Phage Displey Xizmatiga Kirish

Fag displeyi, fag DNKsining genetik modifikatsiyasiga asoslangan molekulyar texnika sifatida, bu parchalarni fag yuzasida namoyish etish va shu tariqa ko'p sonli variantlardan (kutubxonalardan) o'ziga xos bog'lanish xususiyatlariga ega peptid/antikor parchalarini tanlash orqali ma'lum nishonlarga qarshi molekulyar zondlarni yaratish uchun molekulyar jihatdan kuchli vositaga aylandi.

Alpha Lifetech fag displey antikorlarini ishlab chiqishda o'n yillik tajribaga ega va mijozlarimiz uchun professional antikor kutubxonasini yaratish va skrining xizmatini taqdim eta oladi. Mijozlarning ehtiyojlariga ko'ra, biz immun kutubxonalari, mahalliy kutubxonalar, sintetik kutubxonalar va yarim sintetik kutubxonalar kabi turli xil antikor kutubxonalarini taqdim eta olamiz. Antikor genlarini M13 kabi fag qoplami oqsillarining genlari bilan birlashtiradigan fag displey kutubxonasi texnologiyasi eng keng tarqalgan rekombinant antikor tayyorlash texnologiyasi bo'lib, yuqori spesifik antikorlarni ishlab chiqishda keng qo'llaniladi.

Alpha Lifetech alpaka, lama, alpaka va akulalarni va boshqalarni immunizatsiya qiladi, shunda ularning samaradorligi 10^5 ga etadi. Ma'lumotlarning haqiqiyligi va haqiqiyligini ta'minlash uchun biz mijozga samaradorlik sinov hisobotini yuboramiz. Mahalliy kutubxonalar past toksiklik va past immunogenlik afzalliklariga ega. Alpha Lifetech hayvonlarni immunizatsiya qilmasdan to'g'ridan-to'g'ri antikorlarni skrining qilish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan ko'plab tayyor mahalliy antikor kutubxonalariga ega, bu esa loyiha vaqtini qisqartiradi, mijozning sinov jarayonini tezlashtiradi va antikorning funktsional yaxlitligini kafolatlaydi.

1-rasm: Fag displeyi printsipi

Bizning Phage displey tizimimiz

M13/T4/T7 fag displey tizimining asosiy ma'lumotlari 1-jadvalda keltirilgan.

1-jadval. Turli fag displey vositalari va ularning xususiyatlari
	M13	T4	T7
Genom hajmi	6407 bp	168895 bp	39937 bp
Proteinni ko'rsatish	pVI, pIII va pVIII	SOC va HOC	gp10B
Displey hajmi	>110 kDa pIII ga teng
Displey hajmi
Displey zichligi	pIII da	SOCda
Displey zichligi	VIII-betda	HOCda
Hayot davrasi	Lizogeniya	Litik	Litik

Alpha Lfetech taqdim eta oladi

Phage Display genotip va fenotipni birlashtiradi, selektivlik va amplifikatsiyani kuchli skrining imkoniyatlari bilan birlashtiradi. Alpha Lifetech fag displey antitelolarini ishlab chiqish uchun keng ko'lamli xizmatlarni taqdim etishi mumkin.
Asosiy xizmatlarga quyidagilar kiradi: VHH antikor kutubxonasi platformasi, scFv antikor kutubxonasi platformasi, Fab antikor kutubxonasi platformasi, fag kutubxonasini qurish platformasi, fag kutubxonasini skrining platformasi va antikorlarni insonlashtirish xizmati va boshqa xizmatlar.

