Antikor muhandisligi nima?

Antikor muhandisligi yordamida antikorlarning molekulyar hajmini, farmakokinetikasini, immunogenligini, bog'lanish yaqinligini, o'ziga xosligini va effektor funktsiyasini o'zgartirish mumkin bo'ldi. Antikorlarni sintez qilgandan so'ng, antikorlarning o'ziga xos bog'lanishi ularni klinik diagnostika va davolashda juda qimmatli qiladi. Antikor muhandisligi orqali ular dori va diagnostika erta rivojlanish ehtiyojlarini qondirishi mumkin.

Antikor muhandisligining maqsadi tabiiy antikorlar erisha olmaydigan yuqori darajada o'ziga xos, barqaror funktsiyalarni loyihalash va ishlab chiqarish, terapevtik antikorlar ishlab chiqarish uchun asos yaratishdir.

Antikor muhandisligi sohasidagi keng loyiha tajribasiga ega bo'lgan Alpha Lifetech bir nechta turlar uchun moslashtirilgan monoklonal va poliklonal antikor xizmatlarini, shuningdek, fag displey antikor kutubxonasini yaratish va skrining xizmatlarini taqdim etishi mumkin. Alpha Lifetech mijozlarga samarali, yuqori darajada o'ziga xos va barqaror antikorlarni ishlab chiqarish uchun sifatli bioo'xshash antikorlar va rekombinant oqsil mahsulotlarini, shuningdek, tegishli xizmatlarni taqdim etishi mumkin. Keng qamrovli antikor, oqsil platformalari va fag displey tizimlaridan foydalangan holda, biz antikor ishlab chiqarishning yuqori va quyi oqimlarini qamrab oluvchi xizmatlarni, jumladan, antikorlarni insonlashtirish, antikorlarni tozalash, antikorlarni ketma-ketlashtirish va antikorlarni tasdiqlash kabi texnik xizmatlarni taqdim etamiz.

Antikor muhandisligining kashshof bosqichi ikkita texnologiya bilan bog'liq:

--Rekombinant DNK texnologiyasi

--Gibridoma texnologiyasi

Antikor muhandisligining jadal rivojlanishi uchta muhim texnologiya bilan bog'liq:

--Gen klonlash texnologiyasi va polimeraza zanjiri reaksiyasi

--Oqsil ifodasi: Rekombinant oqsillar xamirturush, tayoqcha shaklidagi viruslar va o'simliklar kabi ifoda tizimlari tomonidan ishlab chiqariladi.

--Kompyuter yordamidagi strukturaviy dizayn

Birinchi avlod antitelolari ximerik antitelolarni ishlab chiqarish uchun insonlashtirildi, bu yerda sichqon monoklonal antitelolarining o'zgaruvchan mintaqasi inson IgG molekulalarining doimiy mintaqasi bilan bog'landi. Ikkinchi avlod sichqon monoklonal antitelosining antigen bog'lanish mintaqasi (CDR) inson IgG ga ko'chirildi. CDR mintaqasidan tashqari, boshqa barcha antitelolar deyarli inson antitelolari bo'lib, odamlarni davolash uchun sichqon klon antitelolaridan foydalanganda inson sichqon antitelosiga (HAMA) qarshi javoblarni keltirib chiqarmaslikka harakat qilindi.

 

Fag displey kutubxonasini yaratish uchun birinchi qadam antitelalarni kodlovchi genlarni olishdir, ularni immunizatsiya qilingan hayvonlarning B hujayralaridan ajratib olish (immun kutubxonasi konstruktsiyasi), immunizatsiya qilinmagan hayvonlardan to'g'ridan-to'g'ri ajratib olish (tabiiy kutubxona konstruktsiyasi) yoki hatto in vitro antitela gen fragmentlari bilan yig'ish mumkin (sintetik kutubxona konstruktsiyasi). Keyin genlar PCR orqali kuchaytiriladi, plazmidlarga kiritiladi va mos xost tizimlarida (xamirturush ifodasi (odatda Pichia pastoris), prokaryotik ifoda (odatda E. coli), sutemizuvchilar hujayrasi ifodasi, o'simlik hujayrasi ifodasi va tayoqcha shaklidagi viruslar bilan kasallangan hasharot hujayrasi ifodasi) ifodalanadi. Eng keng tarqalgani E. coli ifoda tizimi bo'lib, u ma'lum bir kodlovchi antitela ketma-ketligini fagga birlashtiradi va fag qobig'i oqsillaridan birini (pIII yoki pVIII) kodlaydi. Bakteriofaglar yuzasida ko'rsatiladigan , Va genlarining birlashishi. Ushbu texnologiyaning asosiy maqsadi tabiiy kutubxonalarga nisbatan o'ziga xos bog'lanishga ega bo'lishi mumkinligi bilan afzalliklarga ega bo'lgan fag displey kutubxonasini yaratishdir. Keyinchalik, antigenga xos bo'lgan antitelalar biologik tanlov jarayoni orqali tekshiriladi, maqsadli antigenlar fiksatsiya qilinadi, bog'lanmagan faglar qayta-qayta yuvilib ketadi va bog'langan faglar qo'shimcha boyitish uchun yuvilib ketadi. Uch yoki undan ortiq takrorlanish bosqichlaridan so'ng, yuqori o'ziga xoslik va yuqori affinlik antitellari ajratiladi.

3-rasm: Antikor kutubxonasini yaratish va skrining

Rekombinant DNK texnologiyasi antitelo fragmentlarini yaratish uchun ishlatilishi mumkin. Fab antitelolari dastlab faqat oshqozon proteazasi tomonidan gidrolizlanib, (Fab') 2 fragmentlarini hosil qilishi mumkin, keyin ular papain tomonidan hazm qilinadi va alohida Fab fragmentlarini hosil qiladi. Fv fragmenti disulfid bog'lanishlarining yo'qligi sababli yomon barqarorlikka ega bo'lgan VH va VL dan iborat. Shuning uchun VH va VL taxminan 25KDa molekulyar og'irlikdagi bitta zanjirli o'zgaruvchan fragment (scFv) antitelosini hosil qilish uchun 15-20 aminokislotadan iborat qisqa peptid orqali bir-biriga bog'lanadi.

Kamelidae (Camel, LIama va Alpaca) dagi antikor tuzilishini o'rganish shuni aniqladiki, antikorlar faqat og'ir zanjirlarga ega va yengil zanjirlarga ega emas, shuning uchun ular og'ir zanjirli antikorlar (hcAb) deb ataladi. Og'ir zanjirli antikorlarning o'zgaruvchan domeni 12-15 kDa o'lchamdagi bitta domenli antikorlar yoki nanotanachalar yoki VHH deb ataladi. Monomerlar sifatida ular disulfid bog'lanishlariga ega emas va juda barqaror, antigenlarga juda yuqori yaqinlikka ega.

5-rasm: Og'ir zanjirli antitelo va VHH/nanobody

Hujayra erkin ifodalanishi in vitro oqsil sinteziga erishish uchun tabiiy yoki sintetik DNK ifodasidan foydalanadi, odatda E. coli ifoda tizimidan foydalanadi. U oqsillarni tez ishlab chiqaradi va in vivo sharoitida ko'p miqdorda rekombinant oqsillarni ishlab chiqarishda hujayralarga metabolik va sitotoksik yukni oldini oladi. Shuningdek, u sintez qilish qiyin bo'lgan oqsillarni, masalan, translyatsiya yoki membrana oqsillarini sintez qilishdan keyin o'zgartirish qiyin bo'lgan oqsillarni ham ishlab chiqarishi mumkin.