотек фагового дисплея антитіл, і поширеними методами фагового панінгу є твердофазний та рідкофазний скринінг. Твердофазний скринінг антигенів збагачує специфічні антитіла через 3-4 цикли елюції для отримання бібліотек фагового дисплея антитіл; Рідкофазний скринінг антигенів проводиться шляхом інкубації біотин-мічених бібліотек мішеней та антитіл фагового дисплея та захоплення зв'язаних фагів за допомогою магнітних кульок. Твердофазний скринінг споживає більше антигену, а деякі антигенні епітопи руйнуються. Рідкофазний скринінг характеризується високою ефективністю та збагаченням, але отримані антитіла є менш специфічними. Метод фагового панінгу залежить від експериментальних потреб, і всі вони матимуть певний вплив на ефект виробництва антитіл фагового дисплея.

Високопродуктивний скринінг антитіл

Розробка антитіл у сучасній медицині набула стрімких темпів. Існують різні методи розробки антитіл, але високопродуктивний скринінг антитіл частіше використовується в медичній науці. Цей процес дозволяє отримати велику різноманітність репертуару антитіл. Поєднання з традиційними методами скринінгу бібліотек антитіл може покращити якість скринінгу бібліотек фагового дисплею. Після біологічного скринінгу антитіла можна охарактеризувати за допомогою низькопродуктивного ІФА або високопродуктивного скринінгу антитіл.

Рис.1 Блок-схема, що окреслює послідовність подій від конструювання бібліотек фагових антитіл до створення моноклональних антитіл з високою спорідненістю до антигенів та низькою імуногенністю.(Джерело посилання: Технологія фагового дисплея як потужна платформа для відкриття антитіл-ліків - PMC (nih.gov))

Застереження щодо скринінгу антитілофагового дисплеюЗапобіжні заходи

Міркування щодо буфера

Вибір буферів повинен враховувати стабільність мішені, мікросередовище зв'язування та мінімальне неспецифічне зв'язування в фактичному сценарії застосування. Неспоріднені білки, неіонні детергенти та фізіологічні концентрації солей сприяють зменшенню фону. Існують також інші умови, такі як деякі мішені можуть вимагати додавання двовалентних катіонів або інших кофакторів до буфера, білкові кофактори можуть бути кофіксовані з мішенню, можуть бути додані до сортувального буфера і навіть можуть бути використані як засіб захоплення мішені.

Міркування щодо тиску

Загальні міркування щодо тиску відбору включають концентрацію цільових молекул, час зв'язування, інтенсивність промивання тощо. Інші методи підвищення тиску відбору включають використання денатурантів (таких як кислоти, сечовина та гуанідин), органічних розчинників, підвищення температури або збільшення концентрації конкуруючих лігандів або мішеней у буфері для промивання.
Серед них важливим є перший раунд скринінгу. Перший раунд скринінгу полягає у захопленні якомога більшої кількості позитивних клонів зі сконструйованої бібліотеки, видаляючи при цьому неспецифічні клони. Для забезпечення захоплення великої кількості зв'язаних фагів та збереження різноманітності бібліотеки слід використовувати мішені з пористим покриттям або велику кількість розчинних мішеней. У наступних раундах скринінгу тиск відбору слід збільшувати зі збільшенням збагачення, багаторазового промивання та збільшенням часу промивання, щоб можна було відібрати клони з високою спорідненістю.

Стратегія негативного скринінгу

Антигенні мітки та матеріали-носії. Процес скринінгу полягає у виявленні всіх речовин на антигенних кон'югатах, таких як мітки, білки злиття та допоміжні субстрати. Негативний скринінг немішеней може обмежити збагачення антитілами, відмінними від цільового антигену.
Цілі клітини, ліпосоми, нано-фосфоліпідні диски та VLP можуть бути негативно скринінговані за допомогою імітованих трансфікованих клітин або нетрансфікованих клітин під час скринінгу трансфікованих клітинних ліній.
Видалення складних сумішей антигенів. Суворий негативний скринінг може бути проведений для невідомих або складних молекул-мішеней, таких як цілі клітини або нечисті білки.
Стратегія антитіл проти специфічних ділянок антигенів полягає в елююванні антитіла, яке може конкурувати з лігандом, шляхом додавання високої концентрації лігандів, а інша - в блокуванні антитіла.

Застосування фагового дисплея

*Відкриття антитіл стає дедалі важливішим у сучасній медицині. Існують різні підходи до виявлення антитіл, але технологія фагового дисплею більше використовується в медичній науці. З 1990 року для створення фагових бібліотек використовуються різні формати антитіл, включаючи VH, VHH, scFv, діатіла та Fab-антитіла.
*Бібліотеки фагових пептидів дозволяють швидко визначати послідовність білкових епітопів і стали потужним інструментом для дослідження взаємодії між епітопами та антигенними рецепторами.
*Фрагменти антитіл зливаються з G3P фага M13, і шляхом клонування великої кількості генів, що кодують фрагмент антитіла, можна створити великі бібліотеки антитіл для фагового дисплею, з яких можна відібрати багато різноманітних антитіл.
*Система фагового дисплею T7 має багато переваг, включаючи простоту, високу безпеку, стабільність, легкість зберігання та транспортування, тому система використовується в профілактичних та терапевтичних вакцинах.
*Система фагового дисплею T7 може виявляти різні антигени, такі як поверхневі антигени патогенних мікроорганізмів та ракові антигени.

Фаг