Antikorlarni ishlab chiqish - Alpha Lifetech

2-rasm: Faj displeyini ishlab chiqish xizmati jarayoni

Fag displey antikorlarini ishlab chiqish jarayoni

Biz hayvonlarni laboratoriyamizda ifodalangan yoki mijozlarimiz tomonidan taqdim etilgan oqsillar, jumladan, turli makromolekulyar oqsillar, peptidlar va membrana oqsillari bilan immunizatsiya qilishimiz mumkin. ELISA samaradorligini tekshirish orqali tadqiqotchilarimiz eng yaxshi immunizatsiya natijalari bilan alpakalarning qonidan PBMC izolyatsiyasi va RNK ekstraktsiyasini amalga oshirdilar. Teskari transkripsiya va genlarni kuchaytirish orqali biz genni pMESC, pComb3XSS yoki pCANTAB 5E fag vektorlari asosida yaratdik. TG1 E. coli vakolatli hujayralarini elektrotransformatsiya qilish orqali kutubxona sig'imi 10^9 dan yuqori bo'lgan fag antitelo kutubxonalarini olish mumkin. Katta kutubxona sig'imiga ega antitelo kutubxonalari yaxshi xilma-xillikka ega va affinlik bilan antitelolarni topishga yordam beradi. Antitelo kutubxonasining sifatini ta'minlash uchun biz kutubxona sig'imi va kutubxonaning kiritish tezligini tavsiflaymiz. Nihoyat, mijozlarimizga kerakli 30-50 ketma-ketlikni taqdim etish uchun kutubxonalarni ketma-ketlashtiramiz. Keyin, biz fag displey kutubxonasi skriningini o'tkazamiz. Birinchidan, antigen polipropilen mikroplastinkalarida immobilizatsiya qilinadi va 3-5 bosqichli skrining orqali zaif bog'lanish qobiliyatiga ega fag-antikorlar olib tashlanadi va antigenga bog'lanadigan o'ziga xos klonlar saqlanib qoladi. Fag displeyi uchun ijobiy klon olish uchun ELISA usuli qo'llaniladi, xamirturush displeyi uchun esa FACS usuli hujayralarni belgilangan antigenlar yordamida rekombinant antikor fragmentlarini ko'rsatish uchun ishlatiladi. Skrining orqali biz yuqori sezgirlik, o'ziga xoslik va yuqori yaqinlikka ega antikorlarni tayyorlaymiz.

3-rasm. Fag displeyidagi antikor sintezi jarayoni

Xizmat ko'rsatishning afzalliklari
XIZMAT KO'RSATISHNING afzalliklari

Alpha Lifetech faj displey texnologiyasiga chuqur sodiqdir va mijozlarga kengroq va yaxshiroq faj xizmatlarini taqdim eta oladi.

Vaqt davri va yuqori samaradorlik

Kompaniyamiz qisqa vaqt ichida qoniqarli antikorlarni qidirishi mumkin; mijozlar ehtiyojlariga muvofiq turli xil antikorlarni skrining qilish tajribalarini o'tkazishimiz mumkin.

Yuqori mahsulot sifati

Kompaniyamiz mijozlarga yuqori o'ziga xoslik va barqarorlikka ega antikorlarni tayyorlashda yordam beradi, bu esa ilmiy tadqiqot natijalarini ko'paytiradi.

Turli xil tanlovlarni taqdim eting

Bizning kompaniyamiz ko'p turdagi (inson, sichqon, quyon, alpaka va boshqalar) antikor kutubxonalarini yaratishi va turli xil (scfv, Fab, VHH va boshqalar) antikor kutubxonalarini yaratishi mumkin.

Katta sig'im

Bizning antikor kutubxonamiz 10^9 dan ortiq antikorlarni o'z ichiga olgan katta sig'imga ega

FAQ - Fag displeyining umumiy muammolari

fag displeyi bo'yicha savollar ◢

Savol.
Fag displey texnologiyasi nima?

A.
Fag displey texnologiyasi begona maqsadli genni fag kapsid oqsilining o'ziga xos holatiga kiritish va begona genni fagning normal ishlashiga ta'sir qilmasdan fag yuzasida ifodalashdan iborat. Bir necha bosqichli skriningdan so'ng, nihoyat kuchli o'ziga xoslik va yuqori biologik faollikka ega maqsadli oqsil olindi.
Savol.
Fag displey texnologiyasining afzalliklari nimada?

