اپٹیمر کریکٹرائزیشن اینالیسس سروس

الفا لائفٹیک کئی سالوں سے آپٹیمر سے متعلق خدمات فراہم کر رہا ہے، اور فی الحال آپٹیمر کی جامع ترقی کی اسکیمیں فراہم کر سکتا ہے جیسے کہ آپٹیمر ترکیب، SELEX اسکریننگ، ہائی تھرو پٹ سیکوینسنگ، اور آپٹیمر آپٹیمائزیشن اور کریکٹرائزیشن۔ آپٹیمرز کی اسکریننگ کے لیے SELEX طریقہ کار کے فوائد کی بنیاد پر، Alpha Lifetech نے آپٹیمرز کی اسکریننگ کے لیے مزید طریقوں کو بڑھا دیا ہے۔

اپٹیمر کریکٹرائزیشن اینالیسس کا تعارف

وابستگی کی تصدیق

آپٹمائزڈ اپٹیمر وابستگی کی تصدیق اپٹیمر بائنڈنگ پرکھ کی متعلقہ تکنیکوں سے کی گئی۔ مثالوں میں Isothermal Titration Calorimetry (ITC)، Flow Cytometry (FCM)، اور Surface Plasmon Resonance (SPR)، Microfluidics، وغیرہ شامل ہیں۔ Aptamer affinity کو عام طور پر dissociation constant (KD) سے ظاہر کیا جاتا ہے، جو کہ ایک جسمانی مقدار میں مالیکیولر ری انسوسی ایبل ری ایکشن کی ڈگری کی مقدار کو درست کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ KD قدر جتنی چھوٹی ہوگی، پیچیدہ اتنا ہی مستحکم ہوگا، یعنی تعلق اتنا ہی مضبوط ہوگا۔ اس کے برعکس، KD قدر جتنی بڑی ہوگی، پیچیدہ اتنا ہی غیر مستحکم اور تعلق اتنا ہی کمزور ہوگا۔ یہ قدم آپٹیمر کی کارکردگی کی نشاندہی کرنے کی کلید ہے، اپٹیمر وابستگی کی پختگی کو یقینی بناتا ہے اور عملی ایپلی کیشنز میں اعلی تعلق اور انتخاب کے ساتھ ہدف کے مالیکیول سے منسلک ہو سکتا ہے۔

تصویر 1 اپٹیمر وابستگی کی پختگی کا عمل۔ حوالہ ماخذ:Kinghorn AB، Fraser LA، 2017۔

فنکشن کی تصدیق

وابستگی کی تصدیق کے علاوہ، آپٹیمر کے فنکشن کی تصدیق کرنے کی ضرورت ہے۔ اس میں آپٹیمر کے استحکام، مخصوصیت، اور کسی خاص ماحول میں دوسرے مالیکیولز کے ساتھ تعامل کی تصدیق کرنا شامل ہے۔ فنکشنل تصدیق کے نتائج سائنسی تحقیق اور صنعتی ایپلی کیشنز میں اپٹیمرز کی قدر کو براہ راست متاثر کریں گے۔

مخصوص تصدیق

مسابقتی تجربہ: آپٹیمر کی کسی مخصوص ہدف سے منسلک ہونے کی صلاحیت کا اندازہ اسی طرح کے دوسرے اہداف کی موجودگی میں کیا جاتا ہے۔ اگر اپٹیمر خاص طور پر دوسرے مالیکیولز کی مداخلت کے بغیر ہدف کے مالیکیول سے منسلک ہو سکتا ہے، تو یہ اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ اس کی خاصیت زیادہ ہے۔

کراس ری ایکشن تجربہ: اپٹیمر متعلقہ یا غیر متعلقہ اہداف کی ایک سیریز کا پابند ہوتا ہے تاکہ یہ دیکھا جا سکے کہ آیا یہ صرف ایک مخصوص ہدف سے منسلک ہے، تاکہ اس کی مخصوصیت کی تصدیق کی جا سکے۔

استحکام کی تصدیق

نیوکلیز انحطاط کا تجربہ: اپٹیمرز کو نیوکلیز کے مختلف ارتکاز کا سامنا کرنا پڑا اور ان کا انحطاط دیکھا گیا۔ مختلف ٹائم پوائنٹس پر انحطاط کی ڈگری کا موازنہ کرکے، اپٹیمر کی اینٹی نیوکلیز انحطاط کی صلاحیت کا اندازہ لگایا جا سکتا ہے۔

درجہ حرارت اور وقت کے استحکام کا تجربہ: اپٹیمر کو مختلف درجہ حرارت اور وقت کے حالات میں رکھا گیا تھا تاکہ اس کے ساختی اور فعال استحکام کا مشاہدہ کیا جا سکے۔ یہ آپٹیمرز کے لیے زیادہ سے زیادہ اسٹوریج اور استعمال کے حالات کا تعین کرنے میں مدد کرتا ہے۔

حیاتیاتی سرگرمی کی شناخت

مناسب طریقہ عام طور پر نیوکلک ایسڈ اپٹیمر کے مخصوص ایپلی کیشن گول کے مطابق منتخب کیا جاتا ہے۔

(1) سالماتی سطح کی جانچ: سالماتی حیاتیات کی تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے، جیسے جیل الیکٹروفورسس، ویسٹرن بلاٹ، وغیرہ، اپٹیمر کے ہدف کے مالیکیول کے ساتھ ملنے کے بعد بننے والے کمپلیکس کا پتہ لگانے کے لیے، یا آپٹیمر کی وجہ سے ہدف مالیکیول کے اظہار کی سطح میں ہونے والی تبدیلیوں کا پتہ لگانا۔

(2) سیل لیول ٹیسٹنگ: سیل کلچر ٹیکنالوجی کا استعمال کرتے ہوئے، آپٹیمرز کو ٹارگٹ سیلز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا ہے تاکہ سیل مورفولوجی، پھیلاؤ اور اپوپٹوسس جیسی حیاتیاتی تبدیلیوں کا مشاہدہ کیا جا سکے اور اپٹیمرز کی حیاتیاتی سرگرمی کا جائزہ لیا جا سکے۔

(3)جانوروں کے ماڈل کی جانچ: جانوروں کے مناسب ماڈلز میں، نیوکلک ایسڈ اپٹیمرز انجکشن یا دوائیوں کے ذریعے دیے جاتے ہیں، اور ویوو میں آپٹیمر کی حیاتیاتی سرگرمی اور حفاظت کا جائزہ لینے کے لیے جانوروں کے جسمانی اشارے اور پیتھولوجیکل تبدیلیوں کا مشاہدہ کیا جاتا ہے۔