Служба аналізу білок-білкової взаємодії
Alpha Lifetech також може надати клієнтам аналізи білків, аналіз взаємодії білків, аналіз взаємодії білок-білок (CO-IP, Western Blot, імунопреципітаційний аналіз хроматину) та аналіз функції білка для задоволення експериментальних потреб різних клієнтів.
ЗВ'ЯЖІТЬСЯ З НАМИ01
Служба аналізу білок-білкової взаємодії
Компанія Alpha Lifetech протягом багатьох років глибоко займається аналізом білків, створила надійну платформу для аналізу функцій білків та опанувала різноманітні технічні засоби для перевірки взаємодії білків, що може заощадити час на наукові дослідження або проектні дослідження, забезпечуючи стабільні результати.
Alpha Lifetech також може надати клієнтам аналізи білків, аналіз взаємодії білків, аналіз взаємодії білок-білок (CO-IP, Western Blot, імунопреципітаційний аналіз хроматину) та аналіз функції білка для задоволення експериментальних потреб різних клієнтів.
Вступ до аналізу білок-білкової взаємодії
Білки є найважливішими виконавчими молекулами в будь-якій формі життя, що реагують на інструкції, що зберігаються в генетичному матеріалі. Найчастіше білки виконують свою роботу, діючи як рольові гравці, які взаємодіють з іншими білками, що більш очевидно, коли функція білка досліджується в реальному контексті клітини. Визначення взаємодій між білками є дуже важливим для біохімічного дослідження окремого білка. Аналіз взаємодії білків поширених видів виглядає наступним чином:
Аналіз коімунопреципітації
Принцип методу коімунопреципітації полягає в змішуванні цільового білка, специфічного антитіла та магнітних кульок білка A/G для інкубації, супернатант незв'язаного білка видаляється шляхом адсорбції магнітних кульок на магнітному стійці, а магнітні кульки промиваються для видалення білка та інших домішок, якщо вони специфічно не зв'язані.
Рис.1. Схематична діаграма аналізів Co-IP.(Джерело посилання: Коімунопреципітаційний аналіз - PubMed (nih.gov))
Розтягувальний аналіз
Метод витягування полягає у фіксації відомого білка на магнітній кульці та додаванні речовини, яку потрібно виявити. Елюент виявляється для адсорбції взаємодіючих білків.
У 1988 році Сміт та ін. очистили злитий білок GST, який був застосований у аналізах типу «витягування» (pull-down analysis) і називається Gst pull-down, тобто він додає мітку GST до цільового білка, захоплює взаємодіючий білок за допомогою GSH, елюює зв'язування та перевіряє його за допомогою аналізів WB.
Рис.2. Схематична діаграма аналізів GST pull-down.(Джерело посилання: GST Pull-Down аналіз для вивчення зв'язування PIF4 in vitro - PubMed (nih.gov) )
Його метод полягає у використанні іонів металів, таких як нікель або кобальт, як середовища, очищенні білка за допомогою афінної хроматографії та елюції зв'язування за допомогою експерименту WB для перевірки.
Крім того, існують методи вилучення ДНК (аналіз зв'язування білків з ДНК), вилучення РНК (аналіз взаємодії білків з РНК) та вилучення малих молекул.
Аналіз зв'язування білків з ДНК (DNA Pulldown, Protein DNA Binding Analysis) – це метод визначення зв'язування білка з ДНК in vitro. За допомогою WB-тестів було виявлено, чи зв'язуються специфічні білки з цільовою ДНК; невідомі фрагменти ДНК, зв'язані з білками, які відомі за допомогою MS-детектора.
Аналіз взаємодії білків з РНК (RNA Pull-down, аналіз РНК-взаємодії) – це метод in vitro для визначення зв'язування РНК з білками. Чи зв'язуються специфічні білки з цільовою РНК, було виявлено за допомогою WB-аналізів; невідомі фрагменти РНК, зв'язані з білками, які відомі за допомогою MS-детектора.
Метод витягування SM (тести витягування малих молекул) може знаходити цільові білки, які специфічно зв'язуються з малими молекулами, а в поєднанні з MS можна точно скринінгувати цільові білки малих молекул, який можна розділити на метод мічення in vitro та біологічний ортогональний метод.
Експеримент Світового банку
Експеримент WB (також відомий як експеримент Western Blot або Western blot) полягає в специфічній реакції антигену та антитіла. Основний принцип полягає у розділенні денатурованих білків за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію (SDS) та перенесенні їх на твердофазний носій (наприклад, PVDF-мембрана, NC-мембрана) шляхом мембранного переносу (вологе або напівсухе обертання). Після блокування (використовуючи BSA, пахту тощо) наносять первинне антитіло для специфічного зв'язування з білком, а мічене флуоресцеїном вторинне антитіло додають після промивання плівки. Зв'язуючи друге антитіло з первинним антитілом, цільовий білок можна спостерігати за проявом кольору субстрату та хемілюмінесценцією. Зазвичай його використовують для визначення того, чи експресується певний білок у зразку, та для приблизного аналізу рівня його експресії.
Порівняння методів білок-білкової взаємодії
Аналізи з розкриттям білків подібні до аналізів Co-IP, обидва з яких належать до експериментів з виявлення взаємодії білків. Різниця між цими двома методами полягає в тому, що аналізи Co-IP отримують взаємодіючі білки відомих білків, що має певну достовірність, але не може підтвердити, чи взаємодіючі білки взаємодіють прямо чи опосередковано. Аналізи з розкриттям призначені для виявлення невідомого білка, який взаємодіє з відомим білком. Вони можуть безпосередньо підтвердити, чи взаємодіє відомий білок з виявленим білком, але не можуть знати ситуацію зв'язування in vivo.
Технологія коімунопреципітації використовується для аналізу наявності взаємодії між двома або більше білками на основі експериментів з імунопреципітації. Порівняно з іншими експериментальними методами аналізу взаємодії білків (GST Pull-down, Western Blot, аналіз імунопреципітації хроматину тощо), технологія Co-IP має вищу специфічність, чутливість та високу повторюваність, що дозволяє уникнути перешкод неспецифічного зв'язування та відобразити взаємодію білків у природному стані.
| ПДВ – Згорнути вниз | Co-IP | Світовий банк | |
|---|---|---|---|
| Перевага | *Легко керувати *Підходить для очищення різних білків | *Для аналізу взаємодії in vivo *Його можна ідентифікувати з білком нижче за течією | *Висока специфічність *Якісні та кількісні дослідження in vitro |
| Обмеження | *Можливо, неспецифічне зв'язування *Потрібна подальша перевірка взаємодії | *Сильна залежність від антитіл *Може відбуватися неспецифічне зв'язування | *Займає багато часу *Важко використовувати для великомасштабного аналізу білків |
| Приклад застосування | *Визначте взаємодії *Очищений білковий комплекс | *Вивчення передачі сигналів *Механізм захворювання | Подальший аналіз взаємодій білок-білок, білок-ДНК та білок-РНК |
Налаштовані
Налаштуйте послуги відповідно до ваших потреб
Досвід
Роки досвіду у виробництві білка
Технології
Висока якість результатів доставки
Процес експерименту
Суворий процес управління якістю
Якщо у вас виникнуть будь-які питання, будь ласка, звертайтеся до нас у будь-який час.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102