A.
Ushbu texnologiya yordamida yuqori sig'imli antikor kutubxonalarini yaratish mumkin. Skrining sikli qisqa, operatsion jarayon sodda va qo'llanilish doirasi keng bo'lib, maqsadli peptidlar yoki oqsillar uchun optimal ketma-ketliklarni aniqlash imkonini beradi. Virus bilan bog'liq dasturlarda tadqiqotchilar katta antikor kutubxonalarini skrining qilish orqali muhim virusli epitoplarga bog'lanadigan antikorlarni topishlari mumkin. Bu jarayon viruslarning kirishi, replikatsiyasi yoki immunitetdan qochish mexanizmlariga to'sqinlik qilishi va shu bilan kasalliklarni davolash uchun asos yaratishi mumkin.
Savol.
Gibridoma texnologiyasi va fag texnologiyasi o'rtasidagi farq nima?

A.
Fag displey texnologiyasi gibridoma texnologiyasiga qaraganda kengroq qo'llaniladi, bu esa ma'lum immunogenlarga qarshi oz miqdordagi antitelolarni ishlab chiqarish bilan cheklangan. Aksincha, fag displey texnologiyasi turli immun turlaridan olingan butun antitelo kutubxonasini taqdim etishi mumkin.
Savol.
Fag displey texnologiyasining qo'llanilishi qanday?

A.
Fag displey texnologiyasi patogen mikroorganizmlarning retseptorlarini skrining qilish, oqsillarning o'zaro ta'sirini o'rganish, hujayralar orasidagi signal uzatilishini kuzatish, hayvonlar kasalliklarini tashxislash va vaktsinalarni ishlab chiqish kabi keng ko'lamli qo'llanmalarga ega.
Savol.
Fag displey texnologiyasining istiqboli?

A.
Fag displey texnologiyasi ko'plab afzalliklarni taqdim etadi va turli sohalarda qo'llanilishi mumkin. Biroq, fag displey usuli yordamida rekombinant antikorlarni ishlab chiqishda asosiy qiyinchilik jarayonning murakkabligi va narxidir. Ushbu yondashuv kerakli antikorlarni aniqlash va tavsiflash uchun mutatsiya, klonlash va ekspressiya kabi molekulyar biologiya texnikalarini immunologik, biokimyoviy va biofizik tahlillar bilan birlashtirishni talab qiladi.

Antigen bilan bog'liq savollar ◢

Savol.
Antigen taqdimoti usullari qanday?

A.
Antigen taqdimoti juda muhim bo'g'in hisoblanadi. Antigen taqdimoti usullari asosan to'g'ridan-to'g'ri qoplangan antigen taqdimoti, bilvosita qoplangan antigen taqdimoti, butun hujayra skriningi orqali antigen taqdimoti, liposomalar, nano-fosfolipid disklar va VLPlar orqali antigen taqdimotini o'z ichiga oladi.
Savol.
Antigen taqdimotining turli turlari o'rtasidagi farqlar qanday?

A.
To'g'ridan-to'g'ri qoplama usuli nisbatan sodda, ammo antigen konformatsiyasini o'zgartirish oson va bilvosita qoplama jarayoni murakkab, ammo u antigen konformatsiyasini saqlab qolishi va taqdimot samaradorligini oshirishi mumkin. Hujayra skriningi haqiqiy sahnani in vivo simulyatsiya qilishi mumkin, ammo o'ziga xos bo'lmagan bog'lanish muammosi mavjud. Nano-fosfolipid disk kichik o'lchamga, yuqori yetkazib berish samaradorligiga va yaxshi barqarorlikka ega; VLPlar antigen bilan birlashtirilgan yoki antigen bilan o'ralgan bo'lib, bu yuqori immunogenlik va yaxshi xavfsizlikka ega va kuchli immun javobini qo'zg'atishi mumkin.
Savol.
Fag displey texnologiyasining skrining natijalariga antigen konsentratsiyasining ta'siri qanday?

A.
Agar konsentratsiya juda past bo'lsa, fag bilan bog'lanish ehtimoli kamayadi, natijada skrining samaradorligi pasayadi. Aksincha, haddan tashqari yuqori konsentratsiya nospesifik bog'lanish ehtimolini oshirishi, fon signalini oshirishi va musbat klonlarni aniqlashga xalaqit berishi mumkin.
Savol.
Skrining jarayonida antigen o'zining tabiiy konformatsiyasini saqlab qolishini qanday ta'minlashimiz mumkin?

A.
Yuqori harorat, kuchli kislota va ishqor ta'siridan qochish uchun yumshoq fiksatsiya usuli qo'llanilishi mumkin. Antigen tuzilishiga yetkazilgan zararni kamaytirish uchun bilvosita qoplama usuli va biotin-streptavidin tizimi qo'llanildi. Agar antigen membrana oqsili bo'lsa, u butun hujayralar yuzasida ko'rsatilishi yoki tabiiy membrana oqsili konformatsiyasini saqlab qolish uchun nano-disk kabi membrana muhitini simulyatsiya qilish uchun ishlatilishi mumkin.
Savol.
Fag displey texnologiyasi yordamida tekshirilgan antitelalarning antigenlarga bog'lanish o'ziga xosligini qanday tekshirish mumkin?

A.
ELISA, Western Blotting (WB) va Immunofloresans (IF) kabi odatiy tajribalardan tashqari, antikorlar va antigenlarning bog'lanish va dissotsiatsiya jarayonlarini real vaqt rejimida kuzatish uchun sirt plazmon rezonansi (SPR) va bio-qatlam interferometriyasi (BLI) aniqlash texnikalaridan foydalanish mumkin, bu esa yaqinlik va kinetik parametrlarni aniqlash imkonini beradi.

Immunitetga oid savollar ◢

Savol.
Fag displey texnologiyasida hayvonlarning umumiy immun javoblari qanday?

A.
Fag displeyi odamlar, sichqonlar, kalamushlar, quyonlar, tovuqlar, tuyalar, alpakalar, sigirlar, itlar, qo'ylar, maymunlar va akulalarni o'z ichiga olgan, ammo ular bilan cheklanmagan holda, turli xil antikor ishlab chiqaruvchi turlar uchun yuqori affinlikli monoklonal antikorlarni yaratish uchun ishlatilishi mumkin.
Savol.
Fag displey texnologiyasida turli xil hayvon turlaridan olingan antikor kutubxonalarining xususiyatlari va qo'llaniladigan stsenariylari qanday?

A.
Sichqoncha antikorlari kutubxonalarini yaratish texnologiyasi yaxshi o'rnatilgan, tejamkor va qisqa eksperimental davomiylikka ega, bu uni dastlabki antikorlarni skrining qilish va asosiy tadqiqotlar uchun mos qiladi. Quyon antikorlari kuchli yaqinlik va o'ziga xoslikni namoyon etadi, sichqoncha antikorlariga nisbatan kengroq epitopni aniqlash diapazoniga ega. Inson antikorlarini to'g'ridan-to'g'ri inson antikorlari kutubxonalaridan olish mumkin, shu bilan inson tanasiga geterologik antikorlar yuborilganda yuzaga kelishi mumkin bo'lgan immun reaksiyalarining oldini oladi. Ushbu yondashuv dori vositalarini tadqiq qilish va ishlab chiqishda, ayniqsa terapevtik antikorlarni yaratishda muhim ahamiyatga ega.
Savol.
Fag displey texnologiyasida ishlatiladigan umumiy hayvon immunogeni nima?

A.
Hayvonlarning immunogenlari odatda oqsil antigeni, polipeptid antigeni, nuklein kislota antigeni va patogen bilan bog'liq antigenga bo'linadi, ular orasida patogen bilan bog'liq antigen virus antigeni (to'liq virus zarrachasi, virus oqsili, virusning strukturaviy bo'lmagan oqsili va boshqalar), bakterial antigen (to'liq bakterial ekstrakt, hujayra devori komponenti, ajralib chiqadigan oqsil, toksin va boshqalar) va parazit antigeni kiradi.
Savol.
Immunitet reaksiyasi paytida hayvonlarda immunitetga chidamlilik masalasini qanday hal qilishimiz mumkin?

A.
Immun antigenlarni rekombinant oqsillar bilan almashtirish va yong'inga qarshi virus zarralarini viruslarning strukturaviy oqsillari bilan almashtirish orqali immunogenlarni sozlang. Eksperimental dizaynni sozlang va immun dozasini o'zgartiring.
Savol.
Fag displey texnologiyasida immunogenlarning immunogenligini qanday yaxshilash mumkin?

A.
Immunogenlikni antigenlarni sigir zardobidagi albumin kabi tashuvchi oqsillar bilan bog'lash orqali oshirish mumkin. Bundan tashqari, Freundning yordamchi moddasi va alyuminiy yordamchi moddasi kabi immun yordamchi moddalar in vivo sharoitida qolish vaqtini uzaytirish va immun hujayralarining faollashishi va ko'payishini rag'batlantirish, shu bilan immunogenlikni yaxshilash uchun ishlatilishi mumkin.

Kutubxona qurilishi bo'yicha savollar ◢

Savol.
Fag antikorlari kutubxonasi nima?

A.
Fag antikorlari kutubxonasi - bu o'zgaruvchan mintaqaviy genlarning to'liq to'plamini antikorlardan fag vektorlariga yig'ish va ularni faglar yuzasida ifodalash orqali yaratilgan turli xil fag antikorlari to'plamidir. Bu jarayon fag antikorlari kutubxonasining shakllanishiga olib keladi.
Savol.
Fag antikorlari kutubxonasini yaratish jarayoni

A.
Fag displeyining umumiy jarayoni bir nechta asosiy bosqichlarni o'z ichiga oladi: immunizatsiya qilingan hayvonlardan periferik qon mononuklear hujayralarini (PBMC) ajratib olish, umumiy RNKni ajratib olish va uni komplementar DNKga (cDNA) transkripsiya qilish, polimeraza zanjiri reaksiyasi (PCR) texnologiyasidan foydalangan holda maqsadli genni kuchaytirish, maqsadli genni fag vektoriga klonlash va vektorni ekspressiya qilish uchun xost hujayraga aylantirish. Bu jarayon yuqori affinlikli antitelolarni tezda aniqlay oladigan fag displey kutubxonasini yaratishga olib keladi. Keyinchalik, ushbu kutubxona vaktsinalar, terapevtik dorilar va diagnostika reagentlarini ishlab chiqish uchun qimmatli resurs bo'lib xizmat qilishi mumkin.
Savol.
Yuqori sifatli kutubxonani yaratishning asosiy jihatlari nimada?

A.

PBMC ning umumiy soni yetarli ekanligiga ishonch hosil qiling. RNK sifatini parchalanmasdan ta'minlang.

Transformantlarning umumiy sonini ta'minlash uchun kutubxona sig'imi odatda nazariy xilma-xillikning 10 dan 100 baravarigacha bo'lishi kerak.
Savol.
Fag antitelo kutubxonasining tasniflari qanday?

A.
Antikor kutubxonasining manbasiga ko'ra, fag antikor kutubxonalarini immun fag antikor kutubxonalari va mahalliy fag antikor kutubxonalariga ajratish mumkin. Bu ikki tur o'rtasidagi asosiy farq hayvonlar emlanganmi yoki yo'qmi, degandadir. Bundan tashqari, mahalliy antikor kutubxonalari yarim sintez yoki sintez orqali yaratilishi mumkin.
Savol.
Fag antikorlari kutubxonasining sifatini qanday baholash mumkin?

A.
Antikorlar kutubxonasi sifatini baholash uchun ikkita asosiy ko'rsatkich mavjud: saqlash hajmi va xilma-xillik. Katta saqlash hajmi yuqori xilma-xillik bilan birgalikda yuqori yaqinlik va o'ziga xoslikka ega antikorlarni samarali skrining qilishni ta'minlaydi.

Kutubxona skrining savollari ◢

Savol.
Fag antitelo kutubxonasini skrining qilish jarayoni qanday?

A.
Biologik elutriatsiya jarayonida displey kutubxonasi belgilangan nishonlar bilan inkubatsiya qilinadi va keyin reaktiv bo'lmagan faglarni olib tashlash uchun keng yuviladi. Konjugatlar odatda kislotali yoki yuqori tuzli eritma yordamida elutlanadi va keyinchalik boyitish uchun mos xost hujayralarida kuchaytiriladi. 3-5 bosqichli skriningdan so'ng yuqori affinlikka ega antitelolar olinadi.
Savol.
Fag antitelo kutubxonalarini skrining qilish uchun qanday usullar qo'llaniladi?

A.
Fag skrining usullari asosan qattiq fazali panning, suyuq fazali skrining va hujayra asosidagi skriningni o'z ichiga oladi. Tegishli skrining usulini tanlashda maqsadli molekulalarning xususiyatlari, skrining jarayonining maqsadlari va laboratoriya muhiti hisobga olinishi kerak.
Savol.
Faglarning ijobiy va salbiy skrininglari qanday?

A.
Ijobiy skrining maqsadli oqsillarga bog'lanadigan fag antitelolarini skrining qilishning eng asosiy usuli hisoblanadi. Salbiy skrining nospesifik antitelolarni yo'q qilishga xizmat qiladi. Fag antitelolarini skrining qilish jarayonida maqsadli antigen yorlig'i, materiallar yoki maqsadli antigenga strukturaviy o'xshashliklarga ega boshqa antigenlarning aralashuvi tufayli nospesifik antitelolar aniqlanishi mumkin. Bunday hollarda, salbiy skrining skrining jarayonining samaradorligini oshirishi mumkin.
Savol.
Nonspesifik antikorlarni skrining qilishdan qanday qochish kerak?

A.

Turli xil markerlar bilan belgilangan antigenlar dastlabki skrining uchun ustuvor bo'lishi mumkin yoki nospesifik antikorlar ulushini kamaytirish uchun salbiy skrining qo'llanilishi mumkin.

Ushbu vaziyatning oldini olish uchun siz tegishli muhrlash suyuqligini almashtirishni tanlashingiz yoki navbat bilan turli xil muhrlash suyuqliklaridan foydalanishingiz mumkin. Agar fon hujayra liniyasini (CHO yoki HEK293) taniydigan antitelo tekshirilsa, siz skrining yoki salbiy skrining maqsadlari uchun turli xil fon hujayra liniyalarini almashtirishingiz mumkin.
Savol.
Olingan antikorlarni qanday tekshirish va tahlil qilish mumkin?

A.
Antikorlarni tekshirish usullari odatda ELISA, Western Blotting (WB), oqim sitometriyasi, immunoprecipitation (IP), immunofloresans (IF), immunohistokimyo va boshqa turli xil eksperimental texnikalarni o'z ichiga oladi. Alpha Lifetech antikorlarni aniqlashda katta tajribaga ega va keyingi tajribalarda antikorlarning samaradorligini ta'minlaydigan professional eksperimental guruhga ega.

Agar sizda biron bir savol bo'lsa, iltimos, istalgan vaqtda biz bilan bog'laning.

Leave Your Message

Tavsiya etilgan xizmat

Antikorlarni aniqlash platformasi